m ng)
Ph ng pháp này TLC đ c s d ng cho chi t xu t thô, chi t xu t phân đo n
hay tinh d u. T m TLC đ c chu n b sau đó tr i ho c nhúng vào m t h th ng ch a vi khu n ho c n m (direct bioautography) ho c đ c bao ph b i th ch và th ch gi ng vi sinh v t (overlay bioautography) [13].
L i th chính c a ph ng pháp này là k t h p v a phân tách các thành ph n chi t xu t v a xác đ nh đ ng th i nh ng giá tr ho t tính sinh h c c a chúng.
1.5 Các ph ng pháp s d ng
1.5.1 Ph ng pháp trích ly
a. Trích ly gián đo n:
Nguyên li u và dung môi đ c cho vào ngâm m t th i gian nh t đ nh chi t mixen ra, cho dung môi m i vào ngâm chi t và c th cho đ n khi n ng đ mixen đ t đ n giá tr cân b ng.
Nh c đi m: Th i gian chi t dài và n ng đ mixen th p.
u đi m: Nguyên li u ti p xúc v i dung môi nên d dàng cho vi c kh o sát các y u t nh h ng đ n hi u su t trích ly. Thi t b đ n gi n, d s d ng.
b. Trích ly liên t c:
ây đ c xem là ph ng pháp ph bi n h n do có hi u su t cao và th i gian
ng n, nó đ c th c hi n b ng cách ngâm nguyên li u trong dòng dung môi chuy n
đ ng ng c chi u ho c d i n c t i liên t c, nhi u đ t dung môi ho c mixen loãng
lên l p nguyên li u chuy n đ ng.
Nh c đi m: H s s d ng thi t b th p (45%), có th d cháy n h n khi dung môi ti p xúc v i không khí trong thi t b , h th ng tu n hoàn dung môi ph c t p, ph i
b m nhi u.
u đi m: N ng đ mixen cao, t l s d ng dung môi và nguyên li u gi m, đ ng th i mixen thu đ c s ch h n do nó đ c t l c b i l p nguyên li u trích ly.
Trong công nghi p, ng i ta s d ng c 2 ph ng pháp. Giai đo n đ u, ngâm nguyên li u trong dòng dung môi chuy n đ ng. Giai đo n hai là t i dung môi s ch ho c mixen loãng lên nguyên li u. Nh v y, có th t n d ng nh ng u đi m c a hai ph ng pháp.
1.5.1.2 Các dung môi trích ly
Tiêu chí l a ch n dung môi trích ly:
- Dung môi có kh n ng hòa tan ch n l c, t c là các c u t c n thu nh n trong m u ph i có đ hòa tan cao nh t đ i v i dung môi.
- Dung môi ph i tr v i các c u t có trong d ch trích.
- Dung môi ph i an toàn, không gây đ c h i cho ng i s d ng, không có
hi n t ng n mòn thi t b , khó cháy n .
- Nh ng dung môi ph bi n hi n nay là n c, m t s dung môi h u c và CO2 siêu t i h n.
N c là dung môi ph bi n nh t trong công ngh th c ph m. N c th ng đ c s d ng đ trích ly saccharose trong công ngh s n xu t đ ng t c c i đ ng, trích ly các ch t chi t t trà, cà phê, trích ly các ch t chi t th o m c,…
Dung môi h u c đ c s d ng đ trích ly ch t béo t th c v t trong công ngh s n xu t d u béo. Th ng dùng các ch t nh hexan, heptan hay cyclohexan đ tách béo t đ u nành, đ u ph ng, h t bông, h t h ng d ng,… Ngoài ra, còn s d ng
ethanol đ trích ly các ch t mùi, ch t màu t nguyên li u rau trái, th o m c,…
CO2 siêu t i h n ngày càng đ c s d ng r ng rãi trong s n xu t công nghi p. CO2 siêu t i h n th ng đ c s d ng đ trích ly caffeine t trà và cà phê đ t o các
lo i trà và cà phê có l ng caffeine th p. Ngoài ra, CO2 siêu tói h n còn dùng đ trích
ch t đ ng t hoa houblon và trích ly các c u t h ng t các lo i trái cây, gia v ho c các ho t ch t sinh h c t th o m c.
Do các đi u ki n thí nghi m nên chúng tôi ch n dung môi ethanol đ trích ly
các h p ch t sinh h c t nguyên li u là lá gai.
1.5.1.3 Các y u t nh h ng quá trình trích ly
Kích th c nguyên li u: kích th c càng nh thì di n tích ti p xúc gi a nguyên li u và dung môi càng l n nên vi c trích ly s nhanh h n và d dàng h n. Tuy nhiên n u kích th c nguyên li u quá nh s t n chi phí cho quá trình nghi n c ng nh trong quá trình tách pha r n l ng sau quá trình trích ly.
T l gi a dung môi và nguyên li u: v i cùng l ng nguyên li u, n u t ng l ng dung môi thì hi u su t trích ly s t ng theo do s chênh l ch n ng đ gi a các c u t c n trích ly v i dung môi càng l n. Tuy nhiên n u l ng dung môi quá nhi u s làm loãng dung d ch và chi phí cho vi c lo i tách dung môi ra kh i d ch trích s t ng lên. Do đó, chúng ta ph i luôn tính toán đ ch n ra t l phù h p.
Nhi t đ trích ly: khi nhi t đ t ng s chuy n đ ng c a các c u t nhanh h n,
do đó t c đ hòa tan và khu ch tán c a các c u t trong nguyên li u vào dung môi s
đ quá cao s d n đ n m t m t s thành ph n dinh d ng ho c các c u t h ng có trong nguyên li u đ ng th i c ng t ng t n chi phí n ng l ng.
Th i gian trích ly: N u t ng th i gian trích ly thì hi u su t chi t s t ng theo, tuy nhiên n u kéo th i gian trích ly quá dài hi u su t trích ly c ng không t ng thêm
đáng k .
1.5.2 Ph ng pháp s y
S y là quá trình s d ng nhi t đ tách n c ra kh i m u nguyên li u. Trong quá trình s y, n c đ c tách ra kh i nguyên li u theo nguyên t c b c h i ho c th ng hoa.
D a vào ph ng pháp t o ra đ ng l c s y ng i ta chia ra hai ph ng pháp s y là:
ph ng pháp s y nóng và ph ng pháp s y l nh.
Hi n nay, trong ngành công ngh th c ph m, ph ng pháp s y nóng là ph ng
pháp đ c s d ng nhi u nh t và ph bi n nh t là ph ng pháp s y đ i l u. S y chân
không là m t ph ng pháp s y th ng đ c ng d ng đ s y các v t li u có ch a hàm l ng tinh d u cao, h ng, d c ph m,… mà v n gi đ c nh ng ph m ch t t t nh t c a v t li u s y.
Nguyên lý c b n c a ph ng pháp s y chân không là s ph thu c vào áp su t
đi m sôi c a n c. N u làm gi m áp su t trong m t thi t b chân không xu ng đ n áp su t mà đ y n c trong v t b t đ u sôi và b c h i s t o nên m t dòng chênh l ch áp
su t đáng k d c theo b m t v t, làm hình thành nên m t dòng m chuy n đ ng trong
v t li u theo h ng t trong ra b m t v t. i u này có ngh a là m t áp su t nh t
đ nh n c s có m t đi m sôi nh t đnh, do v y khi hút chân không s làm cho áp su t
trong v t gi m đi và khi nhi t đ v t đ t đ n nhi t đ sôi c a n c áp su t này, n c trong v t s hóa h i và làm t ng áp su t trong v t và t o nên m t chênh l ch áp su t
h i gi a áp su t bão hòa h i n c trên b m t v t và phân áp su t h i n c trong môi
tr ng đ t v t s y, đây chính là ngu n đ ng l c chính t o đi u ki n thúc đ y quá trình
di chuy n m t bên trong v t ra ngoài b m t bay h i c a quá trình s y chân không. Và đ y, d i đi u ki n chân không, quá trình bay h i di n ra nhanh chóng và qua đó quá trình khô v t s r t nhanh, th i gian s y gi m xu ng đáng k . Bên c nh đó, nh ch s y nhi t đ th p (có th th p h n nhi t đ môi tr ng) nên nhi u tính ch t đ c
gi l i g n nh đ y đ . S n ph m s y chân không b o qu n lâu dài và ít b tác đ ng
PH N 2: V T LI U VÀ
PH NG PHÁP NGHIÊN
2.1 V t li u nghiên c u
2.1.1 a đi m thí nghi m
Nghiên c u đ c ti n hành trong phòng thí nghi m Th c ph m, phòng thí nghi m Sinh hóa, phòng thí nghi m Vi sinh – khoa Công ngh sinh h c tr ng i h c M TP.HCM, c s 3 Bình D ng.
2.1.2 i t ng thí nghi m
Lá gai: s d ng b ph n lá tr ng thành, m u đ c thu t i v n thu c tr ng i h c M , Tp. H Chí Minh, c s 3, Bình D ng. 2.1.3 D ng c - thi t b a. D ng c − Ph u − Gi y l c 0,45 mm − Bercher − Erlen − ng đong 50ml, 100ml, 500ml − ng nghi m − a khu y − Bình đnh m c 10ml, 25ml,50ml, 100ml, 500ml − Pipet 2ml, 5ml, 10ml − Thau nh a − a petri − Nhi t k − Máy xay − B p đi n
− Máy l c chân không − Máy cô quay
− Máy UV-Vis − T s y − Các d ng c khác b. Hóa ch t − Ethanol 95% − FeCl3 5% − NaOH 10% − AlCl3 2% − Dung d ch DPPH − Na2CO3 − Acid gallic
− Thu c th Folin – ciocalteu
2.1.4 Các ph ng pháp phân tích
B ng 2.1: B ng các ph ng pháp phân tích
Ch tiêu Ph ng pháp Hóa ch t
Hàm l ng m S y đ n kh i l ng không đ i
Hàm l ng tro Nung tro
nh tính flavonoid Th v i FeCl3 FeCl3 5%
nh l ng polyphenol t ng
Ph ng pháp Folin - ciocalteu Acid galic
Flin – ciocalteu Na2CO3
Ho t tính ch ng oxy hóa Ph ng pháp DPPH DPPH Methanol
2.2 Ph ng pháp nghiên c u
2.2.1 Quy trình s n xu t d ki n
Hình 2.1: S đ quy trình s n xu t trà túi l c lá gai d ki n