• Đổ gel
Chú ý: Polyacrylamide là chất độc cho thần kinh. Vì vậy không được hít và uống. khi dính vào nên rữa tay ngay
Chuẩn bị đổ một gel có kích thước 100*100*0.75mm có nồng độ acrylamide là 10%.
a. Gel tách.
• Cho các thành phần sau theo thứ tự vào becher 50ml sạch :
- Acrylamide 2 ml
- SDS 50 µl
- Nước cất 1.7 ml
- TEMED 5µl
- Fersulfatamonium 50 µl Sau khi cho Amonium persulfate 10% vào, lắc nhẹ ống Falcon vài lần (tránh tạo bọt khí), dùng pipette Pasteur hoặc pipetteman bơm dung dịch gel vào khuôn, đổ gel sao cho mức dung dịch gel cao hơn 7cm( tránh tạo bọt khí trong khuôn gel). Sau đó, nhẹ nhàng đặt một lớp nước cất lên trên lớp gel để mặt gel được phẳng. chờ gel
đông( khoảng 20-30 phút) b. Gel gom
Cho các thành phần sau theo thứ tự vào một Becher50ml khác:
Acrylamide 0,68 ml Tris-HCl1,5M ph6,8-0,4%SDS 1.25 ml SDS 50 µl Nước cất 3.05 ml TEMED 5 µl Fersulfatamonium. 50µl
2. chuẩn bị mẫu và chạy điện di.
Dùng pipetman 10µl nạp mẫu vào các giếng rồi chạy điện di ổn định dòng: 100 V.Sau khi điện di, nhuộn gel với dung dịch nhuộm đã chuẩn bị trước. Sau đó giải nhuộm bằng cách ngâm gel trong dung dịch giải nhuộm cho đến khi gel trở nên trong suốt không màu.
4. Kết quả:
a. Xác định trọng lượng phân tử protein
− Đo khoảng cách di chuyển của các band protein
Khoảng cách di chuyển từ gel phân tách tới vạch màu cuối cùng: 6.2
Giếng 1 Giếng 2 Giếng 3
0.5 1.5 2.2 1.1 1.9 2.5 1.5 2.3 3.1 2.2 2.5 2.5 3.1 3.1
b. Tính giá trị Rf
− Giếng 1:
− Giếng 3: