ở đây Cs là nồng độ chất tan trong pha tĩnh, Vs là thể tích của pha tĩnh, Cm là nồng độ của chất tan trong pha động và Vm là thể tích của pha động.
Tỉ số Cs/Cm là tỉ số nồng độ của chất tan trong pha tĩnh và pha động. Nếu cột được chuyển động đủ chậm để đạt cân bằng, tỉ số Cs/Cm là hệ số phân bố, K, được giới thiệu trong chương chiết. Do đó, chúng ta có thể biểu diễn phương trình 9-4 dưới dạng:
k’ = K = = (9-5)
liên quan đến thời gian lưu tới hệ số phân bố và thể tích của pha tĩnh và pha động. Do
, sự lưu tương đối có thể diễn đạt:
α =
= = (9-6)
Điều này có nghĩa là sự lưu tương đối của hai chất tan tỉ lệ với tỉ số của hệ số phân bố của chúng. Mối liên hệ này là cơ sở vật lý của phương pháp sắc ký.
Thể tích lưu,Vr, là thể tích của pha động cần thiết để rửa giải một chất tan cụ thể ra khỏi
cột:
Thể tích lưu: Vr = tr×uv (9-7)
ở đây uv là tốc độ chảy của pha động (thể tích trên đơn vị thời gian). Thể tích lưu của một chất tan cụ thể là không đổi trong một phạm vi của tốc độ chảy.
9.4. Hiệu quả tách
9.4.1. Độ phân giải
Các chất tan chuyển động qua cột sắc ký có xu hướng phân bố như đường cong Gauxơ với độ lệch chuẩn σ (hình 9-6). Thời gian sử dụng để di qua cột càng dài, thì pic sắc ký càng tù. Thông
7
thường người ta đo độ rộng ở độ cao bằng một nửa chiều cao pic w1/2. Từ phương trình đường cong Gauxơ
có thể thấy là w1/2 = 2.35σ và w = 4σ.
Hình 9-6. Đường cong Gauxơ lý tưởng để đo w và w1/2. Các giá trị của w là thu được bằng cách ngoại suy các tiếp tuyến với các điểm uốn xuống đường cơ sở.
Hình 9-7. Độ phân giải của các pic Gauxơ có diện tích và biên độ bằng nhau. Đường nét đứt cho thấy các pic riêng biệt và các dòng liền là tổng của hai đỉnh pic. Phần chồng sắc ký đồ là phần bóng mờ.
Trong sắc ký, độ phân giải của hai pic với nhau được định nghĩa là:
Độ phân giải =
8
ở đây, Δtr hay ΔVr là sự tách giữa hai pics (đơn vị thời gian hay thể tích) và wav là độ rộng trung bình của hai pic. Ngoài ra, độ phân giải có thể biểu diễn qua việc sử dụng w1/2av chiều rộng tại nửa chiều cao của đỉnh đường cong Gauxơ. Hình 9-7 cho thấy sự chồng chéo của hai đỉnh với mức độ khác nhau của độ phân giải. Đối với phân tích định lượng, độ phân giải là > 1,5 là điều trong đợi.