Những thử nghiệm đầu tiên về thụ tinh nhân tạo cho bò đã bơm tinh vào âm đạo, song tỷ lệ thụ thai thấp. Một vài cải tiến về sau đã thành công với việc TTNT theo phương pháp panh mỏ vịt và tinh dịch được bơm vào trong cổ tử cung. Tuy nhiên, áp dụng kỹ thuật trực tràng-âm đạo thì tỷ lệ thụ thai nhìn chung mới được tăng lên rõ rệt.
Trong kỹ thuật trực tràng-âm đạo, dụng cụ thụ tinh được đưa vào phía trong âm đạo và được dẫn qua cổ tử cung nhờ sự điều khiển của bàn tay đeo găng đưa vào trong trực tràng.
Quy trình dẫn tinh cọng rạ theo phương pháp trực tràng-âm đạo có thể áp dụng như sau:
1. Cố định con cái cần phối vào giá cố định. Lắp các dụng cụ dẫn tinh (xem phần trên).
2. Đeo găng tay và bôi trơn găng tay bằng chất bôi trơn, nước hoặc xà phòng. Cố gắng giữ tay cầm dụng cụ dẫn tinh càng khô càng tốt (đừng bao giờ lắp súng dẫn tinh với tay đeo găng).
3. Giữ súng (hay dẫn tinh quản) đã nạp tinh bằng mồm. Như vậy cả hai tay đều được tự do. Tránh để tiếp xúc giữa súng dẫn tinh với bất kỳ vật nào gần vùng dẫn tinh. Sự nhiễm bẩn có thể gây nên nhiễm trùng và làm giảm cơ hội thụ thai.
4. Nâng đuôi bò lên, chụm đầu các ngón tay thành hình nón với chuyển động xoáy nhẹ nhàng đưa bàn tay đeo găng vào trong trực tràng. Moi phân ở trực tràng ra, xem xét thêm niêm dịch, niêm mạc âm đạo, cổ tử cung. Xác định đúng vị trí cổ tử cung.
Lưu ý: Không được dùng sức cho tay bằng được vào trong trực tràng vì như vậy có thể làm thủng hoặc rách, kết quả có thể dẫn đến chết bò.
5. Kiểm tra để chắc chắn rằng bò không có chửa.
6. Nhẹ nhàng thả cổ tử cung và tử cung. Loại bỏ tất cả các vết phân và nước từ âm hộ với khăn giấy hoặc vải mềm. Mở các ngón tay đeo găng và kéo tay về phía sau. Đồng thời đẩy cổ tay xuống và sang phía bên trái để mở mép âm hộ. Súng dẫn tinh lúc này có thể đưa vào và nguy cơ nhiễm khuẩn sẽ ở mức thấp nhất.
7. Đầu súng dẫn tinh phải được đưa vào với góc nghiêng xuống 300 để đưa vào dọc theo mép trên của âm hộ nhằm tránh đưa nhầm vào lỗ niệu đạo và bóng đái vì lỗ này nằm phía đáy của âm đạo.
8. Nhẹ nhàng đưa súng dẫn tinh về phía trước đến khi chạm vào một vật cứng, dấu hiệu đã tới cổ tử cung. Nếu súng dẫn tinh bị giữ trong nếp gấp âm đạo, lúc này có thể đẩy cổ tử cung ra xa vào phía trong để duỗi thẳng nếp gấp đó.
9. Bằng cách điều chỉnh cổ tử cung và nhẹ nhàng ấn lên súng, có thể dẫn đầu súng qua cổ tử cung và vào trong tử cung. Đầu súng có thể sờ thấy qua thành mỏng của tử cung. Súng dẫn tinh không được đưa quá xa về phía trước mà chỉ để vừa qua cổ tử cung (tối đa là 1cm).
Với những bò phối giống lại, vị trí của súng chỉ ở giữa cổ tửc ung bởi vì một số bò có chửa có thể động dục lại sau 3 và 6 tuần. Nếu phối tinh sâu vào trong tử cung có thể nguy hiểm trong trường hợp này. Dẫn tinh ở giữa cổ tử cung là an toàn hơn.
10. Bơm từ từ một nửa tới 2/3 lượng tinh vào thân tử cung, phần tinh còn lại ở giữa cổ tử cung. (Đối với những bò phối lại lại, bơm toàn bộ tinh vào giữa cổ tử cung).
11. Rút súng ra khỏi đường sinh dục và mát xa tử cung, cổ tử cung vài giây nhằm kích thích tiết oxytoxin. Thao tác thô bạo sẽ làm cho bò khó chịu, gây tiết adrenalin làm mất tác dụng của oxytocin.
12. Nới lỏng vòng khoá của súng, nhưng đừng để nó trượt vào phần bị bẩn của vỏ súng. Rút vỏ súng ra khỏi nòng súng. Cọng rạ sẽ lấy ra cùng với vỏ súng. Không được vứt bỏ vỏ súng cùng cọng rạ cho đến khi ghi chép xong sổ sách. Đốt vỏ súng và cọng rạ để phòng tránh lây nhiễm bệnh.
13. Thả bò ra khỏi giá hoặc đường rào ngăn.
14. Tiến hành các biện pháp vệ sinh cá nhân như rửa trong nước sát trùng, làm sạch ủng. Bảo dưỡng dụng cụ đúng cách. Tháo súng để lau chùi vệ sinh bằng cồn methylen.
Những sai sót thường gặp trong TTNT
Nhiều dẫn tinh viên (cả mới lẫn lâu năm) thường mắc phải những sai sót nghiêm trọng sau đây:
a. Để lộ tinh ra ngoài quá lâu
Tinh đông lạnh cần bảo tồn nghiêm ngặt ở nhiệt độ-800C. Nếu nhiệt độ của liều tinh được nâng lên cao hơn nhiệt độ này rồi được đông lạnh trở lại, tinh trùng sẽ bị hỏng.
Tránh nâng giỏ đựng cọng rạ lên khỏi vạch tuy't nitơ ở cổ bình chứa. Dùng kẹp để gắp cọng rạ và thao tác càng sâu bên trong bình càng tốt. Đừng bao giờ lấy cọng rạ ra ngoài để xem tên hay số hiệu bò đực giống. Xác định tinh dịch bằng cách đánh dấu trên các cóng con đựng cọng rạ hoặc ghi số trên bình chứa. Nếu cần kiểm tra lẻ một cọng rạ nào, dùng kẹp gắp nó và đặt dưới mực nitơ lỏng. Đặt cóng con đựng cọng rạ trong một chậu nitơ và đảm bảo nitơ ngập toàn bộ cọng rạ. Kéo cọng rạ ra khỏi cóng nhưng vẫn giữ nó dưới mặt nitơ. Nhấc cọng rạ lên gần mặt nitơ để kiểm tra. Không được nhấc cọng rạ lên khỏi mặt nitơ.
Luôn luôn đặt cóng trở về vị trí cũ ngay sau khi lấy cọng rạ ra. Lập tức thay nắp đậy.
Các thao tác cần phải nhanh, chính xác khi lấy tinh đông lạnh.
Không bao giờ để cho mức nitơ thấp xuống bên dưới miệng cóng đựng cọng rạ. Điều này tạo một khoảng an toàn và tránh cho cóng đựng tinh không nổi lên và trôi dạt ra khỏi giỏ đựng khi rót bổ sung nitơ vào bình chứa.
Không bao giờlấy tinh ra khỏi bình chứa trước khi cố định bò cái. b. Bơm tinh không đúng vị trí
Dẫn tinh viên có thể khó hoặc không thể lách được súng dẫn tinh qua cổ tử cung, chủ yếu là do thiếu kinh nghiệm. Một sai lầm phổ biến hơn là đưa súng dẫn tinh vào quá sâu trong tử cung do không để ý.
Kết quả thụ thai tốt nhất đạt được nếu bơm 1/2 đến 2/3 lượng tinh vào trong thân tử cung, và bơm lượng tinh còn lại vào giữa cổ tử cung.
Vì thân tử cung chỉ dài 2 đến 5cm nên phải bơm ngay khi súng dẫn tinh vừa qua khỏi cổ tử cung. Bơm tinh tại thân tử cung sẽ tạo điều kiện dễ dàng cho tinh trùng nhanh chóng di chuyển đến cả 2 ống dẫn trứng.
Tinh trùng được bơm vào cổ tử cung sống lâu hơn tinh trùng được bơm trong thân tử cung. Do đó, bơm một phần tinh trùng trong cổ tử cung sẽ có lợi đối với những bò cái mới động dục và những con rụng trứng muộn.
Cho súng dẫn tinh vào quá sâu trong tử cung sẽ làm giảm tỉ lệ thụ thai vì: Hầu như toàn bộ tinh trùng sẽ vào trong một sừng tử cung, như vậy tinh trùng không có cơ hội đi vào cả hai ống dẫn trứng.
Có thể làm rách nội mạc cực kỳ mỏng mảnh, cho dù việc cố định tử cung được tiến hành cẩn thận. Máu là chất diệt tinh trùng.
Dùng lực để khắc phục khó khăn khi đưa súng dẫn tinh đi qua cổ tử cung thường là nguyên nhân làm rách nội mạc. Điều này có thể gây nên vô sinh do kết dính. Có thể dùng cách ép ngón trỏ và ngón cái lên súng dẫn tinh là cách tốt nhất.
Cách tốt nhất để kiểm tra vị trí của súng dẫn tinh là dùng ngón trỏ và ngón cái sờ qua thành của thân tử cung t ừhai phía hoặc dùng ngón trỏ sờ từ phía dưới.
Khi sờ súng dẫn tinh không nên đặt đầu ngón trỏ lên phần vách mềm của tử cung tại vị trí đầu súng vì ngón tay có thể ấn đầu súng lún vào vách tử cung và gây chảy máu.
Thao tác thô bạo và thi'u kỹthuật có th ểlàm cho trực tràng phồng lên, sẽ khó sờ được cổ tử cung một cách tốt nhất. Để loại bỏ tình trạng này, dùng 1 hoặc 2 ngón tay cho vào vòng thắt phía sau của chỗ phồng rồi nhẹ nhàng mat xa. Làm như thế sẽ kích thích trực tràng nhu động để đẩy khối khí trong quả bóng ra ngoài cùng với một ít phân, làm cho thành trực tràng dãn ra, tạo cơ hội thuận lợi để người dẫn tinh nắm cổ tử cung được dễ dàng. Cũng có thể dùng cách này để loại bỏ phân ra khỏi trực tràng.
c. Lắp cọng rạ vào vỏsúng không khít
Nếu miệng cọng rạ không được lắp khít vào vỏ súng, một lượng tinh sẽ chảy vào trong vỏ và có thể vào trong nòng súng dẫn tinh. Như vậy là giảm số tinh trùng có khả năng thụ tinh. Hãy kiểm tra dụng cụ sau khi dẫn tinh để đảm bảo rằng cách lắp cọng rạ vào súng dẫn tinh là đúng kỹ thuật.
Sau khi lắp, cần kiểm tra cẩn thận miệng của vỏ bọc có bị vỡ không. Có những trường hợp do vỏ bọc bị vỡ nên khi bơm tinh, cọng rạ cũng được đẩy vào đường sinh dục bò cái.
Vỏ bọc nếu để dưới ánh nắng sẽ giòn, nứt và co lại. Những vỏ bọc kém cần được loại bỏ.
Cũng có thể tinh bị chảy ngược trở lại âm đạo và tinh được phân bố không đều nếu pittông được đẩy nhanh và không cẩn thận. Nếu không nới lỏng nút bằng cách vê giữa 2 ngón tay trước khi lắp có thể làm cho pittông khó đẩy.
d. Quên mở âm môn
Mở âm môn trước khi đưa súng vào là điều quan trọng nhất để giữ gìn vệ sinh. Cho dù có rửa sạch đến đâu, âm môn cũng không vô trùng. Do đó vi khuẩn có thể đi thẳng vào tử cung nếu không mở âm môn đúng cách.
Đa số trường hợp dùng cổ tay ép về phía sau, xuống dưới và sang trái (nếu người đang thao tác dùng tay trái để khám trực tràng), sẽ làm hé mở âm môn đúng cách.
Đối với những con bò khó thao tác có thể dùng các phương pháp sau: •Kéo cổ tử cung về phía sau khi ép cổ tay.
•Xoa bàn tay nhẹ nhàng tới lui trong trực tràng một số lần trước khi ép cổ tay.
•Nắm giữ cổ tử cung và thân tử cung trước khi định mở âm môn.
Chú ý:Kéo lùi cổ tử cung về phía sau khi cổ tay sẽ làm tăng kh ảnăng đưa súng
dẫn tinh vào lỗ niệu. Cần đặc biệt chú ý giữ cho súng dẫn tinh được đưa vào ch o góc 30 0dưới đường nằm ngang. Khi kéo cổ tử cung về phía sau cũng sẽ tạo nên những nếp gấp trong âm đạo. Do đó cần phải đẩy cổ tử cung về phía trước khi súng dẫn tinh được đưa vào tiền đình của âm đạo.