* Chuẩn bị
- Huyết thanh gà:
Bắt ngẫu nhiên một số gà ñã ñược tiêm phòng vacxin Newcastle. Lấy máu cánh, chắt huyết thanh ñể riêng từng con ñể kiểm tra kháng thể.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 40 - Kháng nguyên: là virus Newcastle ñã ñược xác ñịnh qua phản ứng ngưng kết hồng cầu gà và ñược pha ở hiệu giá chứa 4 ñơn vị ngưng kết hồng cầu ( 4 ñơn vị HA)
- Hồng cầu gà 1% chuẩn bị nhưở phản ứng ngưng kết hồng cầu gà * Phương pháp tiến hành phản ứng
Dùng khay nhựa 96 giếng, ñáy tròn ( gồm 8 hàng ngang, mỗi hàng có 12 giếng)
Sau khi cho nước sinh lý và huyết thanh (theo sơ ñồ), trộn ñều rồi chuyển 0.025 từ giếng số 1 sang giếng số 2, trộn ñều và chuyển sang giếng số
3 và cứ làm vậy cho tới giếng số 10 thì bỏñi 0.025
Sau bước cho virus Newcastle vào các giếng, cần ñể trong 5- 10 phút
ñể kháng thể trung hòa virus
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 41 ðối chứng Ô giếng số Nguyên liêu 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 + _ Nước sinh lý 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.05 Huyết thanh gà 0.025 ðộ pha loãng HT 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1/24 Virus Newcastle (4 ñơn vị HA) 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 ðể yên trong 5 – 10 phút Hồng cầu gà 1% 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 42
ðọc kết quả sau 15 – 30 phút: Nếu trong huyết thanh của ga có chứa kháng thể kháng virus Newcastle thì kháng thể này sẽ trung hòa virus Newcastle, do ñó không còn virus ñể làm ngưng kết hồng cầu gà. Hàm lượng kháng thể càng cao thì khả năng trung hòa virus càng lớn và ngược lại.
Căn cứ vào hiện tượng ngưng kết hồng cầu của phản ứng, có thể xác
ñịnh ñược hàm lượng kháng thể kháng Newcastle có trong huyết thanh gà. Ví dụ: Hiện tượng ngưng kết xuất hiện từống thứ 6 trở ñi ( giống ống ñối chứng dương) thì kết luận: ở ñộ pha loãng huyết thanh (kháng thể) từ 1/2 - 1/32 có khả năng ức chế ngưng kết hồng cầu gà của virus Newcastle hay hàm lượng kháng thể của gà từ 1/2- 1/32 có khả năng trung hòa hết virus Newcastle cường ñộc