- Nước trứng
- Hồng cầu gà 1% ñể làm phản ứng HA
- Phôi gà ấp 9 – 11 ngày tuổi, lấy từ trại gà không có bệnh Newcastle - Bộ dụng cụ tiến hành làm phản ứng HA, HI
- Bơm tiêm, Micropipet, kim tiêm ñể tiêm trứng
- Các dụng cụ, thiết bị (máy ấp, tủấm, tủ sấy…) hóa chất khác phục vụñề tài
2.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.1. Lập phiếu ñiều tra ñể chủñộng thu thập thông tin liên quan ñến nội dung nghiên cứu dung nghiên cứu
2.4.2. Phương pháp nuôi cấy phân lập virus Newcastle từ bệnh phẩm (óc gà nghi bệnh) nghi bệnh)
ðể xác ñịnh virus Newcastle trong các mẫu bệnh phẩm (óc gà) lấy từ ñàn gà bị bệnh, tiến hành nuôi cấy phân lập trên phôi gà 9-11 ngày tuổi ñang phát triển
+ Phương pháp tiến hành tiêm virus vào xoang niệu mô
Não của gà nghi mắc bệnh ñược nghiền nhỏ, sau ñó pha huyễn dịch bệnh phẩm theo tỷ lệ 1/10 với nước sinh lý có kháng sinh. Ly tâm lấy nước trong ở
bên trên tiêm vào xoang niệu mô của phôi gà 9 – 11 ngày tuổi, mỗi trứng 0.2ml
Phôi gà 9 - 11 ngày, soi trứng ñánh dấu buồng hơi và vị trí tiêm cách xa thai và mạch máu. ðặt trứng lên giá, sát trùng cồn iốt phần ñầu buồng hơi và
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 38 vị trí tiêm. Lấy dùi chọc thủng một lỗ ở buồng hơi và một lỗ ở nơi tiêm . Dùng bơm tiêm nhỏ 1ml, có khắc 1/10 và kim nhỏ, ñâm kim hơi thẳng góc với quả trứng, rồi bơm 0,2ml huyễn dịch óc gà nghi mắc bệnh Newcastle, xong lấy parafin gắn cả hai lỗ lại. Sau ñó cho vào ấp trong tủấm 370C. Cứ 24 giờ, 36 giờ, 48 giờ kiểm tra xem thai còn sống hay ñã chết. Nếu thai chết, cho vào tủ lạnh 0 – 4 0C trong 4 giờ ñể mạch máu nhỏ lại, tránh xuất huyết, rồi mổ
trứng lấy nước trứng trong ñể kiểm tra sự có mặt của virus Newcastle + Phương pháp mổ trứng hút nước trứng
ðặt quả trứng vào giá mổ, ñầu to quay lên phía trên. Dùng bông cồn iốt sát trùng phần vỏ xung quanh buồng hơi. Dùng cán dao mổ hoặc cán kẹp sắt gõ nhẹ cho dập vỏ trứng, sau ñó dùng ñầu cặp sắt chọc thủng vỏ trứng và bẻ
vỏ trứng theo xung quanh buồng hơi. Dùng cặp sắt chọc nhẹ cho thủng màng mềm và gắp bỏ ra. Dùng ống hút pastơ chọc vào, chú ý không ñược chọc sâu vào túi lòng ñỏ hoặc chọc vào thai, nên chọc ñểñầu ống hút hơi chếch về phía vỏ trứng và hút nước trứng ra. Nước trứng hút ñược phải trong, dùng nước trứng này làm phản ứng ngưng kết hồng cầu gà và phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà
Sau khi lấy nước trứng xong, ñổ phôi ra ñĩa lồng quan sát bệnh tích phôi
2.4.3. Phương pháp kiểm tra virus trong nước trứng sau gây nhiễm bằng phản ứng HA (Haemagglutination)