* Nguyên tắc:
- Nuơi mơ thực vật bị nhiễm nấm bệnh trên mơi trường nuơi cấy phù hợp để nấm phát triển mạnh mẽ tạo thành khuẩn lạc, nhờ đĩ tách riêng chúng. * Cách tiến hành:
- Các thành phần gây bệnh ở thực vật tập trung trên lá cây hoặc trên vỏ cành cây con và quả. Những mẫu đĩ được đưa tới PTN làm sạch dưới vịi nước chảy, sau đĩ khử trùng bề mặt bằng Clorox 10%.
- Cắt mảnh lá rộng 1-2mm2 chứa một nửa mơ sạch và một nửa mơ bệnh, sau đĩ ngâm trong Clorox 10% trong 5 phút
- Cấy mơ đã khử trùng bề mặt trên mơi trường WA, và giữ ở nhiệt độ phịng.
- Quan sát khuẩn lạc của nấm mốc mọc lên trong mơi trường đĩ và cấy chuyển nhiều lần sang mơi trường WA hoặc PDA cho đến khi tạo được canh trường thuần khiết.
- Các bước trên thực hiện trong box cấy vơ trùng Sơ đồ tiến hành: H2
- Phân lập được các chủng nấm gây bệnh trực tiếp từ mơ thực vật.
3.Phương pháp pha loãng
* Nguyên tắc:
- Nuơi cấy dung dịch loãng chứa VSV ở các nồng độ khác nhau trên mơi trường phù hợp để tạo thành các khuẩn lạc. Nuơi cấy tách riêng các khuẩn lạc đĩ để thu được các chủng nấm riêng biệt.
* Cách tiến hành
- Cho 1g đất mẫu vào trong ống nghiệm đã khử trùng
- Thêm 10ml nước cất khử trùng để hồ tan đất sau đĩ lắc đều trong 20- 30 phút.
- Pha lỗng mẫu đất đã hồ tan trong nước cất khử trùng và cấy lên mơi trường thạch thích hợp, mỗi độ pha loãng lấy 0.1ml.
- Giữ ở nhiệt độ 24-30oC trong vài ngày và đếm khuẩn lạc.
- Cấy chuyển nhiều lần trên mơi trường thích hợp để tạo ra khuẩn lạc thuần khiết
- Các bước trên thực hiện trong box cấy vơ trùng Sơ đồ tiến hành: H3
* Phạm vi ứng dụng: - Phân lập VSV trong đất
- Xác định hàm lượng VSV trong đất