I.Tổng quan
Mỗi loại cây đều cĩ một hệ vi sinh vật đặc trưng cho cây đĩ. Nghiên cứu về hệ vi sinh vật tham gia vào sự sinh trưởng, phát triển cũng như duy trì nịi giống ở thực vật là một trong những nội dung quan trọng giúp cho việc nâng cao sức sống, năng suất cũng như phẩm chất tốt của cây trồng.
*Nhĩm vi sinh vật gây bệnh sống nhờ vào chất hữu cơ của thực vật đang sống, chúng tiết ra các hợp chất phân huỷ mơ và tế bào thực vật làm cây chết (khác với nhĩm hoại sinh- sống trên những tế bào thực vật đã chết). Vi sinh vật gây bệnh cĩ khả năng tồn tại trong đất hoặc trên tàn dư thực vật từ vụ này qua vụ khác dưới dạng bào tử hoặc các dạng tiềm sinh khác tạo thành nguồn bệnh tiềm tàng. Từ đĩ chúng được phát tán nhờ nước mưa, giĩ, dụng cụ lao động, động vật và người, đặc biệt là nhờ cơn trùng mơi giới. Qua các con đường đĩ chúng lây lan sang cây khoẻ và bắt đầu nảy mầm, xâm nhiễm vào cây khi gặp điều kiện thuận lợi. Quá trình hoạt động của vi sinh vật gây bệnh làm cho cây bị thay đổi các đặc tính sinh lý, sinh hố sau đĩ thay đổi về hình thái, cấu tạo tế bào và cuối cùng là xuất hiện những triệu chứng bệnh như đốm trên lá, trên thân…
Nấm chỉ chiếm khoảng dưới 1% tổng số vi sinh vật trong mơi trường sống của thực vật nhưng lại cĩ những ảnh hưởng lớn đến sự sinh trưởng, phát triển bình thường của hầu hết các loại cây trồng.
Cũng như các vi sinh vật gây bệnh khác nấm gây bệnh là một trong những nguyên nhân chính gây nên sự sụt giảm năng suất, chất lượng, tàn phá mùa màng.
Phần lớn nấm gây bệnh cĩ hình thức sinh sản bằng bào tử và cĩ vịng đời ngắn do đĩ chúng lây lan với một tốc độ vơ cùng lớn và rất khĩ ngăn chặn. Chính vì vậy, việc phát hiện, nghiên cứu nấm bệnh là một nội dung vơ cùng quan trọng giúp cho việc tìm ra các biện pháp phịng ngừa, tiêu diệt và ngăn chặn sự lây lan của chúng, bảo vệ mùa màng.
*Để tránh bệnh cho cây người ta sử dụng nhiều biện pháp hố học, sinh học cũng như các biện pháp tổng hợp rất phong phú. Ngày nay, các biện pháp hố học bị hạn chế do những tác động phá hoại sự cân bằng sinh thái hay gây ơ nhiễm mơi trường của chúng. Các biện pháp sinh học như sử dụng vi sinh vật đối kháng, thuốc trừ sâu sinh học, chuyển gen chống chịu vào cây trồng…đang được nghiên cứu và áp dụng ngày càng nhiều nhờ những ưu điểm của chúng.
Một trong những biện pháp sinh học cĩ khả năng đem lại hiệu quả cao trong bảo vệ cây trồng là sử dụng vi sinh vật chống lại các vi sinh vật hại cây hay nĩi cách khác là tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh cho cây nhờ các vi sinh vật đối kháng với chúng.
Hiện nay, người ta đã tìm ra các cơ chế tác dụng lên vi sinh vật gây bệnh dựa vào các chủng vi sinh vật đối kháng như:
+ Sự cạnh tranh về dinh dưỡng. Các chủng vi sinh vật đối kháng thường phát triển nhanh làm biến đổi dinh dưỡng và khơng gian sống của vi sinh vật gây bệnh.
+ Sinh chất kháng nấm
+ Tăng sức đề kháng ở vật chủ: Một số chủng vi sinh vật cĩ khả năng kích thích sự tạo thành các chất chống chịu ở vật chủ.
+ Tác động trực tiếp vào tác nhân gây bệnh: một số chủng vi sinh vật cĩ khả năng sinh ra enzim thuỷ phân ức chế sự phát triển của vi sinh vật khác, phân giải thành thành tế bào hay tạo ra các lỗ rị dẫn tới sự rị rỉ tế bào.. Nghiên cứu các vi sinh vật đối kháng thì nấm đối kháng là một nội dung mới mẻ và quan trọng, đang được đầu tư ở Việt Nam.
II.Phương pháp nghiên cứu
- Trong nội dung báo cáo này đề cập đến một số kỹ thuật phân lập nấm bệnh và nấm đối kháng phục vụ cho nghiên cứu ảnh hưởng của nấm đến cây trồng cũng như sản xuất ra các chế phẩm sinh học nhờ những nghiên cứu ấy.
1.Kỹ thuật mồi nấm gây bệnh
* Nguyên tắc:
- Sử dụng mơ của cây chủ sạch bệnh để bắt các vi sinh vật gây bệnh cho cây cùng loại. Vi sinh vật cĩ trong đất sẽ bị thu hút bởi mơ thực vật mà nĩ cĩ thể sống kí sinh và gây bệnh trên đĩ, nhờ vậy ta tách riêng được chủng VSV cần nghiên cứu.
* Cách tiến hành:
- Lấy mẫu đất bị nhiễm vi sinh vật gây bệnh lấy từ cánh đồng, mang vào phịng thí nghiệm, phơi khơ và nghiền nhỏ.
- Lấy 100g đất cho vào đĩa Petri đã khử trùng, thêm nước cất khử trùng để làm ẩm
- Cắt lá cây chủ sạch bệnh kích thước 1cm2 đặt vào đĩa đĩ (khoảng 10 miếng trên một đĩa).
- Giữ đĩa petri chứa đất ở nhiệt độ phịng và quan sát sự phát triển của nấm trên mơ chủ dưới kính hiển vi độ phĩng đại x10.
- Cấy chuyển sang mơi trường WA (hình 1) hoặc mơi trường trung gian PDA cho đến khi tạo thành canh trường thuần khiết (hình 2)
- Các bước trên thực hiện trong box cấy vơ trùng Sơ đồ tiến hành: H1
* Phạm vi ứng dụng:
- Phương pháp này dùng để phân lập nấm gây bệnh trong đất
- Cũng cĩ thể phân lập nấm cĩ trong mơ thực vật bằng cách đặt mẫu cần phân lập lên đất đã khử trùng sạch bệnh để nấm xâm nhiễm và được nhân lên nhờ đất. Sau đĩ phân lập nấm bệnh từ đất theo các bước trên.