- Rễ phát triển sau khoảng 15 ngày trên môi trường phù hợp, tiến hành cấy chuyển để nhân nhanh sinh khối rễ, các bước tiến hành như sau:
- Đốt dụng cụ trên ngọn lửa đèn cồn.
- Quan sát bằng kính hiển vi để chọn lựa những đĩa petri chứa mẫu tốt, không bị nhiễm tạp khuẩn.
- Đánh dấu những đoạn rễ để cấy chuyển ( màu trắng hoặc vàng nhạt, có phân nhánh cấp 1 hoặc 2, đường kính trội hơn).
- Dùng dao cắt đoạn rễ đã xác định dài khoảng 3-5 cm.
- Dùng kẹp gắp mảnh rễ cấy chuyển sang đĩa petri đã có sẵn môi trường, mỗi đĩa petri cấy 2 đoạn rễ với chiều ngược nhau.
- Bọc kín bằng parafilm.
- Ghi đầy đủ thông tin trên đĩa petri (loại mẫu, ngày/tháng/năm cấy chuyển). - Đưa vào tủ nuôi cấy trong điều kiện tối ở 270C.
- Thực hiện cấy chuyển nhiều lần trong bốc cấy vô trùng để nhân sinh khối mô rễ tạo nguồn vật liệu đưa vào cộng sinh với AM.
2.3.4.Phương pháp tạo cộng sinh AM in vitro
- Trên đĩa thạch chứa môi trường, cắt bỏ mảnh thạch ở phần chính giữa đĩa. - Trên đĩa thạch chứa vật liệu AM vô trùng đã nảy mầm, cắt lấy AM sao cho mảnh nguyên liệu nằm trọn bên trong phần thạch đã loại bỏ ở đĩa môi trường. Dùng dao cẩn thận chuyển vật liệu AM đặt vừa vào phần thạch vừa loại bỏ trên môi trường MSR (the modified Strullu Romand) (Strullu and Romand 1986, Declerck et al. 1998). Cấy chuyển đoạn rễ in vitro lên đĩa thạch chứa AM sao cho chiều hướng phát triển của rễ mới sẽ chạm sợi nấm.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Nuôi cấy trong điều kiện thích hợp, trong tối, ở 270C. Theo dõi tiến triển của rễ, sợi nấm, cộng sinh và sinh bào tử mới trên đĩa cấy.