Mẫu thân cây tươi mới thu hái được sấy khô đem nghiền nhỏ rồi ngâm kiệt với metanol ở nhiệt độ phòng cho đến khi nhạt màu. Dịch chiết được cất loại dung môi bằng máy cất quay ở nhiệt độ thấp và áp suất giảm. Cặn dịch chiết metanol được chiết lần lượt với n-hexan, etylaxetat, metanol và thu được các cặn chiết tương ứng, sau khi đuổi hết dung môi cho các cặn tương ứng là
MXH (cặn n-hexan), MXE (cặn EtOAc) và MXM (cặn metanol). Việc thu
nhận các dịch chiết từ cây Mâm xôi (Rubus alceaefolius) theo sơ đồ sau:
Sơ đồ 2.1. Ngâm chiết mẫu cây Mâm xôi (Rubus alceaefolius).
MÉu M©m x«i kh« (2,5 kg)
CÆn MeOH 260,1 g
1. 5x6l MeOH 2. §uæi dung m«i
DÞch c¸i
1. + H2O 2. 5x1l n-hexan
CÆn n-Hexan 42,2g (MXH)
§uæi dung m«i
5x1l EtOAc
DÞch c¸i CÆn EtOAc
55,8g (MXE)
§uæi dung m«i
1. C« kh« 2. 3x1l MeOH
CÆn kh« CÆn MeOH
129,3g (MXM)
§uæi dung m«i B· lo¹i bá
Các phân đoạn dịch chiết nói trên được làm khan bằng Na2SO4 , lọc qua giấy lọc rồi cất kiệt dung môi dưới áp suất giảm, cặn được sấy khô và cân đến khối lượng không đổi. Như vậy, từ cây Rubus alceaefolius thu được
3 loại cặn chiết được ký hiệu lần lượt là: MXH, MXE và MXM.
Ở đó: MXH: Cặn chiết n-Hexan của cây Rubus alceaefolius Poir.
MXE: Cặn chiết EtOAc của cây Rubus alceaefolius Poir.
MXM: Cặn chiết MeOH của cây Rubus alceaefolius Poir.
Kết quả thu nhận các dịch chiết từ cây Mâm xôi ở Yên Sơn, Tuyên Quang được nêu trong bảng 2.1.
Bảng 2.1. Khối lượng các cặn chiết thu được từ cây Mâm xôi
Khối lượng cặn chiết thu được (g) từ 468,6 g cặn
MeOH đem chiết Mẫu thu vào tháng 8/2011 Khối lượng mẫu khô (g) Khối lượng cặn metanol tổng
(g) n-hexan EtOAc MeOH
Thân 2500 260,1 42,2 (MXH) 55,8 (MXE) 129,3 (MXM) 2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết 2.3.2.1. Phát hiện các hợp chất sterol
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 2 ml dung dịch NaOH 10% đun cách thủy đến khô. Hoà tan cặn trong 3 ml clorofom - lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tính các sterol và thuốc thử Lieberman - Bourchardt (gồm hỗn hợp 1 ml anhydric axetic + 1 ml cloroform để lạnh ở 0 0C, sau đó cho thêm 1 giọt H2SO4 đậm đặc). Lấy 1 ml dịch clorofom rồi thêm 1 giọt thuốc (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
thử, dung dịch xuất hiện màu xanh trong 1 thời gian là phản ứng dương tính.
2.3.2.2. Phát hiện các ancaloit
Lấy 0.01g cặn các phân đoạn, thêm 5ml HCl, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml nước lọc axit.
Ống (1): 1 - 2 giọt dung dịch silicostungtic axit 5%, nếu có tủa trắng và nhiều là phản ứng dương tính.
Ống (2): 1 - 2 giọt thuốc thử Dragendorff , nếu xuất hiện màu da cam là phản ứng dương tính.
Ống (3): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng dương tính.
2.3.2.3. Phát hiện các flavonoit
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 10ml metanol, đun nóng cho tan và lọc qua giấy lọc. Lấy 2ml nước lọc vào ống nghiệm, thêm một ít bột magiê (Mg) hoặc Zn, sau đó cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bình cách thuỷ vài phút. Dung dịch xuất hiện màu đỏ, hoặc màu hồng là phản ứng dương tính với các flavonoit.
2.3.2.4. Phát hiện các cumarin
Dịch để thử định tính được chuẩn bị như mục 2.3.2.1. Lấy vào 2 ống
nghiệm, mỗi ống 2 ml dịch thử cho vào một trong 2 ống đó 0,5 ml dung dịch NaOH 10%. Đun cách thuỷ cả hai ống trên đến sôi, để nguội rồi cho thêm 4 ml nước cất vào mỗi ống. Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ở ống không kiềm có thể xem là phản ứng dương tính, nếu đem axit hoá ống có kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong vẩn đục và màu vàng xuất hiện có thể tạo ra tủa là phản ứng dương tính.
Ngoài ra, có thể làm phản ứng diazo hoá với axit sulfanilic trong môi trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt, cho kết quả dương tính đối với cumarin.
2.3.2.5. Định tính các glucosit tim
Chuẩn bị dịch thử định tính cũng làm như mục 2.3.2.1.
dung dịch natri prussiat 0,5% và 2 giọt NaOH 10% nếu xuất hiện màu đỏ là phản ứng dương tính với vòng butenolit.
Phản ứng Keller - Kilian: Thuốc thử gồm 2 dung dịch.
Dung dịch 1: 100ml axit axetic loãng + 1ml FeCl3 5%
Dung dịch 2: 100ml axit H2SO4 đậm đặc + 1ml FeCl3 5%
Cách tiến hành: Lấy 0,01g cặn các dịch chiết cho vào ống nghiệm thêm
vào 1ml dung dịch 1, lắc đều cho tan hết, nghiêng ống nghiệm và cho từ từ 1ml dung dịch 2 theo thành ống nghiệm, quan sát sự xuất hiện của màu đỏ hay nâu đỏ, giữa hai lớp chất lỏng. Nếu không xuất hiện màu là phản ứng âm tính với các glucosit tim.
2.3.2.6. Định tính các saponin
Chuẩn bị dịch thử như ở mục 2.3.2.1. lấy 2 ống nghiệm mỗi ống cho
2ml dịch thử. Ống 1 cho 1 ml HCl loãng, ống 2 cho 1 ml NaOH loãng rồi bịt miệng ống nghiệm, lắc trong vòng 5 phút theo chiều dọc, quan sát sự xuất hiện và mức độ bền vững của bọt. Nếu bọt cao quá 3 - 4 cm và bền trên 15 phút là phản ứng dương tính.
2.3.2.7. Định tính các tanin
Cân lấy 0,01g cặn chiết, thêm 10ml metanol nước cất, khuấy đều rồi nhỏ 2-3 giọt FeCl3 5%, nếu có màu xanh hoặc lục hoặc đen là phản ứng dương tính.
Kết quả phân tích định tính các nhóm chất trong cây Rubus
alceaefolius, được nêu trong bảng 2.2.
Bảng 2.2. Kết quả định tính các nhóm chất trong cây Rubus alceaefolius
STT Nhóm
chất Thuốc thử Hiện tượng (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cặn tổng 1 Sterol Lieberman- Bourchardt Màu xanh Màu vàng +
2 Ancaloit Dragendorff Vàng da cam _
Zn(Mg) + HCl Dung dịch nhạt màu dẫn đến màu đỏ nhạt + H2SO4 đặc Hồng nhạt + NaOH đặc Vàng + 3 Flavonoit FeCl3 5% Xanh thẫm +
4 Cumarin Phản ứng tạo kết tủa
bông Có kết tủa +
5 Glucosit
trợ tim
FeCl3 trong
CH3COOH +H2SO4đ Vàng nâu rõ +
6 Saponin Phản ứng tạo bọt Bọt bền trong NaOH +
7 Tanin FeCl3 Màu xanh _
Chú giải : + : Phản ứng dương tính ─ : Phản ứng âm tính
2.4. Phân lập và tinh chế các chất
2.4.1. Cặn dịch chiết n-hexan của cây Mâm xôi (MXH)
Dịch chiết n-hexan làm khan bằng Na2SO4, sau đó cất loại dung môi dưới áp suất giảm, thu được 42,2 g bột thô. Lấy 29,6g cặn chiết n-hexan đem tách trên cột silica gel, rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan, n-hexan-etyl axetat, etyl axetat (0-100% EtOAc), và metanol thu các phân đoạn từ sắc ký cột ở những thể tích nhỏ (510ml/phân đoạn). Kiểm tra các phân đoạn thu được bằng sắc ký lớp mỏng (SKLM) và hiện màu bằng thuốc thử vanilin - H2SO4 5%, sau đó các phân đoạn giống nhau được gộp lại rồi đuổi kiệt dung môi.
2.4.1.1. Hợp chất β-sitosterol (MXH1)
Rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan - etyl axetat (10:1), thu được khối chất rắn vô định hình, kết tinh lại trong n-hexan đã thu được tinh thể
hình kim không màu (68 mg), điểm chảy 138-140 0C.
Phổ ESI-MS (m/z): 414 [M]+.
Phổ IR (νmax , cm-1): 3431,5 (dao động hóa trị OH), 2931,3 (dao động hóa trị CH); 1647,2 (C=C). Phổ 1H-NMR (500M Hz, CDCl3) δ (ppm): 3,51 (1H, m, H-3); 5,31 (1H, dd, J = 5; 2 Hz, H-6); 1,01 (3H, s, H-18); 0,92 (3H, d, J = 6,6 Hz, H- 21); 0,85 (3H, d, J = 7,1 Hz, H-26); 0,84 (3H, d, J = 6,6 Hz, H-29); 0,81 (3H, d, J = 6,6 Hz, H-28); 0,68 (3H, s, H-19). Phổ 13C-NMR (125M Hz, CDCl3) δ (ppm): 37,3 (C-1); 31,7 (C-2); 71,8 (C-3); 42,3 (C-4); 140,8 (C-5); 121,7 (C-6); 31,9 (C-7); 31,9 (C-8); 50,2 (C-9); 36,5 (C-10); 21,1 (C-11); 39,8 (C-12); 42,3 (C-13); 56,8 (C-14); 24,3 (C-15); 28,3 (C-16); 56,1 (C-17); 11,9 (C-18); 19,4 (C-19); 36,2 (C-20); 18,8 (C-21); 33,9 (C-22); 26,1 (C-23); 45,9 (C-24); 29,2 (C-25); 19,1 (C-26); 19,4 (C-27); 23,1 (C-28); 11,9 (C-29).
2.4.1.2. Hợp chất axit ursolic (3β-hydroxy-urs-12en-28-oic ) (MXH6)
Rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan-etyl axetat (3:1), thu được chất vô định hình, kết tinh lại trong dung môi clorofom thu được chất bột màu
trắng (42mg), điểm nóng chảy là 238-239 0C, RfB= 60.
Phổ IR: ν (cm-1), 3419 (OH), 1693 (C=O), 1456-1379 (C=C).
Phổ ESI-MS m/z: 439 [M-H2O+H]+ ứng với [M]+ 456.
Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3&MeOD, TMS, δ ppm): 5,24 (1H, td,
J=3,5 và 6,9Hz, H-12); 3,20 (1H, dd, J=6,1Hz và 9,1Hz, H-3); 2,19 (1H, d, J 11,2Hz, H-18), 1,99 (1H, dd, J 4,3Hz và 13,5Hz, H-6); 1,09 (3H, s, 27-CH3); 0,94 (3H, d, J 6,2Hz, 30-CH3); 0,92 (3H, s, 23-CH3); 0,90 (3H, m, 25-CH3);
0,86 (3H, d, J 6,4Hz, 29-CH3); 0,81 (3H, s, 26-CH3), 0,77 (3H, s, 24-CH3); 0,72 (1H, d, J 11.2Hz, H-5). Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3&MeOD, TMS, δ ppm): 180,48 (s, C- 28); 138,05 (s, C-13); 125,38 (d, C-12); 78,73 (d, C-3); 55,13 (d, C-5); 52,70 (d, C-18); 47,68 (s, C-17); 47,44 (d, C-9); 41,94 (s, C-14); 39.35 (s, C-8); 38,95 (d, C- 19); 38,77 (d, C-20); 38,55 (s, C-4); 38,55 (t, C-1); 36,80 (s, C-10); 36,68 (t, C-22); 32,91 (t, C-7); 30.53 (t, C-21); 27,88 (q, C-23); 27,88 (t, C-15); 26,71 (t, C- 2); 24,07 (t, C-16); 23,35 (q, C-27); 23,13 (t, C-11); 20,94 (q, C-29); 18,17 (t, C- 6); 16,81 (q, C-30); 16,72 (q, C-26); 15,41 (q, C-24); 15,23 (q, C-25).
2.4.1.3. Hợp chất axit euscaphic (2,3,19-trihydroxyurs-12-en-28-oic axit) (MXH14) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tiếp tục rửa giải cột bằng dung môi n-hexan – etyl axetat (1: 1) thu được thu được chất vô định hình, kết tinh lại trong dung môi clorofom thu được chất rắn tinh thể hình kim, không màu, khối lượng 15,5 mg, nhiệt độ nóng chảy 260-262 0C, RfC= 66.
Phổ ESI-MS (m/z): 490 [M+H]+.
Phổ IR (νmax , cm-1): 3358 (dao động hóa trị OH); 2939 (dao động hóa
trị CH); 1689 (C=O); 1606 và 1459 (C=C); 1205,5 và 1035,2 (C-O-C). Phổ 1H-NMR (500 MHz, MeOD); (ppm): 5,31 (1H, td, J=3,5 và 6,5Hz, H-12); 3,95 (1H, tdd, J=8,0, 4,0 và 3,0Hz, H-2); 3,35 (1H, d, J=2,0Hz, H-3); 2,59 (1H, td, J=13,0 và 4,5Hz, H-16); 2,52 (1H, s, H-18); 1,37 (3H, s, H-27); 1,21 (3H, s, H-29); 1,01 (6H, s, H-23, H-25); 0,95 (3H, d, J 6,5Hz, H- 30), 0,89 (3H, s, H-24); 0,81 (3H, s, H-26). Phổ 13C-NMR (125MHz, MeOD); (ppm): 181,4 (s, C-28); 140,04 (s, C- 13); 129,37 (d, C-12); 80,10 (d, C-3); 73,64 (s, C-19); 67,18 (d, C-2); 55,08 (d, C- 18); 49,50 (d, C-5); 48,49 (s, C-17); 48,20 (d, C-9); 43,05 (d, C-20); 42,73 (s, C- 14); 42,48 (t, C-1); 41,25 (s, C-8); 39,44 (s, C-4); 39,37 (s, C-10); 39,00 (t, C-22);
34,06 (t, C-7); 29,57 (q, C-15); 29,22 (q, C-23); 27,28 (t, C-21); 27,09 (q, C-29); 26,62 (t, C-16); 24,91 (q, C-27); 24,69 (t, C-11); 22,44 (q, C-24); 19,27 (t, C-6); 17,56 (q, C-26); 16,87 (q, C-25); 16,59 (q, C-30).
2.4.2. Cặn dịch chiết etyl axetat của cây Mâm xôi (MXE)
Dịch chiết etyl axetat làm khan bằng Na2SO4, sau đó cất loại dung môi
dưới áp suất giảm, thu được 55,8 g cặn khô thô. Sau khi kiểm tra sắc ký lớp mỏng, lấy 32,5 g cặn trên đem tách trên cột silica gel, rửa giải cột bằng hệ dung môi diclometan - metanol tăng dần theo độ phân cực (0-100% metanol), dịch rửa giải được thu ở những thể tích nhỏ (510ml/phân đoạn). Kiểm tra các phân đoạn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin - H2SO4 5%, sau đó các phân đoạn giống nhau được gộp lại rồi đem cất loại dung môi.
2.4.2.1. Hợp chất β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit (MXE1)
Rửa giải cột bằng dung môi etyl axetat thu được chất bột vô định hình, làm sạch khối chất rắn này trong dung môi etyl axetat rồi kết tinh lại trong metanol thu được chất bột vô định hình màu trắng có khối lượng 30 mg, nhiệt
độ nóng chảy 269-270oC, RfD= 65. Phổ ESI-MS: m/z (%): 396 [M - C6H12O6]+. Phổ FT-IR νmax (cm-1): 3390 (rộng); 2934; 1644; 1461; 1373; 1073; 1026. Phổ 1H-NMR (500 M Hz, DMSO-d6) δ (ppm): 3,57 (1H, m, H-3); 5,34 (1H, dd, J = 5; 2 Hz, H-6); 0,65 (3H, s, H-18); 0,93 (3H, s, H-19); 0,94 (3H, d, J = 6,6 Hz, H-21); 0,83 (3H, d, J = 7,1 Hz, H-26); 0,85 (3H, d, J = 6,6 Hz, H-29); 0,80 (3H, d, J = 6,6 Hz, H-28). Phổ 13C-NMR (125M Hz, DMSO-d6); δ (ppm): 36,3 (t, C-1); 27,9 (t, C-2); 76,8 (d, C-3); 38,4 (t, C-4); 140,6 (s, C-5); 121,3 (d, C-6); 31,7 (d, C-7); 31,5 (d, C-8); 50,7 (d, C-9); 35,6 (s, C-10); 21,0 (t, C-11); 36,9 (t, C-12); 45,2 (s, C-13); 56,3 (d, C-14); 23,9 (t, C-15); 29,4 (t, C-16); 55,5 (d, C-17);
11,9 (q, C-18); 19,8 (q, C-19); 33,4 (d, C-20); 19,6 (d, C-21); 31,5 (t, C-22); 28,8 (t, C-23); 49,7 (d, C-24); 25,5 (t, C-25); 19,0 (q, C-26); 20,7 (q, C-27); 22,7 (t, C-28); 12,2 (q, C-29); 100,9 (d, C-1'); 77,1 (d, C-3'); 76,8 (d, C-5'); 73,6 (d, C-2'); 70,2 (d, C-4'); 61,2 (t, C-6').
2.4.2.2. Hợp chất 8-methoxy-4H-chromen-4-one (MXE2)
Tiếp tục rửa giải cột bằng dung môi dung môi etyl axetat thu được thu được chất màu vàng. Đem hỗn hợp chất này tách lại trên cột silica gel đã thu
được chất kết tinh hình kim màu vàng cam, có khối lượng 12,1mg, RfD= 67,
nóng chảy ở 133-135C.
Phổ IR: ν (cm-1), 3430 (dao động hóa trị OH), 2931 (dao động hóa trị CH), 1631 (C=O), 1439-1588 (C=C). Phổ ESI-MS m/z: 176 [M-H2O+H]+. Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 6,47 d (J = 16,0 Hz, H- 2); 7,56 d (J = 15,5 Hz, H-3); 7,09 d (J = 8,0 Hz, H-5), 7,06 (brs, H-6); 6,89 (d, J = 8,5 Hz, 8-OCH3). Phổ 13C-NMR (125M Hz, CDCl3) δ (ppm): 121,27 (C-2); 140,65 (C-3); 182,91 (C-4); 127,26 (C-4a); 122,76 (C-5); 110,05 (C-6); 115,10 (C-7); 147,28 (C-8); 148,26 (C-8a); 55,74 (C-OCH3).
2.4.2.3. Hợp chất Suavissimoside R1 (28-O-β-D-glucopyranosyl este của 2α,3β,19-trihydroxyurs-12-en-23,28-dioic axit) (MXE18)
Tiếp tục rửa giải cột bằng dung môi diclometan-metanol (7 : 1) thu được khối chất vô định hình. Đem kết tinh lại trong dung môi clorofom thu được tinh thể hình kim ,không màu, có khối lượng 60,7 mg, điểm chảy: 256-258 0C, RfE=75.
Phổ IR (νmax , cm-1): 3409 (dao động hóa trị OH); 2523 (dao động hóa
trị CH); 1633 (C=O); 1458 (C=C).
Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 5,31 (2H, dd, J = 3,0Hz và 5,0 Hz, H-12); 3,70 (1H, dd, J=4,5 và 12,5Hz, H-2); 3,76 (1H, d, J=9,5Hz, H-3); 2,59 (1H, td, J=13,0 và 4,5Hz, H-16); 2,52 (1H, brs, H-18); 1,12 (3H, s, H-24); 1,03 (3H, s, H-25); 0,76 (3H, s, H-26); 1,32 (3H, s, H-27); 1,21(3H, s, H-29); 0,93 (3H, d, J=6,5Hz, H-30); 5,32 (1H, d, J=6,5Hz, H-1’). Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 47,81 (C-1); 69,10 (C-2); 80,73(C-3); 54,86 (C-4); 52,35 (C-5); 21,55 (C-6); 33,35 (C-7); 40,98 (C-8); 48,48 (C-9); 38,92 (C-10); 24,54 (C-11); 129,10 (C-12); 139,2 (C-13); 42,52 (C-14); 29,27 (C-15); 26,21 (C-16); 49,4 (C-17); 54,56 (C-18); 73,48 (C-19); 42,40 (C-20); 26,91 (C-21); 37,94 (C-22); 180,52 (C-23); 12,65 (C-24); 17,44 (C-25); 17,32 (C-26); 24,57 (C-27); 180,52 (C-28); 27,04 (C-29); 16,47 (C-30); 95,46 (C-1’); 73,48 (C-2’); 78,12 (C-3’); 71,2 (C-4’); 78,9 (C-5’); 62,3 (C-6’). 2.4.2.4. Hợp chất trachelosperoside A1 (2α,3β,19α-trihydroxyurs-12-en- 24,28-dioic axit) (MXE21)
Tiếp tục rửa giải cột bằng dung môi diclometan-metanol (3 : 1) thu được khối chất vô định hình. Đem kết tinh lại trong dung môi clorofom thu được tinh
thể hình kim ,không màu, có khối lượng 30 mg, điểm chảy: 264-265 0C, RfE=70.
Phổ IR (νmax , cm-1): 3376 (dao động hóa trị OH); 2930 (dao động hóa
trị CH); 1724 (C=O); 1457 (C=C). Phổ LC-ESI/MS positive (m/z): 679 [M+H]+. Phổ 1H-NMR (500MHz, DMSO, TMS, δ ppm): 3,44 (1H, m, H-2); 3,49 (1H, d, J=9,5Hz, H-3); 1,49 (m, H-5); 1,62 (m, H-9); 25,17 (1H, s, H- 12); 2,50 (1H, td, J=13,1 và 4,4 Hz, H-16); 2,36 (1H, s, H-18); 0,95 (3H, s, H- 23); 0,91 (3H, s, H-25); 0,64 (3H, s, H-26); 1,27 (3H, s, H-27); 1,09 (3H, s, H-29); 0,83 (3H, d, J=6,5Hz, H-30); 5,13 (1H,d, J=8,0Hz, H-1’); 3,08- 3,16 (4H, m, H-2’,3’,4’,5'); 3,58 (1H, d, J=11,5Hz, H-6’).
Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3, TMS, δ ppm): 47,34 (C-1); 67,10 (C-2); 79,10 (C-3); 53,17 (C-4); 50,94 (C-5); 20,22 (C-6); 32,18 (C-7); 40,99 (C-8); 46,99 (C-9); 37,46 (C-10); 23,25 (C-11); 126,82 (C-12); 138,10 (C-13); 41,19 (C-14); 297,99 (C-15); 25,08 (C-16); 47,34 (C-17); 53,05 (C-18); 71,68 (C-19); 41,10 (C-20); 25,77 (C-21); 36,55 (C-22); 12,34 (C-23); 178,11 (C-24); 16,67 (C-25); 16,29 (C-26); 23,81 (C-27); 175,55(C-28); 26,38 (C-29); 16,21 (C-30); 94,06 (C-1’); 72,25 (C-2’); 77,57 (C-3’); 69,54 (C-4’); 76,71 (C-5’); 60,67 (C-6’).
Chương 3
THẢO LUẬN KẾT QUẢ
3.1. Nguyên tắc chung (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Để phân lập được các hợp chất trong bất kỳ một thực vật nào mà không làm ảnh hưởng tới thành phần hoá học có trong nó thì trước khi ngâm chiết bằng dung môi hữu cơ, mẫu thực vật phải được đưa đi khử men ngay sau khi thu mẫu và sấy khô ở điều kiện thích hợp. Về nguyên tắc việc ngâm chiết mẫu thực vật có thể tiến hành theo 2 cách phổ biến sau:
1. Chiết và phân lập các hợp chất từ mẫu thực vật bằng các loại dung môi có độ phân cực tăng dần: ete dầu hoả hoặc n-hexan, diclometan, etyl axetat, metanol hoặc etanol v.v....
2. Chiết tổng bằng các ancol (metanol, etanol) hay hệ dung môi ancol- nước. Sau đó tách loại các hợp chất bằng các loại dung môi có độ phân cực tăng dần như phương pháp 1 để thu được các dịch chiết có chứa các hợp chất có độ phân cực tương đối giống nhau.
Quá trình ngâm chiết thân cây Mâm xôi (Rubus alceafolius) được thực hiện theo phương án 2 (Sơ đồ 2.1).
3.2. Phân lập và nhận dạng các hợp chất có trong các dịch chiết khác nhau của cây Mâm xôi nhau của cây Mâm xôi
Các dịch chiết từ thân cây Mâm xôi (Rubus alceafolius) đều là những hỗn hợp phức tạp chứa các hợp chất khác nhau. Để phân lập từng chất ra khỏi hỗn hợp, đã sử dụng các phương pháp sắc ký cột như: Cột nhồi silica gel, với các hệ dung môi rửa giải thích hợp và thường phải lặp lại nhiều lần. Việc tinh chế các chất thường dùng phương pháp kết tinh lại trong dung môi hoặc hệ dung môi thích hợp. Nhờ đó, sẽ thu được các đơn chất có độ tinh khiết cao, đáp ứng các nhu cầu để khảo sát tính chất hóa lý và quang phổ của chúng. Đó là những yếu tố quan trọng trong quá trình nhận dạng và xác định cấu trúc hóa học của các chất đã phân lập được từ các đối tượng nghiên cứu nói trên.
Việc phân lập các thành phần hóa học của cây Mâm xôi (Rubus
alceafolius) đã thu được các hợp chất sạch thuộc các nhóm chất steroit,
tritecpenoit.
3.2.1. Hợp chất steroit
Nhóm chất steroit tìm thấy trong các dịch chiết từ các bộ phận khác nhau của cây mâm xôi. Dựa vào các đặc trưng hoá lý và quang phổ của chất phân lập được, đối chiếu với mẫu chuẩn và so sánh với các dẫn liệu trong bảng 3.1 đã nhận ra chúng là:
3.2.1.1. Hợp chất β-sitosterol (MXH1)
Hợp chất MXH1 thu được dưới dạng tinh thể hình kim màu trắng từ dịch n-hexan, nóng chảy ở 135-136 C, điểm nóng chảy so với chất mẫu
không thay đổi. Trong các phổ 1H- và 13C-NMR đã chỉ ra sự có mặt của một
nhóm hydroxyl (H tại 3,53ppm (proton của CH liên kết với OH), C tại
71,7ppm và một nối đôi H tại 5,35ppm (1H, d, J 5Hz) tín hiệu của proton liên
kết với C-6 ở vị trí một nối đôi, C-5 tại 140,70ppm, s và C-6 tại 121,7ppm, d).
Trên cơ sở các số liệu phổ chuẩn của chúng, so sánh với số liệu phổ
chuẩn của β-sitosterol trong tài liệu [10] chất MXH1 được xác định là
β-sitosterol hay stigmast-5-en-24R-3-ol. Các số liệu phổ 13C NMR của hợp
chất SSH1 xem bảng 3.1 và công thức cấu tạo xem hình 3.1.
3.2.1.2. Hợp chất β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit (MXE1)
Hợp chất MXE1 thu được dưới dạng chất rắn vô định hình từ dịch etylaxetat, nóng chảy ở 269-270C, điểm nóng chảy so với chất mẫu không thay đổi. Quan sát trên các phổ 13C-NMR và DEPT thấy có 35 tín hiệu của nguyên tử cacbon, trong đó có 7 nguyên tử cacbon gắn với oxy đặc trưng cho phần đường (nằm trong vùng 61,20 đến 100,8 ppm), có 2 tín hiệu ở 140,6 và
121,3ppm thuộc về một liên kết olefin. Các phổ IR và 1H-NMR đều thấy có
nhóm hyđroxyl (3390 cm-1). Trong phổ 1H-NMR cũng quan sát thấy proton
đường xuất hiện ở dạng doublet tại 4,32ppm, có J=7,8Hz và C-1’ tương ứng là
100,9 ppm.
Số liệu các phổ IR, MS, 1H- và 13C-NMR thu được cho phép nghĩ đến
cấu trúc của một hợp chất glucosit có công thức C35H60O6. Những điểm trình
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});