Q-10 là một cấu phần trong chuỗi truyền điện tử nên chúng nằm phía bên trong màng tế bào chất vi khuẩn. Q-10 chỉ tan trong các dung môi không phân cực. Vì vậy, sau khi thu tế bào, phải tiến hành phá vỡ màng tế bào vi khuẩn để hiệu suất chiết đạt hiệu quả cao nhất. Thƣờng sử dụng hệ dung môi có khả năng phá tế bào và hoà tan tối đa Q-10
Quinon là lipid tự do nên có thể chiết tách từ tế bào vi khuẩn bằng các dung môi kém phân cực nhƣ aceton, cloroform và n-hexan. Do các quinon dễ bị phân hủy trong điều kiện acid hay kiềm mạnh nên phản ứng xà phòng hoá không thích hợp cho quy trình chiết Q-10
Q-10 có thể đƣợc chiết tách theo phƣơng pháp sau:
2.3.4.1. Phƣơng pháp Collins và cộng sự [15]
Cắn tế bào vi khuẩn cho vào hỗn hợp dung môi cloroform-methanol (2:1). Khuấy mạnh trên máy khuấy từ trong 2 giờ, nhiệt độ phòng.
Nhƣng để tăng hiệu quả chiết đã tiến hành cải tiến nhƣ sau: cho 200mg cắn tế bào vi khuẩn vào 100ml hỗn hợp dung môi cloroform-methanol (2:1), cho thêm 20g bi thủy tinh có kích thƣớc 0,5mm vào. Khuấy hỗn hợp trên máy khuấy từ trong thời gian 60 phút ở nhiệt độ phòng. Loại xác tế bào bằng cách lọc hoặc ly tâm, thu nhận dịch chiết có chứa Q-10. Sau đó cô quay với tốc độ 100 vòng/phút ở nhiệt độ 40 oC. Hỗn hợp cô đặc này dùng một lƣợng nhỏ hoà tan trong n-hexan đem định tính.
32
Hình 2.1. Phƣơng pháp chiết xuất Q-10 của Collins
2.3.4.2. Phƣơng pháp Paterson & Buddie (1991) [25]
Lấy 200mg cắn tế bào vi khuẩn cho vào 3ml hỗn hợp dung môi methanol - n-hexan (3:2), trộn đều bằng máy vortex trong 15 phút. Thêm n-hexan, trộn đều bằng máy vortex trong 2 phút. Loại xác tế bào bằng cách ly tâm dịch huyền phù này ở tốc độ thấp (8000 vòng/phút)/15 phút hoặc cho qua bình lắng gạn để thu nhận dịch chiết có chứa Q-10 là lớp n-hexan ở trên cùng. Chiết tách hai lần nữa với n-hexan để lấy tối đa lƣợng Q-10 có trong mẫu, cẩn thận không nên lấy lẫn lớp methanol. Thu gộp dịch chiết Q-10, cô quay với tốc độ 100 vòng/phút ở nhiệt độ 40oC. Hỗn hợp cô đặc này dùng một lƣợng nhỏ hoà tan trong n-hexan đem định tính
Sinh khối tƣơi của VK
cloroform-methanol (2:1) + bi thủy tinh
Lọc thu dịch chiết chứa Q-10
Cô quay
Hòa tan trong n-hexan
Phân tích
33
Hình 2.2. Phƣơng pháp chiết xuất Q-10 của Paterson & Buddie
2.3.4.3. Phƣơng pháp chiết xuất của Yoshida và cộng sự [20]
Lấy 2g cắn tế bào đƣợc pha loãng trong 0,5ml dung dịch HCl 0,02N, sau đó cho vào 6ml n-propanol trộn đều hỗn hợp, tiếp tục cho vào 10ml n-hexanvà 5g bi thủy tinh. Tất cả đƣợc khuấy trộn trên một máy khuấy từ 15 phút. Sau đó cẩn thận chiết lấy phần n-hexan ở lớp trên cùng. Chiết tách hai lần nữa với 5ml n-hexane. Thu gộp dịch chiết Q-10, cô quay với tốc độ 100 vòng/phút ở nhiệt độ 40 oC. Hỗn hợp cô đặc này dùng một lƣợng nhỏ hoà tan trong n-hexan đem định tính
Sinh khối tƣơi của VK
Hỗn hợp dung môi methanol : n-hexan (3:2)
Ly tâm thu dịch chiết chứa Q-10
Cô quay
Hòa tan trong n-hexan
Phân tích
34
Hình 2.3. Phƣơng pháp chiết xuất Q-10 của Yoshida
2.3.4.4. Phƣơng pháp của W. Zhong và cộng sự [39]
Sau khi thu sinh khối tƣơi, rửa bằng nƣớc cất, lấy 2g sinh khối vi khuẩn cho vào một bình cầu 150ml thêm vào hỗn hợp (0,35g acid pyrogallic + 1,25g KOH + 9,5ml methanol + 3,5ml dH2O). Cách thủy ở 90OC trong 30 phút, sau đó làm lạnh nhanh dƣới vòi nƣớc rồi cho vào cốc có mỏ chứa 40ml n-hexan. Khuấy trộn kỹ trong vòng 5 phút, chuyển pha trên sang một tuýp mới. Sau đó cô quay để thu sản phẩm.
5g bi thủy tinh, khuấy trộn
Sinh khối tƣơi của VK
Hỗn hợp dung môi n-propanol : n-hexan (6:10)
Thu dịch chiết chứa Q-10
Cô quay
Hòa tan trong n-hehexane
Phân tích
35
Hình 2.4. Phƣơng pháp chiết xuất Q-10 của W. Zhong và cộng sự
