- O– CH2 – COOH Phân ly
b.Kỷ thuật nuôi cấy
Sau khi đã trộn giống, môi trường được trải đều ra các khay với chiều dày 2-3cm, rồi được đưa và môi trường nuôi cấy, đặt trên nhưng giá đỡ. Các giá đỡ
này được thiết kế sao cho lượng không khí được lưu thông thường xuyên. Phòng nuôi cấy phải có hệ thống điều chỉnh nhiệt độ và độ ẩm không khí. Nhiệt độ thích hợp cho nấm sợi phát triển là 28-320C. Nhiệt độ thấp quá hoặc cao qua đều ảnh hưởng không tốt cho nấm sợi phát triển.
Trong quá trình nuôi cấy, ta hoàn toàn không cần điều chỉnh pH. Môi trường bấn rắn là môi trường tĩnh nên sự thay đổi pH ở một vùng nào đó ít khi ảnh hưởng đến toàn bộ khối môi trường.
Thời gian nuôi nấm sợi thu nhận enzyme vào khoảng 30-60 giờ. Điều này còn phụ thuộc vào chủng nấm mốc Asporyzae và điều kiện môi trường cũng như phụ thuộc vào môi trường nuôi cấy.
• Giai đoạn 1: Giai đoạn này kéo dài 10-14 giờ kể từ khi bắt đầu nuôi cấy. Enzyme mới bắt đầu được hình thành. Trong giai đoạn này phải đặc biệt quan tâm đến chế độ nhiệt độ. Tuyệt đối không đưa nhiệt độ cao quá 300C vì thời kỳ đầu này giống rất mẫn cảm với nhiệt độ.
• Giai đoạn 2: Giai đoạn này kéo dài 14-18 giờ. Enzyme proteasen được tổng hợp mạnh. Lượng O2 trong không khí giảm và lượng CO2 tăng dần, do đó trong giai đoạn này phải thông khí mạnh và nhiệt độ cố gắng duy trì trong khoảng 29- 300C là tốt nhất.
• Giai đoạn 3: Giai đoạn này kéo dài 10-20 giờ. Quá trình trao đổi chất yếu dần, do đó mức độ giảm chất dinh dưỡng sẽ chậm lại. Nhiệt độ của khối môi trường giảm, do đó làm giảm lượng không khí môi trường xuống 20-25 thể tích không khí/thể tích pòng nuôi cấy/1 giờ. Nhiệt độ nuôi duy trì ở 300C, trong giai
đoạn này bào tử được hình thành nhiều do đó lượng enzyme protease tạo ra sẽ
giảm xuống. Chính vì thế việc xác định thời điểm cần thiết để thu nhận enzyme rất cần thiết.