1.3.2.1 ChromID ESBL agar.
Giới thiệu
Mụi trường ChromID ESBL do hóng Bio-Merieux (Phỏp) sản xuất, ủó
ủược nhiều nước trờn thế giới sử dụng. Đõy là mụi trường ủược khuyến cỏo dựng ủể sàng lọc cỏc vi khuẩn ủường ruột Enterobacteriaceae sinh
ESBL. Việc xỏc ủịnh vi khuẩn sinh ESBL ủặc biệt quan trọng trong việc phũng và giỏm sỏt dịch tễ bệnh nhiễm khuẩn. Sử dụng mụi trường ChromID ESBL giỳp nhanh chúng sàng lọc cỏc vi khuẩn sinh ESBL. Nguyờn lý
Mụi trường chứa khỏng sinh Cefpodoxime và chất màu. Chất màu ủược thờm vào ủể dễ dàng phỏt hiện cỏc phản ứng do enzyme của vi khuẩn nếu cú trong mụi trường. Vỡ vậy cú thể ủồng thời vừa ủịnh danh vi khuẩn vừa phỏt hiện vi khuẩn ủề khỏng. Nếu vi khuẩn sinh ESBL sẽ khỏng với cefpodoxime và cú khả năng phỏt triển trờn mụi trường ChromID ESBL
tạo thành cỏc khuẩn lạc cú màu sắc khỏc nhau, ủặc trưng cho một số loài vi khuẩn.
Ưu ủiểm
Dễ dàng tiến hành, giỏ thành rẻ dễ triển khai ở tất cả cỏc cơ sở Vi Sinh lõm sàng cú nuụi cấy vi khuẩn. Đặc biệt nhanh chúng sàng lọc cỏc vi khuẩn
ủường ruột sinh ESBL ủồng thời ủịnh danh sơ bộ ủược một số loài vi khuẩn như E. coli và K. pneumoniae.
Hạn chế
- Một số vi khuẩn khỏng khỏng sinh cefpodoxime khụng phải do sinh ESBL mà theo cơ chế khỏc hoặc sinh cephalosporinase, penicillinase... cú thể mọc trờn mụi trường này.
- Một số vi khuẩn màu sắc khuẩn lạc khụng ủiển hỡnh, khụng màu hoặc nhiều loài vi khuẩn cú thể cú mầu sắc khuẩn lạc giống nhau.
- Vi khuẩn sinh ESBL chậm hoặc yếu cú thể khụng mọc trờn mụi truờng này sau 18 - 48h nuụi cấy.
1.3.2.2 Phương phỏp ủĩa ủụi (double disk diffusion test) [24], [25], [37], [44], [54].
Giới thiệu
Phương phỏp ủĩa ủụi ủược ủược cỏc nhà nghiờn cứu người Phỏp tiến hành cuối những năm 1980. Sau ủú tỏc giả người Anh David M Livermore và cỏc cộng sự ủó tiếp tục nghiờn cứu và ủề xuất thờm một số tiờu chuẩn kỹ thuật cho thử nghiệm. Viện chuẩn thức cỏc xột nghiệm lõm sàng (Anh quốc) ủó sử
dụng phương phỏp ủĩa ủụi ủể khẳng ủịnh vi khuẩn sinh ESBL [24], [44], [54], [59], [64].
Nguyờn lý
Cỏc ESBL cú khả năng phõn hủy cỏc cephalosporin phổ rộng nhưng bị ức chế bởi clavulanic acid, dẫn ủến xuất hiện vựng ức chế vi khuẩn xung
quanh khoanh giấy khỏng sinh AMC và mở rộng vựng ức chế giao thoa giữa AMC với CAZ và CTX [44].
Ưu ủiểm
Phương phỏp dễ thực hiện, rẻ tiền, ủộ nhạy và ủặc hiệu cao > 95% Nhược ủiểm:
Khú lựa chọn ủược khoảng cỏch tối ưu giữa 2 khoanh giấy ở từng vi khuẩn, õm tớnh giả với cỏc ESBL hoạt tớnh thấp, khụng phỏt hiện ủược cỏc vi khuẩn P.aeruginosa và một số vi khuẩn cú ESBL giảm ức chế clavulanic acid thường gặp như ESBL type OXA-.
1.3.2.3 Băng giấy E-test ESBL [24], [31], [33], [41], [46],[54].
Giới thiệu
Băng giấy E-test là thanh plastic mỏng, kớch thước 5x 60mm, một mặt khụng thấm nước, một mặt ủược tẩm khỏng sinh với cỏc nồng ủộ khỏc nhau. Băng giấy E-test ESBL là một loại băng E-test ủặc biệt, cú một phần chứa cỏc nồng ủộ khỏng sinh cephalosporins phổ rộng ủược pha loóng từ
thấp ủến cao, tớnh bằng àg/ml, phần cũn lại chứa cephalosporin phổ rộng kết hợp clavulanic acid (CAZ/Clav, CTX/Clav).
Nguyờn lý:
ESBL bị ức chế bởi clavulanic acid nờn E. coli và K. pneumoniae sinh
ESBL sẽ cú vựng ức chế vi khuẩn ở phần chứa khỏng sinh kết hợp clavulanic acid, phần cũn lại khụng cú chất ức chế dẫn ủến khỏng sinh bị
ESBL phõn hủy nờn vựng ức chế vi khuẩn nhỏ hơn hoặc khụng cú vựng ức chế do vi khuẩn khụng bị khỏng sinh ức chế hoặc chỉ bị ức chế ở nồng ủộ
Vật liệu
o Thanh CTX/Clav cú phần CT chứa cefotaxime nồng ủộ 0,25 - 16àg/ml, phần CTL chứa nồng ủộ cefotaxime 0,016-1àg/ml phối hợp clavulanic acid nồng ủộ 4àg/ml.
o Thanh CAZ/Clav cú phần TZ chứa ceftazidime nồng ủộ 0,5- 32àg/ml, phần TZL chứa nồng ủộ ceftazdime 0,064-4àg/ml, trộn lẫn clavulanic acid nồng ủộ 4àg/ml.
Đọc kết quả
Vi khuẩn sinh ESBL (+) sẽ cú vựng ức chế hỡnh ellip, hoặc phần kết thỳc nồng ủộ MIC biến mất tạo thành búng ellip hoặc vũng bị biến dạng của hỡnh ellip và nồng ủộ MIC phớa khỏng sinh khụng kết hợp clavulanic acid tăng gấp ≥ 8 lần phần cũn lại
Ưu ủiểm
Dễ tiến hành, cú ủộ nhạy và ủặc hiệu cao tới 100%. Đõy cũng là phương phỏp chớnh xỏc nhất hiện nay ủược dựng ủể khẳng ủịnh ESBL (+).
Nhược ủiểm
Giỏ thành cao nờn khú tiến hành rộng rói. Trong một số trường hợp phương phỏp này cho kết quả khụng xỏc ủịnh (ND) do cỏc trường hợp
IRT enzyme (inhibitor resistant TEM) hoặc AmpC enzymes hoặc vi khuẩn khỏng beta-lactam theo cơ chế khỏc [23], [27], [58].
1.3.2.4 Phương phỏp ủĩa kết hợp
Sử dụng một khoanh kết hợp cephalosporin với clavulanic acid 30àg và một khoanh cephalosporin 30àg. Nếu ủường kớnh ức chế ở khoanh kết hợp lớn hơn khoanh cũn lại 5mm thỡ kết luận vi khuẩn ESBL (+)
Từ phương phỏp này Sanguinetti M ủó cải tiến ủể phỏt hiện AmpC dựa vào sự khụng thay ủổi vựng ức chế, giữa khoanh kết hợp cefodoxime/ clavulanic và khoanh cefodoxime thường [49], [54], [59].
1.3.2.5 Vitek ESBL Card
Phương phỏp này dựng card MIC cú chứa cephalosporin nồng ủộ bắt
ủầu từ 0,5àg/ml trộn với clavulanic acid nồng ủộ 4àg/ml. Kết quả nếu vi khuẩn cú ESBL sẽ cho MIC cephalosporin ≥ 8àg/ml, phương phỏp này ủộ
nhạy và ủặc hiệu khụng cao lắm (khoảng 90%) [41], [45], [54], [62].
1.3.2.6 Micro scan panels
Tấm panel nhựa cú 4 giếng chứa mụi trường khỏng sinh cephalosporin và cephalosporin/clavulanic acid, cấy vi khuẩn vào cỏc giếng ủể tủấm 18-24h
ủọc kết quả, nếu ESBL (+) vi khuẩn sẽ khụng mọc ở giếng cú cephalosporin kết hợp clavulanic acid [54].
1.3.2.7 Mỏy ủịnh danh vi khuẩn và khỏng sinh ủồ BD Phoenix [41], [54]
Vật liệu
Tấm panel cú phần khỏng sinh ủồ (AST: Antibiotics Sensitiviti Test). Với 5 hàng giếng cú chứa khỏng sinh gồm; 2 hàng ủầu cefodoxime, ceftazidime, và cỏc hàng sau là ceftazidime kết hợp clavulanic acid, cefotaxime kết hợp clavulanic acid, ceftriaxone kết hợp clavulanic acid. Đọc kết quả
Nếu vi khuẩn sinh ESBL (+) mỏy sẽ tự ủộng bỏo kết quả và cho những thụng tin liờn quan
Ưu ủiểm
Cho kết quả nhanh sau 18 - 24h về vi khuẩn kốm theo khỏng sinh ủồ MIC Nhược ủiểm
Giỏ thành cũn cao và phải cài ủặt phần mềm cập nhật thủ cụng.
1.2.3.8 Phương phỏp sinh học phõn tử PCR (polymerase chain reation).
Nguyến tắc
Ưu ủiểm
PCR cú ủộ nhạy và ủặc hiệu cao. Nhược ủiểm
Chỉ xỏc ủịnh gen mó hoỏ enzyme, khụng khẳng ủịnh ủược thực tế vi khuẩn cú sinh ESBL trờn lõm sàng hay khụng, giỏ thành cao.