Cột cao flavonoid thô sẽ được nhồi bằng phương pháp nhồi cột ướt.
Chuẩn bị cột sẵn sàng trên giá đỡ, đuôi cột được lót bằng một miếng bông.
Rót đều tay silica gel vào trong cột.
Ổn định cột bằng hệ dung môi giải ly C:Me = 9:1 trong nhiều giờ.
Sau đó nạp từ từ chất phân tích vào trong cột.
Sử dụng các hệ dung môi giải ly cột có độ phân cực tăng dần kể từ hệ dung môi đầu tiên là C:Me = 9:1. Dung môi giải ly được hứng trong mỗi lọ 50 ml có đánh số thứ tự, dung dịch trong mỗi lọ sẽ được đem cô quay ở áp suất kém và sẽ được sắc ký lớp mỏng trên cùng một bản mỏng. Thuốc thử hiện hình là
H2SO4 10% trong methanol. Những lọ nào có cùng vết sắc ký, có Rf giống nhau sẽ được gom chung thành một phân đoạn.
Hình 28: Sắc ký bản mỏng cao flavonoid thô Hình 29: Sắc ký cột cao flavonoid thô K ế t q u ả c ủ a q u á t r ì n h s ắ t k ý c ộ t Phân đoạn Số thứ tự lọ Dung môi giải ly cột Dạng chất
Dung môi giải ly bản mỏng Kết quả giải ly bản mỏng Ghi chú 1 1 - 20 C:Me = 9:1 Sáp màu xanh C:Me = 2:1 Không có vết Không khảo sát 2 21 - 35 C:Me = 8:2 Sáp màu trắng C:Me = 2:1 2 vết Không khảo sát 3 36 - 104 C:Me = 8:2 Sáp màu trắng C:Me = 2:1 2 vết Không khảo sát 4 105 - 130 C:Me = 8:2 Sáp màu trắng C:Me = 2:1 3 vết Không khảo sát 5 131 - 222 C:Me = 7:3 Tinh thể trắng lẫn màu xanh C:Me = 1:1 2 vết Không khảo sát
Đề tài luận văn tốt nghiệp Tháng 06/2008 Trang 50 trắng màu tím sen sát Bảng 17: Kết quả của quá trình sắc ký cột
Phân đoạn 6 sắc ký bản mỏng với thuốc thử hiện hình là H2SO4 10% trong methanol với hệ dung môi giải ly bản mỏng là C:Me = 1:1 cho kết quả 1 vết tròn màu tím sen có Rf = 0,44.
Kết l uậ n
Hình 30: Kết quả sắc ký bản mỏng phân đoạn 6
Quá trình sắc ký cột cao flavonoid thô thu được 1 vết tròn màu tím sen ở phân đoạn 6. Tuy nhiên do thời gian có hạn và chất thu được còn ít, nên chúng em chưa tiến hành tinh chế chất thu được, mong rằng những bạn sau sẽ tiếp tục quá trình này.
Phần 3: Kết luận và kiến nghị
PHẦN 3
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Phần 3: Kết luận và kiến nghị
KẾT L UẬ N
Qua hơn 3 tháng thực hiện đề tài luận văn tốt nghiệp “Khảo sát các hợp chất họ flavonoid trong cây Rau Má Lá Sen Hydrocotyle bonariensis L. và
Hydrocotyle vulgaris L.” chúng em đã đạt được một số kết quả sau:
Điều chế các mẫu cao gồm: Cao methanol tổng, cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao buthanol, cao methanol cuối và cao nước từ hai cây Rau Má Lá Sen Hydrocotyle bonariensis và Hydrocotyle vulgaris
bằng 2 phương pháp: phương pháp trích lỏng – lỏng (điều chế cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao buthanol) và phương pháp trích rắn – lỏng (trích bằng phương pháp ngâm dầm điều chế cao methanol tổng, cao nước; trích bằng Soxhlet điều chế cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao methanol cuối). Kết quả thu được là thu suất cao trích từ phương pháp rắn – lỏng cao hơn thu suất cao trích từ phương pháp lỏng – lỏng.
Định tính sự hiện diện của flavonoid trong các cao đã được điều chế bằng các thuốc thử khác nhau. Cho kết quả dương tính ở cao methanol tổng, cao ethyl acetate, cao buthanol, cao nước và cho kết quả âm tính ở cao petroleum ether và cao chlorform.
Trích flavonoid thô từ cao methanol tổng bằng hai phương pháp: Trích flavonoid bằng dung dịch acetate chì và trích flavonoid bằng các dung dịch kiềm có độ kiềm khác nhau. Kết quả cho thấy lượng flavonoid thô trích được từ cao methanol tổng chứa trong cây Hydrocotyle bonariensis nhiều hơn trong cây Hydrocotyle vulgaris và lượng flavonoid thô thu được từ phương pháp trích flavonoid bằng các dung dịch kiềm có độ kiềm khác nhau có hiệu quả hơn so với phương pháp trích flavonoid bằng dung dịch acetate chì.
Thu suất flavonoid thô thu được từ phương pháp trích flavonoid bằng dung dịch acetate chì như sau:
+ Thu suất flavonoid thô của cây Hydrocotyle bonariensis 15,50%. + Thu suất flavonoid thô của cây Hydrocotyle vulgaris 10%.
Phần 3: Kết luận và kiến nghị
Thu suất flavonoid thô thu được từ phương pháp trích flavonoid bằng các dung dịch kiềm có độ kiềm khác nhau như sau: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Thu suất flavonoid thô của cây Hydrocotyle bonariensis 18,75%. + Thu suất flavonoid thô của cây Hydrocotyle vulgaris 13,75%.
Sắc ký cột cao flavonoid thô cây Hydrocotyle bonariensis thu được 6 phân đoạn, trong đó phân đoạn 6 thu được 1 vết tròn màu tím sen có Rf = 0,44. Tuy nhiên do thời gian có hạn và lượng chất thu được ít nên chúng em chưa tiến hành tinh chế chất thu được, hi vọng rằng những bạn sau sẽ tiếp tục quá trình này.
K
I ẾN N GH Ị
Do có sự hạn chế về thời gian và điều kiện thí nghiệm nên đề tài vẫn còn nhiều hạn chế. Vì vậy, hi vọng rằng những bạn kế tiếp sẽ tiếp tục nghiên cứu thêm về đề tài này:
Tiếp tục khảo sát các phân đoạn còn lại của cột sắc ký cao flavonoid thô cây
Hydrocotyle bonariensis.
Tiếp tục khảo sát, mở rộng hướng nghiên cứu tách và phân lập các flavonoid trong cây Rau Má Lá Sen.
Tài liệu tham khảo
TÀI LIỆU THAM KHẢO
[1] Võ Văn Chi, Trần Hợp. Cây cỏ có ích ở Việt Nam, tập I. Nhà xuất bản giáo dục năm 1999.
[2] Trần Thị Việt Hoa, Lê Thị Hồng Nhan, Nguyễn Thị Thanh Thuyền, Nguyễn Thị Mỹ Lữ. Báo cáo khoa học. Nghiên cứu tách chất màu tự nhiên từ hoa Hòe. Khoa Công Nghệ Hóa Học Và Dầu Khí, Đại Học Bách Khoa Tp.HCM, năm
2003.
[3] Phạm Hoàng Hộ. Cây cỏ Việt Nam, tập II. Nhà xuất bản trẻ năm 1972.
[4] Tôn Nữ Liên Hương. Luận án thạc sĩ.
[5] Đỗ Tất Lợi. Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. Nhà xuất bản y học, năm 2004.
[6] Nguyễn Kim Phi Phụng. Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ. Đại Học Quốc Gia TPHCM, năm 2007, trang 95 – 97.
[7] Bộ môn Dược Liệu Trường đại học Y dược Thành Phố Hồ Chí Minh. Phương pháp nghiên cứu được liệu 2006
[8] Hiller K., Keipert M., Pfeifer.,(1917), Sponins of Hydrocotyle vulgaris, Pharmazie. 26(12),780.
[9] Rzadkowska-Bodalska Halina, Olechnowicz-Stepien Waleria, (1974).
[10] Hiller K., Voigt Gabriele, Koeppel H., Otto A., (1979).
[11]h t t p :// ww w . go o g l e . c o m . v n / s e a r c h ? h l = v i & a s _q d r = a ll & q =+ %2 2 N GH I % C 3 % 8AN+C%E1%BB%A8U+TR%C3%8DCH+POLYPHENOL+T%E1%BB%AA+ TR%C3%80%22&btnG=T%C3%ACm+ki%E1%BA%BFm&meta= [12]http://209.85.175.104/search?q=cache:y5UM1rbsbSIJ: w w w . m e t a b o l o m e . j p /s oftware/FlavonoidViewer/+%22Flavonoid+is+synthesized+through+the+phenyl propanoid- acetate+pathway+in+all+higher+plants.+ %22&hl=vi&ct=clnk&cd=1&gl=vn
Tài liệu tham khảo
[13] h t t p : // s u c k h o e c o n gd on g . c o m / d i n h - du o ng / v i t a m i n - k ho a n g - c h a t . h t m l
[14] h t t p : / / ph uo c n hu a n . ji m do . c o m / d o w n l o a d / 7 6 5 70 003 / B 8 + - +CAC+H+C+THU+CAP.pdf
[15] h t t p : // w ww . n e a r f u t u r e l a bo r a t o r y . co m / f il e s / F l a von o i d _ P r op o s a l _ 07 2 70 6 . p d f
[16]h t t p :// ww w . go o g l e . c o m . v n / s e a r c h ? h l = v i & l r = & a s _ q d r =a ll & q = r e l a t e d : ww w 1 . bsc.com.vn:8080/EDMS/webcorannc.nsf/885741814283a7ef47256dff0034baff/9 574dcc3f4bc12154725734f003aedbb/$FILE/20070907-IMP-Bancaobach.pdf [17]h t t p :// 2 0 9 . 85 . 1 75 . 1 04 / s e a r c h ? q =c a c h e : J A o J j q6 c b H Y J : d i c t i on a r y . b a c h k ho a t o anthu.gov.vn/default.aspx%3Fparam%3D15F4aWQ9MjI3MTImZ3JvdXBpZD0 ma2luZD1zdGFydCZrZXl3b3JkPXI%3D%26page%3D1+%22RAU+M%C3%8 1%22&hl=vi&ct=clnk&cd=72&gl=vn