pháp ngâm dầm)
Cao methanol tổng và cao nước của cây Hydrocotyle bonariensis và cây
Hydrocotyle vulgaris sẽ được điều chế theo cùng một qui trình được thể hiện trong sơ đồ sau:
Cây tươi
1. Bỏ lá sâu, héo, rửa sạch, phơi gió. 2. Sấy khô trong tủ sấy 450C, xay nhuyễn. Bột cây khô
Bã
1. Ngâm dầm với nước cất. 2. Cô quay.
1. Ngâm dầm với Me. 2. Cô quay.
Cao Me tổng
Cao nước
Sơ đồ 6: Điều chế cao methanol tổng và cao nước 2.2.1.1. Điều chế cao methanol tổng
Cao methanol tổng của cây Hydrocotyle bonariensis: Bột cây khô sau khi cho vào trong túi vải, được đem trích kiệt qua nhiều lần ngâm trích với tổng cộng 20 lít methanol ở nhiệt độ phòng. Đem dịch trích methanol, lọc qua giấy lọc và cô quay thu hồi dung môi dưới áp suất kém, ta thu được cao methanol tổng màu xanh đậm.
Khối lượng cao methanol tổng thu được 125 gam.
Thu suất điều chế cao methanol tổng của cây Hydrocotyle bonariensis so với bột cây khô (1,70 kg).
H 125
1700x100% 7,35%
Cao methanol tổng của cây Hydrocotyle vulgaris: Cao methanol tổng của cây Hydrocotyle vulgaris được điều chế tương tự như cây Hydrocotyle bonariensis, ta thu được cao methanol tổng của cây Hydrocotyle vulgaris có màu xanh đậm.
Khối lượng cao methanol tổng thu được 150 gam.
Thu suất điều chế cao methanol tổng của cây Hydrocotyle vulgaris so với bột cây khô (1,80 kg).
Đề tài luận văn tốt nghiệp Tháng 06/2008
Trang 29
H 150
1800x100% 8,33%
Kết quả chấm sắc ký bản mỏng cao methanol tổng của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris với hệ giải ly Me:AcOH = 40:3, nhúng bản mỏng vào thuốc thử H2SO4 10% trong methanol.
Hình 6: Sắc ký bản mỏng cao Me tổng của cây Hydrocotyle bonariensis
Hình 7: Sắc ký bản mỏng cao Me tổng của cây Hydrocotyle vulgaris
2.2.1.2. Điều chế cao nước
Sau khi bột cây khô được trích kiệt với methanol tổng, bã bột cây được trích tiếp với nước cất (trích nhiều lần, cho tới khi dung dịch trong bình trở nên trong thì ngưng), đem dịch trích lọc qua giấy lọc và cô quay các dịch trích dưới áp suất kém, ta thu được cao nước với số lượng như sau: 73 gam cao nước của cây Hydrocotyle bonariensis và 110 gam cao nước của cây Hydrocotyle vulgaris.
Thu suất điều chế cao nước của cây Hydrocotyle bonariensis so với bột cây khô (1,7 kg).
H 73
1700x100% 4,29%
Thu suất điều chế cao nước của cây Hydrocotyle vulgaris so với bột cây khô (1,8 kg).
H 110
1800x100% 6,11%
Kết quả chấm sắc ký bản mỏng cao nước của cây Hydrocotyle bonariensis
và cây Hydrocotyle vulgaris với hệ giải ly Bu:AcOH:H+ = 4:5:1, nhúng bản mỏng vào thuốc thử H2SO4 10% trong methanol.
Hình 8: Sắc ký bản mỏng cao nước của cây Hydrocotyle bonariensis
Hình 9: Sắc ký bản mỏng cao nước của cây Hydrocotyle vulgaris
Sau đây là bảng tóm tắt thu suất điều chế cao methanol tổng và cao nước so với bột cây khô của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle
vulgaris.
Bảng 7: Tóm tắt thu suất điều chế cao methanol tổng và cao nước
Thu suất Loại cây riêng phần (%) Cây Hydrocotyle bonariensis Cây Hydrocotyle vulgaris Cao Me tổng 7,35 8,33 Cao nước 4,29 6,11 Thu suất tổng (%) 11,64 14,44 K
ế t l u ậ n : Thu suất điều chế cao methanol tổng và cao nước của cây
Hydrocotyle vulgaris cao hơn cây Hydrocotyle bonariensis.
2.2.2. Điều chế cao theo phương pháp trích lỏng – lỏng
2.2.2.1. Sơ đồ điều chế cao
Bằng phương pháp trích lỏng – lỏng, các cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao buthanol của cây Hydrocotyle bonariensis và cây
Hydrocotyle vulgaris sẽ được điều chế từ cao methanol tổng theo cùng một qui trình được thể hiện trong sơ đồ sau:
Cao Me tổng Trích lỏng - lỏng với PE Lớp dưới Trích lỏng - lỏng với C Lớp trên Cô quay Lớp trên Trích lỏng - lỏng với Ea Lớp dưới Cô quay Cao C Cao PE Lớp trên Trích lỏng - lỏng với Bu Lớp trên Cô quay Lớp dưới Cô quay Cao Ea Cao Bu Sơ đồ 7: Điều chế cao theo phương pháp
trích lỏng – lỏng 2.2.2.2. Điều chế cao petroleum ether
Đem lượng cao methanol tổng (của cây Hydrocotyle bonariensis 55 gam và cây
Hydrocotyle vulgaris 55 gam), pha loãng với nước cất, lọc qua bông loại bỏ cặn bẩn, sau đó đem trích lỏng – lỏng với petroleum ether (trích nhiều lần, cho tới khi phần dung dịch lớp trên trong thì ngưng ), lấy phần dung dịch lớp trên cô quay thu được 6,30 gam cao petroleum ether của cây Hydrocotyle bonariensis
và 11,90 gam cao petroleum ether của cây Hydrocotyle vulgaris.
Thu suất điều chế cao petroleum ether của cây Hydrocotyle bonariensis so với cao methanol tổng (55 gam).
H 6,30 x100% 11,45% 55
Thu suất điều chế cao petroleum ether của cây Hydrocotyle vulgaris so với cao methanol tổng (55 gam).
H 11,90 x100% 21,64% 55
Kết quả chấm sắc ký bản mỏng cao petroleum ether của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris với hệ giải ly PE:C = 2:1, nhúng bản mỏng vào thuốc thử H2SO4 10% trong methanol.
Hình 10: Sắc ký bản mỏng cao PE của cây Hydrocotyle bonariensis
Hình 11: Sắc ký bản mỏng cao PE của cây Hydrocotyle vulgaris
2.2.2.3. Điều chế cao chloroform
Phần dung dịch lớp dưới còn lại sau khi trích lỏng –lỏng với petroleum ether, được đem trích lỏng – lỏng tiếp với chloroform (trích nhiều lần, cho tới khi phần dung dịch lớp dưới trong thì ngưng), lấy phần dung dịch lớp dưới cô quay thu được 9,10 gam cao chloroform của cây Hydrocotyle bonariensis và 10,10 gam cao chloroform của cây Hydrocotyle vulgaris.
Thu suất điều chế cao chloroform của cây Hydrocotyle bonariensis so với cao methanol tổng (55 gam).
H 9,10 x100% 16,55% 55
Thu suất điều chế cao chloroform của cây Hydrocotyle vulgaris so với cao methanol tổng (55 gam).
H 10,10 x100% 18,36% 55
Kết quả chấm sắc ký bản mỏng cao chloroform của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris vơí hệ giải ly C:Ea = 3:1, nhúng bản mỏng vào thuốc thử H2SO4 10% trong methanol.
Hình 12: Sắc ký bản mỏng cao C của cây Hydrocotyle bonariensis
Hình 13: Sắc ký bản mỏng cao C của cây Hydrocotyle vulgaris
2.2.2.4. Điều chế cao ethyl acetate
Phần dung dịch lớp trên còn lại sau khi trích lỏng- lỏng với chloroform được đem trích lỏng – lỏng tiếp với ethyl acetate (trích nhiều lần, cho tới khi phần dung dịch lớp trên trong thì ngưng), lấy phần dung dịch lớp trên cô quay thu được 2,70 gam cao ethyl acetate của cây Hydrocotyle bonariensis và 5 gam cao ethyl acetate của cây Hydrocotyle vulgaris.
Thu suất điều chế cao ethyl acetate của cây Hydrocotyle bonariensis so với cao methanol tổng (55 gam).
H 2,70 x100% 4,91% 55
Thu suất điều chế cao ethyl acetate của cây Hydrocotyle vulgaris so với cao methanol tổng (55 gam).
H 5
55x100% 9,09%
Kết quả chấm sắc ký bản mỏng cao ethyl acetate của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris với hệ giải ly Ea:C = 3:1, nhúng bản mỏng vào thuốc thử H2SO4 10% trong methanol.
Hình 14: Sắc ký bản mỏng cao Ea của cây Hydrocotyle bonariensis
2.2.2.5. Điều chế cao buthanol
Hình 15: Sắc ký bản mỏng cao Ea của cây Hydrocotyle vulgaris
Phần dung dịch lớp dưới còn lại sau khi trích lỏng - lỏng với ethyl acetate được đem trích lỏng - lỏng tiếp với buthanol (trích nhiều lần, cho tới khi phần dung dịch lớp trên trong thì ngưng), lấy phần dung dịch lớp trên cô quay thu được 5,60 gam cao buthanol của cây Hydrocotyle bonariensis và 6,10 gam cao buthanol của cây Hydrocotyle vulgaris.
Thu suất điều chế cao buthanol của cây Hydrocotyle bonariensis so với cao methanol tổng (55 gam).
H= H 5,60 x100%
10,18% 55
Thu suất điều chế cao buthanol của cây Hydrocotyle vulgaris so với cao methanol tổng (55 gam).
H 6,10 x100%
11,09% 55
Kết quả chấm sắc ký bản mỏng cao buthanol của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris với hệ giải ly Me:AcOH = 40:3, nhúng bản mỏng vào thuốc thử H2SO4 10% trong methanol.
Hình 16: Sắc ký bản mỏng cao Bu của cây Hydrocotyle bonariensis
Hình 17: Sắc ký bản mỏng cao Bu của cây Hydrocotyle vulgaris
Sau đây là bảng tóm tắt thu suất điều chế các mẫu cao của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris bằng phương pháp trích lỏng – lỏng.
Bảng 8: Thu suất điều chế các mẫu cao bằng phương pháp trích lỏng – lỏng
Thu suất Loại cây riêng phần (%) Cây Hydrocotyle bonariensis Cây Hydrocotyle vulgaris Cao PE 11,45 21,64 Cao C 16,55 18,36 Cao Ea 4,91 9,09 Cao Bu 10,08 11,09 Thu suất tổng (%) 42,99 60,18 K
ế t l u ậ n : Từ bảng tóm tắt thu suất điều chế các mẫu cao của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris bằng phương pháp trích lỏng – lỏng ta thu được kết quả sau:
Thu suất tổng của các cao: Cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl
acetate, cao buthanol so với cao methanol tổng của cây Hydrocotyle bonariensis là 42,99% và thu suất riêng phần của cao petroleum ether so với cao methanol tổng là cao nhất 11,45%.
Thu suất tổng của các cao: Cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl
acetate, cao buthanol so với cao methanol tổng của cây Hydrocotyle vulgaris
là 60,18% và thu suất riêng phần của cao petroleum ether so với cao methanol tổng là cao nhất 21,64%.
V
ậ y : Bằng phương pháp trích lỏng – lỏng ta nhận thấy thu suất tổng điều chế các cao của cây Hydrocotyle vulgaris (60,18%) cao hơn cây Hydrocotyle bonariensis
2.2.3. Điều chế cao theo phương pháp trích rắn – lỏng (trích Soxhlet)
2.2.3.1. Sơ đồ điều chế cao
Các mẫu cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao methanol cuối của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris sẽ được điều chế từ cao methanol tổng bằng phương pháp trích rắn – lỏng theo cùng một qui trình được thể hiện trong sơ đồ sau:
Cao Me tổng
1. Trích pha rắn với PE 2 . Cô qu a y thu hồi dung môi Cao PE
Cao C
Bã
1. Trích pha rắn với C 2. Cô quay thu hồi dung môi
Bã
1. Trích pha rắn với Ea 2. Cô quay thu hồi dung môi Cao Ea Bã
1. Trích pha rắn với Me 2. Cô quay thu hồi dung môi
Bã Cao Me cuối
Sơ đồ 8: Điều chế cao theo phương pháp trích rắn – lỏng 2.2.3.2. Điều chế cao
Quá trình điều chế các mẫu cao được thực hiện theo qui trình trong sơ đồ 8, với lượng cao methanol tổng ban đầu là: Cây Hydrocotyle bonariensis 55 gam và cây Hydrocotyle vulgaris 55 gam, ta thu được kết quả sau:
Cao petroleum ether
Cao petroleum ether cây Hydrocotyle bonariensis khối lượng 9 gam. + Thu suất điều chế cao petroleum ether so với cao methanol tổng.
H 9
55x100% 16,36%
Cao petroleum ether cây Hydrocotyle vulgaris khối lượng 28,94 gam. + Thu suất điều chế cao petroleum ether so với cao methanol tổng.
H 28,94 x100% 52,62% 55
Cao chlroform
Cao chloroform cây Hydrocotyle bonariensis khối lượng 7,50 gam. + Thu suất điều chế cao chloroform so với cao methanol tổng.
H 7,50 x100% 13,64% 55
Cao chloroform cây Hydrocotyle vulgaris khối lượng 14,10 gam. + Thu suất điều chế cao chloroform so với cao methanol tổng.
H 14,10 x100% 25,64% 55
Cao ethyl acetate
Cao ethyl acetate cây Hydrocotyle bonariensis khối lượng 6 gam. + Thu suất điều chế cao ethyl acetate so với cao methanol tổng.
H 6
55x100% 10,91%
Cao ethyl acetate cây Hydrocotyle vulgaris khối lượng 6,16 gam. + Thu suất điều chế cao ethyl acetate so với cao methanol tổng.
H 6,16 x100% 11,20% 55
Cao methanol cuối
Cao methanol cuối cây Hydrocotyle bonariensis khối lượng 22,50 gam. + Thu suất điều chế cao methanol cuối so với cao methanol tổng.
H 22,50 x100% 40,91% 55
Cao methanol cuối cây Hydrocotyle vulgaris khối lượng 4,14 gam. + Thu suất điều chế cao methanol cuối so với cao methanol tổng.
H 4,14 x100% 7,53% 55
Sau đây là bảng tóm tắt thu suất điều chế các mẫu cao của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris theo phương pháp trích rắn – lỏng.
Bảng 9: Thu suất điều chế các mẫu cao bằng phương pháp trích rắn – lỏng (trích Soxhlet)
Thu suất Loại cây riêng phần (%) Cây Hydrocotyle bonariensis Cây Hydrocotyle vulgaris Cao PE 16.36 52,62 Cao C 13,64 25,64 Cao Ea 10,91 11,20 Cao Me cuối 40,91 7,53 Thu suất tổng (%) 81,82 96,99 K
ế t l u ậ n : Từ bảng tóm tắt thu suất điều chế các mẫu cao của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris bằng phương pháp trích rắn – lỏng ta thu được kết quả sau:
Thu suất tổng của các cao: Cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao methanol cuối so với cao methanol tổng cây Hydrocotyle bonariensis là 81,82% và thu suất riêng phần của cao methanol cuối so với cao methanol tổng là cao nhất 40,91%.
Thu suất tổng của các cao: Cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao buthanol so với cao methanol tổng cây Hydrocotyle vulgaris là 96,99% và thu suất riêng phần của cao petroleum ether so với cao methanol tổng là cao nhất 52,62%.
V
ậ y : Bằng phương pháp trích rắn – lỏng ta nhận thấy thu suất tổng điều chế các cao của cây Hydrocotyle vulgaris (96,99%) cao hơn cây Hydrocotyle bonariensis
2.3. Định tính sự có mặt của flavonoid trong các mẫu cao
2.3.1. Định tính sự có mặt của flavonoid bằng thuốc thử Sibata và dung
dịch H2SO4 đậm đặc
Thuốc thử Sibata: H2SO4 đậm đặc, bột Mg kim loại, rượu isoamylic.
T
h í n g h i ệ m
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử: Lấy 2 gam cao đem hoà tan trong 20 ml nước cất đun sôi, lọc lấy dịch lọc làm mẫu thử.
Cho dung dịch thử vào 3 ống nghiệm.
Ống 1: 2 ml dung dịch thử làm đối chứng.
Ống 2: 2 ml dung dịch thử, thêm 5 ml H2SO4 đậm đặc, 0,1 gam Mg. Sau đó thêm từ từ rượu isoamylic theo thành ống. Đun nóng, một vòng màu hồng từ từ xuất hiện chuyển sang đỏ cam hoặc đỏ tím, chứng tỏ có hiện diện flavonoid.
Ống 3: 2 ml dung dịch thử thêm 5 giọt H2SO4 đậm đặc, hỗn hợp chuyển màu vàng đậm sang da cam chứng tỏ có flavonoid.
Lần lượt tiến hành thí nghiệm trên với cao methanol tổng, cao petroleum ether, cao chloroform, cao ethyl acetate, cao buthanol, cao nước của cây
Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris.
K
ế t q u ả : Cao methanol tổng, cao ethyl acetate, cao buthanol, cao nước cho kết quả dương tính (+) với thuốc thử (có hiện diện flavonoid), cao petroleum ether và cao chloroform cho kết quả âm tính (-) với thuốc thử (không có hiện diện
flavonoid).
1 2 3 1 2 3
Hình 18: Định tính flavonoid cho kết quả dương tính của cây Hydrocotyle bonariensis
Hình 19: Định tính flavonoid cho kết quả dương tính của cây Hydrocotyle vulgaris
Đề tài luận văn tốt nghiệp Tháng 06/2008
Trang 40
Sau đây là bảng tóm tắt kết quả định tính flavonoid trong các cao của cây
Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris.
Bảng 10: Kết quả định tính flavonoid trong các cao của cây Hydrocotyle bonariensis
Thuốc thử Cao Me tổng Cao PE Cao C Cao Ea Cao Bu Cao nước
Sibata +++ - - + ++ ++
Dung dịch H2SO4
+++ - - + + ++
Bảng 11: Kết quả định tính flavonoid trong các cao của cây Hydrocotyle vulgaris
Thuốc thử Cao Me tổng Cao PE Cao C Cao Ea Cao Bu Cao nước
Sibata +++ - - + ++ ++
Dung dịch H2SO4
+++ - - + + ++
K
ế t l u ậ n : Sự hiện diện của flavonoid trong các cao trích của cây Hydrocotyle bonariensis và cây Hydrocotyle vulgaris đối với thuốc thử Sibata và dung dịch H2SO4 đậm đặc là giống nhau. Cho kết quả dương tính ở cao methanol tổng, cao ethyl acetate, cao buthanol, cao nước và cho kết quả âm tính ở cao petroleum ether, cao chloroform. Trong đó, hàm lượng flavonoid trong cao methanol tổng là nhiều nhất, không thấy flavonoid hiện diện trong cao petroleum ether và cao chloroform.
2.3.2. Định tính sự có mặt của flavonoid bằng 3 loại thuốc thử: Thuốc thửStiasny, chì acetate bão hoà và dung dịch FeCl3 bão hoà Stiasny, chì acetate bão hoà và dung dịch FeCl3 bão hoà
Thuốc thử Stiasny: formol 36%, HCl đậm đặc.
T
h í n g h i ệ m :
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử: 2 gam cao được hòa tan trong 20 ml nước cất đun sôi, lọc lấy dịch lọc làm mẫu thử.
Ống 1: 2 ml dung dịch mẫu thử cho vào ống nghiệm làm dung dịch chuẩn.
Ống 2: 2 ml dung dịch mẫu thử, thêm 1 ml thuốc thử Stiasny xuất hiện màu vàng nâu dạng bột, chứng tỏ có flavonoid.