- Ung dong co Vcich 50 mi, 500 mi, 1000 mị
Mòi triròng LH vira dù mot Iit
2.2 . Phircmg phàp thirc nghiém.
2.2.1. Chudn bi triaig gà co phóị
Trùng gà da thii tinh duge à'p ò tu àm 3 9 ^ vói dò àm 60% trong 9 ngàỵ Trong thòi gian này càc trùng gà dugc dào it nhàt 2 làn trong 1 ngàỵ Vào ngày tbù 9, truóc khi dùng trùng phài kiém tra su phàt trién cùa phói dirói dèn soi tmng, quan sàt thà'y càc mach màu rò, phói phàt trién bình thuòng, khoè mói dem su dung. Trùng nào khòng dat càc tiéu chuàn trén sé loai bò. Phàn vò chùa tùi khf cùa càc trùng bình thuòng duge dành dàu bang bùt ehị
2.2.2. Chuàn bi nuói cày té bào CEF (chick Embryos Fibroblast).
Nhùng trùng dà lua chon dugc lùa saeb bang nuóc càt, dùng gae vó trùng tàm dung dich con lau lai va dàt vào già. Càc tn'rng trén già duge xit con mot làn nùạ
Dùng kéo cong nhe nhàng càt lua bò phàn vò cùng chùa khóng khf cùa trùng, lóp màng tràng ben trong dugc bóc lo, locai bò lóp màng do bang kcp vó trùng. Su diing kep khàc, kep eó nhàe phói ra khòi tróng, thao tàc càn nhe nhàng va ehùih xàc trành làm dùt eó cùa phòị Phói là'y ra dat trong dia petri 9 cm chùa 20 mi CMF-H. Mói dia chùa 4 phòi, dàu chàn va nói tang duge càt bò, càn lugng phói truóc khi rùạ Qio phàn vùa càn vào bình thuy tinh dung tieh 200 mi eó chùa 50 mi CMF-H de rùa phòị Càc phòi này dugc rùa 3 làn bang CMF-H de loai bò màu, rùa lai làn nùa bang trypsin 0,25% trong CMF- H hoàc trypsin 0,25% thém axit amin. Cho 4 phói dà rua saeb vào bom tiém 5 mi, dùng pittòng day té bào phòi ra khòi bom tiém vào bình càu chia vach chíra 40 mi trypsin hoàc trypsin eó axit amin da duge de à'm ò nhiét do 37X\ Làc nhe phói rói de yèn 5 phùt, sau dò khuà'y bang mày khuà'y tu trong 7 phùt, de làng nhùng mành phói chua tan trong 1 phùt. Gan phàn hón dich té
bào da tàch ò trén vào bình thuy tinh co 200ml eó chùa 50 mi mói truòng LH vói 5% huyét thanh bé, làc nhe cho déu hón dich trong té bào, hón dich này giù trong tu lanh ò 4 ^ . Viéc trypsin hoà càc mành vò té bào duge nhàe lai 2 làn nùa vói dung dich trypsin hoàc trypsin axit amin. Lgc qua phéu Ige (eó 3 lóp màng lgc), li tàm hón dich té' bào thu duge vói tÓc dò 1000 vòng/phùt trong 7 phùt ò nhiét dò 5''C. Nhe nhàng loai bò lóp nuóc nói ben trén, tròn déu lóp té bào làng ò duói vói 20 mi mói tniòng LH 3% huyé't thanh bé. Hón dich té bào trén pha vùa dù trong 100 mi bang LH 3% huyét thanh bé.
Là'y 1 mi hón djch té bào trén pha loang 8 làn, nhuòm té bào bang thuóc nhuòm xanh trypan 0,4%. Dém sÓ té bào song va chét trén buóng dém té bàọ Té bào song sé khòng bàt màu vói thuÓc nhuòm, té bào chét bàt màu xanh thàm cùa thuóc nhuòm. Tnih lugng té bào càn thiét dua vào mòi chai càỵ Pha loang sÓ hón dich té bào ban dàu bang mói truòng LH 3% huyét thanh bé, vói nóng dò 4.10^ té bào/lml. Dua vào mói chai té bào 15 mi hón
dich té bàọ Nhùng chai này duge giù trong tu à'm 36,5"C tói 3TC. Sau 2
ngày quan sàt su phàt trién cùa té bào mot lóp bang kmh hién vị
Dùng té bào 1 lóp này de nghién eùu càc buóc tiép theọ Néu chua tao thành té bào 1 lóp càn kiém tra cac yéu tó lién quan.
Dua trén phuong phàp xù li so lieu ve ké hoach hoà thuc nghiém chùng tói dành già nhùng két qua dò theo phàn tieh phuong sai:
- Phàn tfch tàc dòng cùa càc nhàn tó qua tham sÓ phuong sai, goi là phàn tfch phuong saị Tu nhùng ké't qua thuc nghiém duge tfnh toàn su diing chuàn fisher de so sành phifong saị
Fanh = l i - so vói F,,„g (P, f„ f^)
Trong dò:
S^ : dàc trung cho su khàc nhau cùa ké't qua thuc nghiém. Do su khàc nhau giùa càc mùc cùa A gay rạ
S]: dac tiimg cho sai sÓ thuc nghiém nói chung, vi làm thue nghiém
bao giò cùng màc sai sÓ.
f,: bàc tu do cùa sÓ mùc thuc nghiém dà làm f, = k - 1.
(2: bàc tu do cùa sÓ nghién eùu da tién hành trong qui hocach thuc
nghiém,
f^ = k(n - 1). Vi F luón lón hon 1 nén:
- Néu F,^„„ < Fb.^„g tbì F,f„„ khóng dàng tin cày, tue là S; ^ S] khóng dàng
tin càỵ Cho nén chùng duge eoi là giÓng nhaụ Chùng khóng khàc nhau nén nhàn tó A khi thay dói da tò ra khòng eó tàc dòng dén ké't qua thue nghiém.
- Néu F,j„,, > Ft,.,g tbì F(f„,, dàng tin cày, tue là S^ ;^ S^. Suy ra nhàn tó A dà co tàc dòng lén két qua thuc nghiém.
Chuong 3
KÉT QUA VÀ THÀO LUÀN
Nbiém vu cùa luàn àn là tìm diéu kién de tàch té bào tu phòi gà va quan sàt qua trình phàt trién cùa té bào sau hai ngày nuói càỵ O day chùng tói dà dùng trypsin (T) va trypsin eó axit amin (Ta) de tàch té bàọ Qua thue nghiém chùng tói dà thu duge ké't qua sau:
3.L Só té bào sóng/ml dugc tàch tir phói gà.
Trong bang 1 va biéu dò I chùng tói trình bay càc két qua ve sÓ té bào sóng/ml bang phuong phàp trypsin hoà qua 10 thf nghiém.
BànR 1 : So té bào sÓng/ml. 10'' ^"^•-v^ung dich So thi n g h i é m ^ \ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 r
SÒ té'bào song/1 mLlO"*
T. 4,82 4,05 4,49 2,45 4,89 3,14 4,78 1,96 2,95 3,51 3,704 T 3,75 1,46 2,56 1,58 2,8 2,64 3,42 1,4 1,76 1,82 2,319