Nh ng vùng ch4a Cystein 7c b8o t9n
Cyt-P450cam là phân t� ��u tiên �ư�c phân tích toàn b�trình t�
axit amin. Sau �ó, Cyt-P450 tách t�gan chu�t, là Cyt-P450 ��u tiên c�a��ng v�t có vú �ư�c phân tích trình t�axit amin b�ng cách suy di�n t�trình t�nucleotide cDNA (Fujii-Kuriyama và cs), t� �ó c�u trúc b�c 1 c�a hơn 50 lo�i khác nhau c�a eukaryotic CYP450 �ã
�ư�c công b�. Trình t� s�p x�p trong c�u trúc b�c m�t �ã bi�t ch�ng t� r�ng có 3 vùng ch�a Cys �ư�c b�o t�n cao trong các Cytochrome tách t� microsome ��ng v�t có vú, nh�ng vùng b�o t�n này ch�a Cys152, Cys180 và Cys436 theo s� �ánh s� c�a CYP450. Trình t�này �ã�ư�c s� d�ng �� d� �oán s� ��nh v� c�a các g�c Cystein như là proximal thiolate ligand ��i v�i hem. G�c Cystein th� 1 và th� 3 n�m trong vùng b�o t�n cao nh�t trong s�
nh�ng c�u trúc �ã bi�t c�a các Cyt-P450, trong khi s� tương ��ng v� c�u trúc trong vùng c�a Cys180 � m�c �� kém hơn. Vùng Cys180 không �ư�c b�o t�n trong Cyt- P450cam ho�c Cyt-P450scc ti th�, không th�y có vùng Cys152 �ư�c b�o t�n � Cyt-P450scc.
Ch� có vùng Cys 436 là �ư�c b�o t�n cao trong t�t c� các c�u trúc b�c 1 c�a các Cyt-P450 th� eukaryotic và proeukaryotic �ã �ư�c bi�t cho ��n nay. Phát hi�n này g�i ý r�ng Cys436 trong Cyt-P450b
và g�c Cys tương�ng trong nh�ng Cyt-P450 khác có th�là ligand thiolat hoá v�i hem. Nghiên c�u tinh th�tia X trên Cyt-P450cam �ã ch�c ch�n r�ng Cys357 (tương �ương v�i Cys436 � Cyt-P450b) trong vòng xo�n Cys-ligand là ligand th�5 g�n�trung tâm.
Vùng ch4a threonin trong helix I
Trình t�tương��ng cao �ư�c tìm th�y trong vùng helix I. Trình t�s�p x�p các g�c 243 và 259�ã�ư�c ch�ra trong hình 2.2. Trình t� này �ư�c ��nh v� trong vùng lân c�n c�a hem và t�o ra túi liên k�t oxygen như �ã mô t� � trên. Các g�c 248-249 thư�ng là Gly- Gly ho�c Ala-Gly. Nguyên nhân vì sao các g�c có chu�i bên nh�
�ư�c b�o toàn cao trong v� trí này có th�là vì các g�c này ti�p xúc ch�t ch� v�i hem. �i�u quan tr�ng nh�t là Thr252, g�c t�o thành liên k�t hydro v�i Gly248 là không bi�n��i trong s�53 trình t�, tr�
m�t ngo�i l�.
Như �ã mô t� trư�c�ây, liên k�t hydrogen gi�a Gly248-Thr252
�ã phá v�ki�u liên k�t hydro �helix bình thư�ng và t�o ra s�bi�n d�ng c�c b�trong helix I ��ng th�i t�o ra túi oxygen. Như �ã ch�ra
�hình 2.2, s�ngo�i l� là Cyt-P450 ch�a proline trong v� trí tương
�ng v�i Thr252. M�t Cyt-P450PCN2 có 89% các g�c axit amin tương��ng v�i Cyt-P450PCN1, nhưng g�c�v�trí 310 c�a Cyt-P450- PCN2 là Thr. Tuy v�y, m�t s�bi�n d�ng trình t�tương t�trong helix
�ã �ư�c Poulos và cs. phát hi�n � Cyt-P450-PCN1, vì g�c Pro c�ng có th� ho�t ��ng như là 1 liên k�t hydro. C�u trúc -helix trong vùng c�ng �ư�c d� �oán là � trong 52 lo�i Cyt-P450 g�n màng khác. Như v�y, s� bi�n d�ng helix c�c b� c�a helix xa là m�t lo�i c�u trúc chung cho t�t c� các Cyt-P450 trong khi t�o thành v� trí liên k�t oxygen. Vai trò c�u trúc cho xúc tác c�a nh�ng g�c axit amin �ư�c b�o toàn này s� �ư�c mô t� �ph�n sau.
Nghiên c4u gây <t bi n tr=c ti p các v trí c'a Cyt-P450 Hi�n nay, nh� các k� thu�t sinh h�c phân t�, ngư�i ta có th�
thay th�các g�c axit amin này b�ng nh�ng axit amin khác. Gây ��t bi�n tr�c ti�p oligonucleotid c�a Cyt-P450 �ã�ư�c ti�n hành �Cyt- P450 tách t� gan chu�t do Shimuru và cs. và � Cyt-P450 tách t�
gan th�do nhóm c�a Sliga ti�n hành. Shimuru và cs. �ã t�o ra m�t s�enzym ��t bi�n v�i v�trí His và Tyr thay cho Cys465 không bi�n
��i và th�y r�ng CO-complex c�a enzym ��t bi�n không xu�t hi�n
�sóng h�p th� 450nm là v�trí ��c trưng cho Cyt-P450, s� li�u ch�
ra m�t cách tr�c ti�p r�ng g�c Cys chi�m v� trí liên k�t tr�c �Cyt- P450 � ��ng v�t có vú. Dư�i �ây là m�t s�ví d�v� nh�ng nghiên c�u gây ��t bi�n gen tr�c ti�p ��i v�i nh�ng axit amin có vai trò ch�c n�ng trên P450cam.
Gây <t bi n tr=c ti p v trí trong túi liên k t c ch t
C�u trúc tinh th� c�a Cyt- P450cam xác ��nh s� t�n t�i m�t s�
axit amin ��c bi�t (Tyr 96, Phe87, Val247 và Val295), chúng có th� �nh hư�ng ��n n�ng lư�ng liên k�t và s� ��nh hư�ng c�a phân t�camphor. Nh�ng tác ��ng qua l�i gi�a protein-cơch�t này ph�c v�cho vi�c��nh hư�ng v�trí C5c�a camphor ngay phía trên c�a s�t hem. S�th�y phân ��c hi�u vùng và��c hi�u không gian này t�o ra 5-exo-hydroxycamphor. Atkins và Sligar gây ��t bi�n 3 g�c:
Tyr96, Val295 và Val247 và th�y có s�bi�n��i trong tính ��c hi�u vùng c�a ph�n�ng thu�phân gây ra do nh�ng enzym ��t bi�n này.
��t bi�n Tyr 96 thành Phe gây ra s� r�i lo�n trong liên k�t hydro c�a Tyr 96 v�i cacbonylcamphor, d�n t�i t�ng �áng k�s�t�o thành 3 và 6-hydroxycamphor. Nh�ng k�t qu� này g�i ý v� s� tham gia tr�c ti�p c�a liên k�t hydro vào s�duy trì tính ch�n l�c. Sau �ó h�
c�ng ki�m tra tính ��c hi�u vùng c�a Val 295. Nh�ng g�c này ti�p xúc v�i các nhóm 10-carbon-8,9-dimethyl c�a camphor. Trong thí nghi�m này, ngư�i ta �ã s� d�ng norcamphor và 1-methylcamphor và camphor như là cơ ch�t. Camphor có 2 nhóm methyl � C7 và m�t nhóm methyl � v� trí C1. Norcamphor thi�u t�t c� các nhóm methyl và 1 methyl camphor thi�u m�t các nhóm 8-9 dimethyl.
Vi�c�ưa m�t nhóm methyl vào Val 295 (Val295 thành Ile) không gây �nh hư�ng gì ��n tính ��c hi�u vùng c�a s� thu� phân camphor, nhưng nh�ng bi�n ��i tính ��c hi�u vùng l�i ph� thu�c vào c�u trúc c�a cơch�t. Tóm l�i s�thu�phân c�a norcamphor x�y ra �v�trí C5 và C6 v�i�ương lư�ng g�n ngang nhau, trong khi �ó, v�i 1-methyl-norcamphor, s�n ph�m thu�phân chính l�i là d�n xu�t 5-hydroxyl. Bi�n ��i trong s� ��c hi�u vùng g�i ý r�ng nhóm methyl �ư�c thêm vào � v�trí 295 h� tr�cho s� ��nh hư�ng v� trí C5 vào s�t hem. M�t khác, ��t bi�n Val 247 thành Ala v�i s� làm m�t �i m�t nhóm methyl l�i t�o ra m�t s�n ph�m hơi khác v�i s�n ph�m thu �ư�c t� enzym t� nhiên, s�n ph�m m�i �ư�c quan sát th�y có t�ng tính ��c hi�u��i v�i v�trí C3 trong c�norcamphor và 1-methylnorcamphor. Tính ��c hi�u vùng c�a s� thu� phân nh�ng ch�t tương t�cơch�t này b� �nh hư�ng nhi�u hơn cơch�t camphor
t�nhiên, bi�u hi�n vai trò quan tr�ng c�a hi�u�ng k�nư�c c�a các g�c trong s� ��nh hư�ng c�a cơch�t.
@<t bi n thuAn ngh ch i vBi tính "c hi$u c ch t
M�c dù các microsomal Cyt-P450 có chi�u hư�ng có tính ��c hi�u cơ ch�t r�ng do yêu c�u �òi h�i b�i ch�c n�ng c�a chúng ��
chuy�n hoá nh�ng thu�c và các xenobiotic khác nhau, tính ��c hi�u c�a nh�ng enzym riêng bi�t v�n có gì �ó khác nhau. Furuya và cs.
có ý ��nh c�i t�o tính ��c hi�u cơ ch�t c�a microsomal Cyt-P450 thành ��c hi�u cơ ch�t c�a Cyt-P450c ho�c Cyt- P450 LM4, b�ng cách thay th� m�t s� axit amin trong helix I (helix xa). S� khác nhau trong trình t� axit amin so v�i Cyt-P450d là có 5 g�c� Cyt- P450c trong khi �Cyt-P450LM4 l�i có 4 g�c axit amin. Cyt-P450c th� hi�n ho�t tính hơi cao ��i v�i benzphetamine và ��i v�i ho�t tính thu� phân 7-ethoxy coumarin m�nh hơn là Cyt-P450d. M�t khác, ho�t tính c�a Cyt-P450LM4 ��i v�i B2 và 7-ethoxy coumarin là có th�so sánh b�ng ho�c kém hơn ho�t tính c�a Cyt-P450d, m�t cách tương �ng. Khi �o ho�t tính c�a c� 2 th� ��t bi�n ��i v�i B2 và 7-ethoxycoumarin, không th�y có t�ng gi�m�áng k�do��t bi�n gây ra. �i�u này g�i ý r�ng các g�c trong vùng helix xa không ph�i là duy nh�t ch�huy s� ��c hi�u cơch�t.
Lindenberg và Negishi �ã thu �ư�c s�bi�n��i trong ��c hi�u cơ ch�t khi gây ��t bi�n 1 g�c axit amin c�a Cyt- P450 15 và Cyt- P450coh. Cyt-P45015 xúc tác riêng cho s�thu�phân 15 c�a 4- 3 keton steroid như là testosterone còn Cyt-P450coh thu� phân 7- hydroxy c�a coumarin. M�c dù ho�t tính xúc tác khác nhau nhưng các enzyme này ch� khác nhau có 11 trong t�ng s� 494 g�c axit amin. Lindenberg và Negishi bi�n ��i m�t trong 11 g�c chìa khoá c�a Cyt-P450coh và Cyt-P45015� �� xác ��nh �âu là g�c ch�u trách nhi�m cho ��c hi�u cơch�t. S�thay ��i quan tr�ng nh�t trong ho�t tính �ã �ư�c th�y khi ��t bi�n v� trí 209, nơi mà Cyt-P450coh có g�c Phe còn Cyt-P45015� có g�c Leu. ��t bi�n Cyt-P450coh v�i Phe 209-Leu bi�u hi�n m�t s�t�ng �áng k�ho�t tính thu�phân 15 -testosterone và gi�m t�i 50% ho�t tính thu�phân coumarin, là ho�t tính nguyên thu�c�a nó.��t bi�n ngư�c l�i, trong �ó Leu209 trong Cyt-P45015� �ư�c thay th� b�ng Phe, enzyme không có kh�
n�ng thu�phân coumarin, có s�gi�m�áng k�trong ho�t tính thu�
phân steroid nguyên thu�.
Gây <t bi n trong liên k t oxygen
Thr 252 trong helix I c�a Cyt-P450cam �ư�c b�o toàn cao trong các Cyt-P450 ��ng v�t có vú (ví d�: Thr 319 �Cyt-P450d gan chu�t, Thr 301 trong c�Cyt-P450coh và Cyt-P450 16 �chu�t) và là m�t axit amin ch�u trách nhi�m cho s�t�o thành c�a túi liên k�t oxygen.
Imai và Nakamura công b� l�n ��u tiên v� vi�c gây ��t bi�n v� trí tr�c ti�p g�c axit amin chìa khoá (Thr 301) trong Cyt- P450 -1 và Cyt-P45016 gan th�. C�u trúc c�a c�2 enzym chia s�81% c�a toàn b�các g�c và �ư�c xác ��nh trong vùng c�a g�c 252 và 319. M�c dù trình t�tương��ng cao, tính ��c hi�u cơch�t c�a các Cytochrom b�
h�n ch�; Cyt-P450 -1 bi�u hi�n m�t ho�t tính thu�phân -1 cao ��i v�i laurate và caprate, trong khi Cyt-P45016 xúc tác s�thu�phân 16 c�a testosterone và progesterone. Các tác gi� trên �ã phân tích t�m quan tr�ng c�a Thr 301 ��i v�i s�thu�phân cơch�t, vì ��t bi�n Thr 301 His c�a c�2 enzym gây ra m�t s�m�t hoàn toàn ho�t tính.
�ây là phát hi�n có tính th�c nghi�m��u tiên th�hi�n r�ng Thr �ư�c b�o toàn có t�m quan tr�ng ch�c n�ng trong s� thu� phân do Cyt- P450 xúc tác. Ho�t tính b� m�t c�a c� 2 enzym �ã�ư�c l�y l�i m�t ph�n ho�c t�ng cao hơn ho�t tính ban ��u c�a enzym t� nhiên khi thay th�b�ng Ser ho�c Asp. Nh�ng��t bi�n Val bi�u hi�n m�t ho�t tính th�p. Nh�ng k�t qu� này xác ��nh r�ng ho�c nhóm OH ho�c nhóm NH2 �v�trí �ó là quan tr�ng��i v�i ho�t tính thu�phân c�a Cyt-P450. S� thay th� Thr 252 b�i g�c axit amin khác gây ra 1 s�
thay ��i tuy�t v�i trong m�c��phân nhánh c�a ho�t tính oxygenase và oxydase Cyt- P450cam. Nh�ng��t bi�n Thr thành Ala, Val, Cys và Gly bi�u hi�n s�thay ��i không th� phát hi�n �ư�c trong quang ph� c�a các d�ng ferric, ferrous, ferrous-CO và d�ng oxy hoá và s�
tiêu th�oxygen �m�t t�c�� có th�so sánh v�i t�c�� c�a enzym t�
nhiên. Tuy nhiên, s�t�o ra s�n ph�m trên s� tiêu th� oxygen gi�m m�t cách �áng k�trong các enzyme ��t bi�n trong khi s�n ph�m t�o ra là 100% trong enzym t�nhiên (b�ng 2.1). Trong nh�ng��t bi�n này, v�i s� lo�i tr� ��t bi�n Val 252, quá 85% oxygen b� tiêu th�
�ư�c tìm th�y là �ư�c ph�c h�i khi H2O2t�o�ư�c do s� không c�p
�ôi do h�p nh�t vào cơ ch�t, ch� ra r�ng Cyt-P450cam �ã chuy�n thành m�t oxydase do ��t bi�n.
Như v�y, s� chuy�n c�a Cyt-P450cam t� monooxygenase sang oxydase ��t �ư�c b�ng cách thay th� m�t axit amin riêng l� không có nhóm OH. V�i nh�ng ��t bi�n này, t�c��t�oxy hoá c�a nh�ng d�ng b�oxy hoá t�ng lên hơn 10 l�n, nhưng t�c��t�ng không �ư�c tính cho s� t�o thành H2O2 b�ng cách gây ��t bi�n. Cu�i cùng, H2O2�ư�c tìm th�y là �ư�c t�o thành sau s� kh� 1e c�a d�ng b�
oxy hoá b�i putidaredoxin d�ng kh�. M�t khác, khi Thr 252 �ã��t bi�n thành Ser, h�u h�t ho�t tính monooxygenase �ư�c h�i ph�c v�i m�t s� thu� phân ch�n l�c vùng m�t cách nghiêm ng�t ��i v�i camphor. S�h�i ph�c có th� th�y�ư�c c�a monooxygenase và s�
ch�n l�a vùng b� h�n ch� c�ng �ã �ư�c quan sát ��i v�i ��t bi�n Thr 252. Nh�ng k�t qu� này xác ��nh r�ng nhóm -OH ho�c - NH2
c�a chu�i bên axit amin là c�n thi�t cho ph�n�ng monooxygenase.
M�c dù ngư�i ta bi�t r�ng nhóm -OH c�a c�a Thr 252 liên k�t hydro v�i khung cacbonyl c�a Gly 248, kh� n�ng là chu�i bên tương tác v�i phân t�O2�ã b�g�n v�i s�t hem không th� �ư�c lo�i tr�. Thay vào �ó, s� tương tác là tương t�, vì d�ng oxy hoá c�a Thr-Ser ho�c Asp ��t bi�n là b�n v�ng và l�n hơn các ��t bi�n khác như Ala, Gly và Val ��t bi�n. Túi liên k�t oxygen �ư�c ti�p t�c làm b�n hơn b�i 2 sets c�a các c�p ion, gi�a Lys178 và Asp251, gi�a Asp186 và Asp251. Ngay trư�c Thr 252 trong Cyt- P450cam và Thr tương ��ng trong các eukaryotic Cyt-P450, ho�c là g�c Asp ho�c Glu v�i m�t ít ngo�i l�. Hơn n�a, g�c tương �ng cho Arg186 trong P450cam là Arg ho�c Lys trong nhi�u các Cyt- P450 eukaryotic, g�i ý m�t s�chuy�n hoá có th�c�a c�p ion Arg- Asp. Khi c�p ion gi�a Lys178 và Asp 251 b�phá v�b�i s�thay th�
Lys178 thành Ala, t� l� tiêu th� oxygen có th� so sánh �ư�c v�i enzym t�nhiên. Nh�ng k�t qu�tương t�c�ng thu �ư�c��i v�i ��t bi�n thay th� Arg186-Ala. M�t khác, ��t bi�n Asp251-Ala cho k�t qu�có s�thay ��i�áng k�trong t�c��tiêu th�oxy.
T�c��r�t cao và giá tr�ch�nh�hơn 2% so v�i enzym t�nhiên.
M�c dù k�t qu� này không �ưa ��n k�t lu�n gì cho vai trò c�a nh�ng c�p ion, nhưng nó g�i ý r�ng s�t�o thành ít nh�t m�t c�p ion là ��cho s�làm b�n v�ng c�a túi oxygen.
B8ng 2.1. T,c"- tiêu th/oxygen và oxy hoá NADH, s,l78ng s*n ph9m
"78c t$o thành b;i Cytochrome P450cam1
T c <
(Fmol/phút/Fmol P450)
S8n phJm tKo thành trên s=tiêu thMoxygen (%)
Oxygen NADH 5OHcam(2) H2O2
252Thr(1) 1350 1380 97 3
252 Ala 1150 1180 5 89 252 Gly 1090 1090 3 88
252 Ser 830 830 85 15
252 Cys 690 700 7 86
252Asn (3) 420 440 57 12
252 Pro 100 100 10 77
(1) Ho?t @xúc tác cBa Cyt-P450 cam tGnhiên và @t bi/n c xác (nh trong h thHng tái lIp bao gJm putidaredoxin reductase, putidaredoxin và Cyt- P450 cam (Imai và cs. 1989)
(2) 5-exo-hydroxycamphor
(3) Ho?t @xúc tác c xác (nh vMi sGcó mOt cBa glycerol
C u trúc c'a Cyt-P450 g0n màng
M�c này s� t�ng quan l�i m�t cách ng�n g�n nét ��c bi�t c�u trúc c�a Cyt-P450 g�n màng. Không gi�ng Cyt-P450cam hoà tan, Cyt-P450 g�n màng có m�t m�nh g�n vào màng như m�t cái m�
neo. Nh�ng hi�u bi�t m�i�ây v�c�u trúc protein cho th�y r�ng m�t
�o�n g�n trong màng lipid 2 l�p ph�i �ư�c gi�d�là có c�u trúc �- helix hơn là m�t c�u trúc t�m �, và c�u trúc như là t�m � trong màng ch�chi�m s�ít trư�ng h�p.
Nelson và Strobel �ã tính sơb�34 trình t�c�a microsomal Cyt- P450 �� xác ��nh nh�ng �o�n xuyên qua màng và phát hi�n 11 vùng v�i th�n�ng qua màng. Trong s� 11 vùng này, ch�có 2 vùng g�n v�i��u N- là có th� tham gia vào liên k�t qua màng. Vùng ��u tiên là vùng k�nư�c trong trình t�Cyt-P450 và c�u trúc b�c 2 c�a nó �ư�c xác ��nh trư�c s�là �-helix. Vùng th� 2�ư�c d� �oán là có c�u trúc t�m�hơn là c�u trúc �-helix, nhưng s�d� �oán này có th� không �úng vì có quá nhi�u g�c prolin. Các công trình khác c�ng �ã th�y vùng này là vùng polyprolin c�u trúc helix. M�c dù
chưa nh�t trí v�c�u trúc b�c 2 c�a phân �o�n th�2 nhưng không có nghi ng�gì n�a v�phân �o�n th� nh�t gi�ng nhưm�t cái m� neo g�n vào màng. Cyt-P450cam hoà tan không có nh�ng vùng k�nư�c nhưv�y g�n v�i ��u N- t�n. C�u trúc b�c 2 c�a Cyt-P450 theo d�
�oán c�a Nelson và Strobel th�hi�n là r�t gi�ng v�i Cyt-P450cam.
Trong s�13 helix c�a Cyt-P450cam, 10 helix là �ư�c d� �oán � các enzym microsomal �ư�c th�y � v� trí tương �ng c�a Cyt- P450cam, 9 helix �v�trí tương�ng v�i helix B, C, D, E, G, I, J, K và L trong Cyt-P450cam và helix còn l�i là m�t c�nh c�a helix H.
� Cyt-P450cam c�a vi khu�n, hem n�m xen k� gi�a helix I và L.
Như �hình 2.2,m�t s�g�c axit amin �ư�c b�o t�n cao � �o�n gi�a c�a helix I. Helix L c�ng �ư�c b�o t�n d�a trên s�tương t�v�trình t� và s� d� �oán trư�c c�u trúc b�c 2. Nh�ng ��c �i�m �ư�c b�o t�n này g�i ý nhi�u t�i c�u trúc xen k�helix-hem-helix là ph�bi�n
��i v�i t�t c�các lo�i Cyt-P450.
Hình 2.2. Trình tIaxit amin c a các Cyt-P450 ;vùng helix xa (Helix I).
C�ng � Cyt-P450 ��ng v�t có vú, có th� nói cơ ch�t s�n sàng cho liên k�t ngay phía trên c�a m�t ph�ng hem và tương tác v�i oxygen liên k�t d�a trên các k�t qu� nghiên c�u in vivo s�bi�n��i hem và nh�ng nghiên c�u c�ng hư�ng t�Raman. Hơn n�a, 5 trong
s� 6 �o�n � và m�t búi � t�o thành m�t vòng xo�n liên k�t Cys.
trong Cyt-P450cam là d� �oán �úng ��n. Nhưv�y, nh�ng��c�i�m
�ư�c b�o t�n trong c�u trúc b�c 1 và 2 ng�ý m�t s�tương t�trong c�u trúc b�c 4 gi�a các protein Cyt-P450 eukaryotic và prokaryotic có s�s�p x�p trình t� ti�p theo c�ng cho th�y trư�c các axit amin có th� tham gia vào s� tương tác gi�a Cyt-P450 và protein v�n chuy�n �i�n t�. S� nh�t trí v� m�t �o�n xuyên qua màng như trên g�i ý r�ng nh�ng helix s� xen k� v�i hem là nh�ng phân �o�n không xuyên màng. B�i v�y, hem không b� vùi l�p trong màng mà n�m trên phía bào tương c�a màng. Cyt-P450s microsomal s�d�ng flavo protein NADPH-Cytochrome c reductase (CPR) như là 1 protein cho �i�n t�, trong khi nh�ng Cyt-P450 ti th�và vi khu�n l�i
�òi h�i protein sulfur s�t. M�c dù tương tác protein-protein khác nhau gi�a các enzyme microsomal �ti th�và vi khu�n�ã�ư�c phát hi�n, CPR có m�t trình t� tương t� v�i trình t� c�a flavodoxin.
Flavoprotein flavodoxin có th� thay th� nh�ng protein sulfur s�t trong m�t s� ph�n �ng chuy�n �i�n t�. �i�u này g�i ý r�ng s�
tương tác gi�a 2 lo�i protein cho �i�n t�và nh�ng Cyt-P450 tương
�ng là không quá khác bi�t. Nghiên c�u nh�ng axit amin �ư�c b�o t�n trong trình t�c�a Cyt-P450 là quan tr�ng, vì nói chung ngư�i ta ch�p nh�n r�ng hemoprotein và protein cho �i�n t� tương tác l�n nhau qua c�p�ôi tích �i�n
Nelson và Strobel cho r�ng hơn m�t n�a nh�ng axit amin tích
�i�n trong Cyt-P450 microsomal �ư�c tìm th�y�trong vùng tương
�ng v�i các helix D, J và K, trình t�s�p x�p trong nh�ng vùng này
�ư�c minh h�a trong hình 2.3.
Vùng 143-160 (�ánh s� c�a Cyt-P450b), tương�ng v�i helix D trong Cyt-P450cam, là �ư�c b�o toàn cao và ch�a m�t s�axit amin tích �i�n. Vùng th� 2 giàu axit amin tích �i�n là vùng 326-343 và
�ư�c tham gia vào helix J và K trong Cyt-P450cam. Vùng th� 3, 374-384 bao g�m các t�m�3 và �4. Asp374 và Lys384, 2 g�c tích
�i�n�ư�c b�o toàn cao trong vùng này n�m �v� trí tương�ng v�i các vùng xo�n (loop) n�i v�i�3 và�4 trong Cyt-P450cam. Nghiên c�u bi�n��i hoá h�c�ã ch�ra r�ng Lys384 tham gia vào tương tác gi�a Cyt-P450 c�a th�và reductase. M�c dù t�t c�nh�ng axit amin tích �i�n này �ư�c��nh v�trên b�m�t phân t�trong mô hình phân t� c�a Cyt-P450, tương tác gi�a Cyt-P450 và protein cho �i�n t�
c�a nó có l� là ph� thu�c vào nhi�u các c�p tích �i�n trên b� m�t phân t�gi�a các protein.
Hình 2.3. So sánh trình tIch+a các g,c axit amin tích "iNn trong các lo$i Cyt- P450 khác nhau. NhOng axit amin tích "iNn"78c g$ch d7Qi.
Chú thích: Rat: Chu@t cHng; Rabbit: Th ;