CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
3.3. KẾT QUẢ NỘI DUNG 3
Các trứng còn sống theo hình thái sau khi giải đông được tiến hành ICSI. Ở lô thí nghiệm được tiếnh hành 20 đợt và 15 đợt cho lô đối chứng. Kết quả thể hiện ở Bảng 3.6.
Bảng 3.6. Kết quả ICSI từ trứng đông lạnh
Lô thí nghiệm Lô đối chứng
Số đợt thí nghiệm 20 15
Số trứng vi tiêm 595 375
Số trứng vi tiêm thành công 240 (40,19 ± 2,15%)
288 (76,8 ± 5,89%) Số trứng không thoái hóa sau vi
tiêm 6h
87 (14,60 ± 1,61%)
174 (46,4 ± 4,22%) Số trứng thụ tinh (phôi 2) 23
(8,95 ± 7,49%)
89
(30,82 ± 4,27%)
Số phôi 4-8 15 58
(20,07 ± 3,07%)
Số phôi dâu 6 23
(7,95 ± 2,49%)
Số phôi nang 2 16
(5,44 ± 3,04%) α < 0,05
a bc d
40,19
8,95 76,8
30,82
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Tỷ lệ vi tiêm thành công Tỷ lệ thụ tinh
Các tỷ lệ
Tỷ lệ %
TN ĐC
Hình 3.7. Biểu đồ kết quả ICSI từ trứng đông lạnh
Đã tiến hành ICSI cho 595 trứng thí nghiệm và 375 trứng làm đối chứng. Trong đó số trứng vi tiêm thành công ở cả lô thí nghiệm và lô đối chứng có sự khác biệt đáng kể, 40, 19% (240 trứng) so với 76,8% (288 trứng). Tỷ lệ trứng không bị thoái hóa sau vi tiêm 6 giờ giữa lô trứng thí nghiệm và lô đối chứng có sự khác biệt đáng kể (P<0,05), 14,60% (87 trứng) so với 46,4% (89 trứng). Sự khác nhau này là do trứng trong quá trình đông lạnh gặp nhiều tổn thương về nhiễm sắc thể, thoi vô sắc, bộ khung xương tế bào đã làm khả năng sống của trứng nhất là khi ICSI. Bên cạnh đó, việc màng thụ tinh bị xơ cứng sau đông lạnh và giải đông làm cho việc đâm lủng màng không thuận lợi. Ngoài ra, tính đàn hồi của màng thụ tinh cũng bị giảm so trứng tươi dẫn đến một lượng môi trường trong khi vi tiêm đi vào tế bào chất gây những tác động không tốt cho trứng, làm trứng sau vi tiêm dễ bị thoái hóa.
Kết quả ICSI ở trứng tươi và trứng đông lạnh đều rất thấp. Tỷ lệ thụ tinh ở lô thí nghiệm chỉ đạt 8,95% (23/240 trứng) so với 30,82% (89/288 trứng) ở lô đối chứng. So với tác giả Rho và cs. (2004) là thua kém rất nhiều với tỷ lệ thụ tinh ở trứng tươi và trứng đông lạnh lần lượt là 70,0% và 52,2%,
và tỷ lệ tạo thành phôi nang ở trứng bò đông lạnh là 9,8% so với 16,3% ở trứng tươi; Abdalla (2010) với tỷ lệ phân chia ngày thứ 2 là 68% và 8% phát triển đến giai đoạn phôi nang. Trong thí nghiệm này đã có 2 phôi phát triển đến giai đoạn phôi nang so với 16 phôi (5,44%) ở lô đối chứng. Kết quả của ICSI trên trứng đông lạnh và trứng tươi thấp có thể là do các nguyên nhân sau:
(1) Kim sử dụng trong thí nghiệm này là kim tái sử dụng ở bệnh viện Từ Dũ. Đây là nguồn vi dụng cụ được chuẩn bị cho ICSI trên người nên gây nhiều khó khăn cho thao tác hút tinh trùng.
(2) Hệ thống vi thao tác gặp sự cố cũng là một trong những nguyên nhân gây khó khăn trong việc hút tinh trùng vào injection pipette. Chính điều này dẫn đến trứng phải chờ thời gian dài trong điều kiện ngoài tủ nuôi trước khi được tiêm vào. Ngoài ra do khó điều khiển việc đẩy tinh trùng vào trứng, nên một trứng thường bị tiêm đi tiêm lại nhiều lần, mỗi lần như thế trứng đều bị tổn thương cơ học và một lượng môi trường đi vào, điều này đã ảnh hưởng đến khả năng phát triển của trứng sau khi vi tiêm.
(3) ICSI là một kỹ thuật khó, các phòng thí nghiệm ở nước ngoài đều có hệ thống piezo nên việc tiêm tinh trùng vào bào tương trứng rất dễ dàng. Trong khi toàn bộ thí nghiệm đều thực hiện vi tiêm bằng cơ học nên rất khó thực hiện, đặc biệt là trứng đã qua bảo quản lạnh thì màng thụ tinh bị xơ cứng nên càng khó hơn.
Dù chưa cao như các công bố của các tác giả ở nước ngoài, nhưng kết quả đạt được đã khẳng định được bước đầu thành công ở kỹ thuật này. Và đây có thể nói là kết quả đầu tiên về việc tạo phôi bò từ trứng đông lạnh bằng kỹ thuật ICSI. Vì cho đến thời điểm này chưa có công trình nào trong nước công bố về vấn đề này.
Hình 3.8. Trứng trước khi vi tiêm
Hình 3.9. Tiêm tinh trùng vào bào tương trứng (ICSI)
Hình 3.10. Trứng sau khi vi tiêm thành công
KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ
KẾT LUẬN
Từ mục tiêu đề ra, đề tài đã đạt được một số kết quả sau:
(1). Đã đông lạnh được 3991 trứng bò trưởng thành, trong đó:
• 3154 trứng dùng cho thí nghiệm IVF với tỷ lệ sống so với số trứng đem đông lạnh là 69,05 ± 4,47% và so với số trứng thu hồi được sau giải đông là 80,07 ± 2,72%.
• 837 trứng được dùng cho thí nghiệm ICSI với tỷ lệ sống so với số trứng đem đông lạnh là 71,14 ± 2,88% và so với số trứng thu hồi được sau giải đông là 79,89 ± 5,28%.
(2). Đã thực hiện thụ tinh trong ống nghiệm thành công:
• Ở trứng đông lạnh: thực hiện trên 1970 với tỷ lệ thụ tinh đạt 15,21 ± 3,48% và đã có 4,14 ± 1,86% (82 phôi) phát triển đến giai đoạn phôi nang.
• Ở trứng tươi: thực hiện trên 400 trứng với tỷ lệ thụ tinh đạt 58,5 ± 4,89% và đã có 23,25 ± 2,94% (93 phôi) phát triển đến giai đoạn phôi nang.
(3). Đã thực hiện thành công kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương trứng cho trứng đông lạnh:
• Ở trứng đông lạnh: có 240/595 trứng vi tiêm thành công, 23 trứng đã thụ tinh (8,95 ± 7,49%) và đã có được 6 phôi phát triển đến giai đọan phôi dâu, 2 phôi phát triển đến giai đoạn phôi nang.
• Ở trứng tươi: có 288/375 trứng vi tiêm thành công, 89 trứng đã thụ tinh (30,82 ± 4,27%) và đã có được 23 phôi phát triển đến giai đọan phôi dâu, 16 phôi phát triển đến giai đoạn phôi nang.
(4). Đã thiết lập được quy trình thụ tinh trong ống nghiệm từ nguồn trứng đông lạnh với tỷ lệ thụ tinh 15,21%. (Phụ lục 3)
KIẾN NGHỊ
(1). Tiến hành bảo quản trứng bò trưởng thành trên các dụng cụ khác (cryotop, cryoloop…) và khảo sát các chất bảo quản để có kết quả trứng sống cao hơn.
(2). Khảo sát sự tổn thương của trứng sau khi bảo quản ở mức sâu hơn (tổn thương nhân, màng thụ tinh…).
(3). Thực hiện tạo phôi từ trứng đông lạnh ở các môi trường khác nhau để tìm môi trường thích hợp nhất.