Chiều dài hạt gạo được xác định bằng cách dùng thước kẻ li đo nhiều lần (3 lần), mỗi lần đo là 10 hạt gạo (tất cả là 30 hạt cho mỗi giống/dòng), các hạt được xếp khít lại với nhau khi đo và sau đó, lấy trung bình. Phân loại chiều dài và hình dạng hạt gạo được dựa vào tiêu chuẩn đánh giá phẩm chất hạt gạo của IRRI (1998), được trình bày ở Bảng phía dưới:
Bảng 2.1: Tiêu chuẩn đánh giá chiều dài và hình dạng hạt gạo (IRRI, 1988) Cấp Chiều dài hạt gạo (mm) Hình dạng hạt (mm)
1 Rất dài > 7,5 Thon dài D/R: > 3,0
3 Dài 6,61 – 7,5 Trung bình D/R: 2,1 – 3,0
5 Trung bình 5,51 – 6,6 Bầu D/R: 1,1 – 2,0
7 Ngắn ≤ 5,5 Tròn D/R: ≤ 1,0
Ghi chú: D/R tỷ lệ giữa chiều dài và chiều rộng hạt
2.3.2.2 Độ bền thể gel theo phương pháp của Tang et al. (1991) Bước 1: Chuẩn bị mẫu
+ Tách vỏ trấu và đo ẩm độ hạt gạo.
+ Nghiền mịn và cân mẫu (100 mg với ẩm độ 12%).
Bước 2: Hoàn tan mẫu
+ Thêm 0,2 ml ethanol 95% có chứa 0,025% thymol blue.
+ Thêm 2 ml KOH 0,2 N. Sau đó khuấy đều bằng máy Vortex.
+ Đậy nắp kỹ và đun trong nồi cách thủy (nhiệt độ là 1000C) khoảng 5 phút.
+ Lấy ra, để yên trong 5 phút và sau đó làm lạnh trong nồi nước đá 10 phút.
Bước 3: Đọc và ghi kết quả
+ Để ống nghiệm nằm ngang trên bề mặt bằng phẳng, để gel chảy từ từ, sau một giờ tiến hành đo chiều dài thể gel (từ đáy đến mí trên của thể gel).
+ Đánh giá độ bền thể gel theo thang điểm của IRRI (1996)
16
Bảng 2.2 Phân cấp độ bền thể gel theo thang đánh giá của IRRI (1996) Cấp Chiều dài (mm) Xếp loại độ bền thể gel
1 80 – 100 Rất mềm
3 61 – 80 Mềm
5 41 – 60 Trung bình
7 35 – 40 Cứng
9 < 35 Rất cứng
2.3.2.3 Độ trở hồ theo phương pháp của IRRI (1996)
o Chuẩn bị 2 mẫu cho mỗi giống, mỗi mẫu lấy 6 hạt gạo đã chà trắng không bị nứt bể, cho vào hộp petri.
o Cho 10 ml dung dịch KOH 1,7% vào.
o Sắp xếp các hạt đều ra trong hộp.
o Đậy lại, để yên trong nhiệt độ phòng trong 23 giờ.
Bảng 2.3 Thang đánh giá độ trở hồ của hạt gạo theo IRRI (1996)
STT Mức độ Đặc điểm Điểm đánh giá
1 Cao Hạt gạo còn nguyên 1
2 Cao Hạt gạo phồng lên 2
3 Cao Phồng lên, viền còn nguyên, nở ít 3 4 Trung bình Phồng lên, viền còn nguyên, nở rộng 4 5 Trung bình Hạt rã ra, viền hoàn toàn nở rộng 5 6 Thấp Hạt tan ra hoàn toàn với viền 6 7 Thấp Hạt tan ra hoàn toàn và trong 7 2.3.2.4 Hàm lượng Amylose theo Cagampang and Rodriguez (1980) Bước 1: Chuẩn bị hóa chất phân tích
+ Dung dịch NaOH 1N + Dung dịch Ethanol 95%
+ Dung dịch HCl 30%
+ Dung dịch Iod (0,2% I2 và 2% KI)
17
Bước 2: Chuẩn bị mẫu phân tích
+ Tiến hành cắt bỏ phôi của hạt gạo, đo độ ẩm của hạt + Cà mịn mẫu
+ Cân 50mg bột gạo cà mịn cho vào ống nhựa 50ml + Thêm 0,5ml Ethanol 95%, lắc nhẹ để cho mẫu tan đều + Tiếp tục cho 9,5ml NaOH 1N vào
+ Để qua đêm ở nhiệt độ phòng Bước 3: Pha loãng và đo mẫu
+ Sau khi để mẫu qua đêm ở nhiệt độ phòng sẽ tiến hành vortex mẫu. Rút 100àl dung dịch mẫu cho vào bỡnh định mức 25 ml, đối với mẫu thử (blank) thay dung dịch mẫu bằng 100 àl NaOH 1N. Thờm nước cất vào khoảng ẵ bỡnh, lắc đều.
+ Thờm 250 àl HCl 30%, lắc đều. Sau đú, thờm tiếp 250 àl dung dịch Iod và lắc đều. Thêm nước cất đến vạch định mức và chuyển sang ống nhựa 50 ml, lắc đều. Để yên trong 30 phút.
+ Lắc đều mẫu trước khi đưa mẫu vào cuvette để xác định hàm lượng amylose. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 580 nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả Đường chuẩn có dạng: Y = aX + b Trong đó: Y: độ hấp thụ OD
X: lượng amylose có trong 1 ml mẫu, đọc từ máy (mg/ml) Tính hàm lượng amylose theo công thức:
% Amylose = 100 2 X
Đánh giá hàm lượng Amylose theo thang đánh giá của IRRI (1998) Bảng 2.4 : Thang đánh giá hàm lƣợng amylose (IRRI, 1998)
Hàm lƣợng Amylose (%) Đánh giá Phân loại gạo
0 – 2 Nếp Nếp
3 – 9 Rất thấp Gạo dẻo
10 – 19 Thấp Gạo dẻo
20 – 25 Trung bình Mềm cơm
> 25 Cao Cứng cơm
18
2.3.2.5 Hàm lượng Protein theo phương pháp Lowry O.H. (1951) Bước 1: Chuẩn bị dung dịch ly trích
+ Dung dịch NaOH 0,1N.
+ Dung dịch A (Na2CO3 2% + Na–K–tatrate 0,05% + NaOH 0,1N).
+ Dung dịch B (CuSO4 0,1%).
+ Dung dịch C (A:B = 45:5).
+ Dung dich Folin 1N.
Bước 2: Chuẩn bị mẫu phân tích
+ Cắt bỏ phôi của hạt gạo, cà mịn mẫu.
+ Cân 10mg bột gạo cho vào ống tuyp 1,5 ml, thêm 1 ml NaOH 0,1N. Sau đó, lắc ít nhất 2 giờ hoặc để qua đêm.
Bước 3: Pha loãng mẫu và đo
+ Vortex mẫu sau đó ly tâm mẫu 14000 vòng/phút trong 3 phút. Sau khi ly tõm mẫu, hỳt 100àl mẫu cho vào ống 10 ml, đối với mẫu blank thay dung dịch ly trớch bằng 100 àl NaOH 0,1N.
+ Thờm vào mỗi ống 1ml nước cất, lắc đều. Sau đú, cho thờm 500 àl dung dịch C (với các dung dịch A:B theo tỷ lệ tương ứng 45:5), trộn đều và để yên trong 10 phỳt.. Sau đú lại cho thờm 50àl Folin 1N trộn đều và để yờn trong 30 phỳt.
+ Lắc đều mẫu, sau đó cho vào Cuvette và đo ở bước sóng 580 nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả Đường chuẩn có dạng: Y = aX + b Trong đó: X: độ hấp thụ OD
Y: lượng protein có trong mẫu đem đo Hàm lượng protein được tính theo công thức
% Protei n = 100 m X
Trong đó: m: lượng thực của mẫu
m =
14 100
% 100 10
H
H: độ ẩm của mẫu
19
2.3.2.6 Trắc nghiệm tính thơm bằng KOH 1,7 % (IRRI, 1996) Bước 1: Chuẩn bị mẫu
Lấy 30 hạt gạo cho vào ống nghiệm 15 ml.
Bơm vào mỗi ống nghiệm 5 ml dung di ̣ch KOH 1,7 %, đậy kín ống nghiệm bằng giấy ba ̣c.
Bước 2: Sấy và ngửi mùi
Mang ống nghiê ̣m sấy ở 50oC trong 30 phút.
Sau đó đem ra ngửi mùi.
So sánh kết quả và cho kết luận sau cùng.
Bảng 2.5 Phân cấp mùi thơm theo thang đánh giá của IRRI (1996)
Phân cấp Đánh giá
0 Không thơm
1 Thơm nhẹ
2 Thơm