Các thử nghiệm về hoạt tính androgen phụ thuộc vào sự nhạy cảm với androgen của các cơ quan sinh dục ở các loài gặm nhấm đực (tuyến tiền liệt và các túi tinh) và các cấu trúc giới tính phụ của chim và động vật có vú (mào gà trống thiến hoặc gà con, các tuyến bã thay đổi và tuyến lệ lồi mắt của chuột cống trắng) [27].
1.4.1. Phương pháp mào gà con
Dùng gà trống vào 2 - 3 ngày sau khi nở. Thuốc thử nghiệm có thể được cho uống, tiêm dưới da, tiêm trong mào, hoặc áp dụng tại chỗ. Liệu pháp tiếp tục hàng ngày trong 5 hoặc 7 ngày. Đợi 1 ngày sau liều cuối cùng, gây mê gà con bằng ketamine 10%, cắt lấy mào gà bằng kéo đặt sát sọ. Vẽ đồ thị khối lƣợng mào gà với khối lƣợng cơ thể đối với logarit liều. Thử nghiệm này có độ nhạy lớn nhất khi androgen đƣợc áp dụng tại chỗ, hòa tan trong ethanol tuyệt đối hoặc ethyl ether. Bằng một bơm tiêm vi lƣợng, tiêm 0,05 mL dung dịch vào mào gà. TES có hiệu quả trong phạm vi liều 0,1 - 1,0 mcg/ngày. Dùng 10 gà con cho mỗi mức liều trong thử nghiệm này. Việc tăng thể tích dung dịch áp dụng đặc biệt với các thuốc tan trong dầu, dẫn đến giảm độ nhạy và một chỉ số chính xác thấp hơn (Lerner và Bianchi, 1963) [27].
21 1.4.2. Mào gà trống thiến
Gà trống non được thiến ở 6 - 9 tuần tuổi. Sự tăng kích thước mào gà trống thiến chứng tỏ sự thiến không hoàn toàn, và những gà nhƣ vậy bị loại bỏ. Sáu tháng sau, chúng có thể đƣợc dùng để thử nghiệm sinh học thuốc về hoạt tính androgen dùng tại chỗ, cho uống, hoặc tiêm. Cho thuốc hàng ngày trong 5 ngày và đợi đến thời điểm 1 ngày sau lần cho thuốc cuối cùng, đo chiều dài và chiều cao của mào và so sánh với các trị số thu được ngay trước khi bắt đầu điều trị. Sự tăng trị số của tổng các số đo chiều dài và chiều cao bằng milimet tỷ lệ thuận với logarit liều.
Việc sử dụng thử nghiệm mào gà con tốt hơn thử nghiệm mào gà trống thiến vì không cần phải thiến, không cần phải nuôi gà trong thời gian dài, và độ chính xác trong việc cân lớn hơn độ chính xác trong việc đo bằng compa hoặc một cái thước kẻ [27].
1.4.3. Các cơ quan sinh dục phụ của loài gặm nhấm
Các túi tinh và tuyến tiền liệt bụng của chuột nhắt trắng và chuột cống trắng thiến tăng khối lƣợng bởi các chất có tác dụng androgen. Thử nghiệm chuột nhắt trắng nhạy hơn thử nghiệm chuột cống trắng. Tuy vậy, việc phẫu tích và cân mô đích ở chuột nhắt khó hơn so với ở chuột cống trắng.
Trong y văn, có nhiều thay đổi về tuổi ở thời gian thiến, khoảng thời gian giữa lúc thiến và điều trị, và thời gian kéo dài điều trị. Phương pháp thuận tiện và tiết kiệm nhất là dùng các chuột cống trắng đực chưa trưởng thành, 21 - 23 ngày tuổi. Với việc gây mê bằng ketamine 10%, cắt bỏ tinh hoàn qua một nhát rạch ở đường giữa trong túi bìu sau khi lau với ethanol 70%. Thắt mỗi động mạch tinh hoàn bằng chỉ lin trong khi một người phụ tá nâng tinh hoàn lên, kẹp chặt đầu ngoại biên của tinh hoàn bằng kẹp. Sau khi lấy đi cả hai tinh hoàn, khâu vết rạch với chỉ bông, và lau vùng phẫu thuật với cồn.
Tiêm dưới da thuốc thử nghiệm, các liều chuẩn TES, và dung môi đối chứng trong ngày thiến. Tiêm lặp lại (0,2 mL) hàng ngày trong 7 ngày. Hai mươi bốn giờ sau liều cuối cùng, gây mê chuột bằng ketamine 10%, và phẫu tích lấy tuyến tiền liệt bụng và túi tinh. Ép nhẹ dịch chứa bên trong ra và xác
22
định khối lƣợng ƣớt với sai số 0,1 mg. Cũng cô lập cơ nâng hậu môn. Tuy vậy, cơ này có độ nhạy cảm kém hơn với androgen so với các mô khác, và sự tăng khối lƣợng của cơ nâng hậu môn có liên quan nhiều hơn với hoạt tính đồng hóa so với hoạt tính androgen.
Với các thử nghiệm ban đầu, có thể dùng nhóm 6 chuột cống trắng cho mỗi mức liều. Tuy vậy, để các thử nghiệm về hiệu lực chính xác hơn, cần dùng 8 - 10 chuột cho mỗi mức liều. TES gây sự tăng tuyến tính về khối lƣợng các túi tinh và tuyến tiền liệt bụng trong phạm vi từ 10 đến 100 mcg cho mỗi chuột mỗi ngày. Sự tăng khối lƣợng các túi tinh là một chỉ số về hoạt tính androgen kém nhạy hơn so với sự tăng khối lƣợng tuyến tiền liệt bụng.
Ghi các số đo khối lƣợng cơ thể ngày đầu điều trị và ngày giết chuột.
Các thay đổi về khối lƣợng cơ thể không cho thấy hoạt tính androgen (hoặc đồng hóa) nhƣng có thể gợi ý về tác dụng độc của thuốc hoặc nhiễm khuẩn.
Loại bỏ các dữ liệu từ các cá thể động vật không tăng cân so với nhóm đối chứng [27].
23