Bộ tiêu bản hiển vi cố định cần phải đạt những yêu cầu cao hơn so với các tiêu bản tạm thời mà giáo viên thực hiện trong các tiết dạy thực hành. Tiêu bản tạm thời muốn chuyển thành tiêu bản cố định cần đạt những tiêu chí cụ thể như: NST bắt màu đậm và có sự tương phản rõ nét về màu sắc so với tế bào chất; các tế bào dàn đều; các tế bào (7-10 tế bào) có bộ NST dàn đều (đối với tiêu bản quan sát bộ NST); có đầy đủ
các kì của nguyên phân hoặc giảm phân trên 1 tiêu bản (đối với tiêu bản nguyên phân hoặc giảm phân).
Để đảm bảo các yêu cầu trên, việc chuyển tiêu bản tạm thời thành tiêu bản cố định cần được thực hiện theo 1 quy trình riêng, với một vài khác biệt so với quy trình thực hiện tiêu bản tạm thời đã được hướng dẫn trong SGK. Chính vì thế, việc tiến hành thực hiện tiêu bản hiển vi cố định trong nghiên cứu này được dựa trên các quy trình làm tiêu bản tạm thời của Vũ Đức Lưu và Nguyễn Minh Công (2007) cho các đối tượng cụ thể như hành, hẹ, châu chấu, kết hợp với quy trình cố định tiêu bản do Võ Thị Thanh Phương (2012) đề xuất nhằm tìm ra các quy trình thực hiện tiêu bản tạm thời và cố định phù hợp cho mỗi đối tượng nghiên cứu đã đề cập trong mục vật liệu nghiên cứu nói trên.
Quy trình 4a: Thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát hình thái, số lượng NST trong nguyên phân ở tế bào hành tây, hành tím, tỏi
Trồng hành đến khi rễ dài khoảng 0,5 - 1,5cm (bước 4.1)
Cắt rễ và ngâm trong Carnoy khoảng 24 giờ (bước 4.2)
Bảo quản rễ trong cồn 70o ở 4oC (bước 4.3)
Thủy phân mẫu trong HCl 1N ở 60oC khoảng 10-30 phút (bước 4.4)
Rửa mẫu bằng nước cất (bước 4.5)
Nhuộm carmine 2% trong 30 phút (bước 4.6)
Cắt đầu rễ đã nhuộm (khoảng 1-2mm) và đặt lên lame (bước 4.7)
Nhỏ 1 giọt acid acetic 45% lên mẫu rễ trên lame và đậy lamelle (bước 4.8)
Quan sát trên KHV
Hình 1.7: Sơ đồ quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát hình thái, số lượng NST thực vật ở nguyên phân
(Nguồn: Vũ Đức Lưu, Nguyễn Minh Công, 2007)
Quy trình 5a: Thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát NST trong quá trình giảm phân ở hoa hẹ.
Dùng kim nhọn tách bao phấn ở nụ hoa đặt lên lame (bước 5.1)
Dầm nát bao phấn bằng kim phân tích (bước 5.2)
Nhuộm bằng carmine trong 15-20 phút (bước 5.3)
Đậy lamelle và quan sát trên KHV (bước 5.4)
Hình 1.8: Sơ đồ quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát NST trong giảm phân ở hoa hẹ
(Nguồn: Vũ Đức Lưu, Nguyễn Minh Công, 2007)
Quy trình 6a: Thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát hình thái, số lượng NST trong giảm phân ở châu chấu đực
Chọn châu chấu đực trưởng thành,
dùng kéo và kim nhọn tách lấy tinh hoàn châu chấu (bước 6.1)
Nhuộm tinh hoàn trong đĩa đồng hồ với orcein trong 10 – 15 phút (bước 6.2)
Tách lấy 3 ống sinh tinh đặt lên lame,
dùng kim nhọn xé rách bao ống để bung các tế bào ra (bước 6.3)
Ép lamelle và quan sát trên KHV (bước 6.4)
Hình 1.9: Sơ đồ quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát bộ NST ở châu chấu đực
(Nguồn: Vũ Đức Lưu, Nguyễn Minh Công, 2007)
Quy trình 7a: Thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát NST khổng lồ ở ruồi giấm
Tách lấy tuyến nước bọt của ấu trùng ruồi giấm trên lame có sẵn 1 giọt NaCl 0,6% (bước 7.1)
Loại bỏ phần thể mỡ và các phần mô thừa (bước 7.2)
Nhỏ 1 - 2 giọt orcein hoặc carmine, hơ nhẹ trên ngọn lửa đèn cồn, nhuộm từ 10-15 phút (bước 7.3)
Ép lamelle, thấm hết thuốc nhuộm (bước 7.4)
Quan sát trên KHV
Hình 1.10: Sơ đồ quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi tạm thời để quan sát NST khổng lồ ở ruồi giấm
(Nguồn: Vũ Đức Lưu, Nguyễn Minh Công, 2007)
Quy trình 8a: Cố định tiêu bản tạm thời đạt yêu cầu
Chọn những tiêu bản tạm thời đẹp
Úp ngược tiêu bản tạm thời trong acid acetic 45% khoảng10 phút để tách lamelle khỏi lame hoặc đặt tiêu bản trên băng đá CO2 từ 12-24 giờ,
sau đó tách lamelle khỏi lame (bước 8.1)
Ngâm tiêu bản lần lượt qua các dung dịch có nồng độ cồn tăng dần từ 300 400 500 600 700 800 900 960 cồn tuyệt đối
trong vài giây tùy đối tượng (bước 8.2)
Ngâm tiêu bản trong dung dịch n – butanol và xylene 1 xylene 2 trong vài phút
Để khô tiêu bản, nhỏ 1 giọt bome canada lên lame, đậy lamelle lại và để tiêu bản khô tự nhiên (bước 8.3) Hình 1.11: Sơ đồ quy trình thực hiện tiêu bản hiển vi cố định
(Nguồn: Võ Thị Thanh Phương, 2012)
CHƯƠNG 2