1.3.1. Ảnh hưởng của môi trường và phương pháp nuôi cấy
Môi trường nuôi cấy là yếu tố quan trọng cho nấm sinh trưởng và phát triển, nếu môi trường không tốt, nấm mọc yếu hoặc có thể sẽ không mọc. Trong quá trình nảy mầm ủể hỡnh thành bào tử nấm Metarhizium anisopliae cần cỏc nguồn C, N.
Sự phát triển của nấm phụ thuộc vào các chất ức chế khác nhau. Môi trường thích hợp nhất cho nấm phát triển là môi trường có chứa kitin làm nguồn carbon, nếu bổ sung thêm chất kitin và glucose thì trong quá trình nuôi cấy, nấm Metarhizium anisopliae sẽ thu ủược số lượng bào tử cao, bởi vỡ thành phần kitin trong mụi trường nuụi cấy là rất cần thiết ủối với cỏc loài nấm, nú giỳp cho sự phỏt triển và hỡnh thành bào tử ủớnh (Conidiospore) và bào tử trần (Blastoospore). Tuy nhiờn
khụng phải nguồn thức ăn C và N nào cũng ủều cú lợi cho sự sinh trưởng và phỏt triển cũng như sự nảy mầm và hình thành bảo tử của nấm Metarhizium anisopliae, vì ngoài nguồn nitơ vô cơ ra, nấm Metarhizium anisopliae còn sử dụng tốt nguồn hữu cơ như protein, pepton và các axit amin. Các nguyên tố vi lượng như Zn2+, Mg2+ có tác dụng kích thích cho sự phát triển của nấm.
Về phương pháp nuôi cấy theo các tác giả Rombach, Basto Cruz và cs., Hegedus và cs., Miao và cs., Jenkins và Prior, Shimanzu và cs. thì sử dụng phương phỏp nuụi cấy chỡm ủể sản xuất nấm sẽ thu ủược kết quả tốt, vỡ trong nuụi cấy chỡm, người ta ủó xỏc ủịnh ủược khả năng sinh bào tử chồi và lượng sinh khối Metarhizium anisopliae là rất cao. Bằng phương pháp nuôi cấy chìm (tại Trung Quốc), Li và cs. ủó thớ nghiệm tỏch chiết theo phương phỏp bản mỏng và cỏc tỏc giả ủó xỏc ủịnh ủược ủộc tố của nấm M.etarhizium anisopliae là Destruxin A, B, C và D (trích dẫn bởi Phạm Thị Thùy, 2004).
1.3.2. Ảnh hưởng của nhiệt ủộ và ủộ ẩm
Nhiệt ủộ và ẩm ủộ là hai yếu tố quan trọng cú ảnh hưởng ủến sự sinh trưởng và phát triển của nấm Metarhizium anisopliae. Theo kết quả nghiên cứu của Viện Bảo vệ Thực vật xỏc ủịnh phạm vi nhiệt ủộ thớch hợp cho nấm Metarhizium anisopliae phỏt triển tốt, phỏt triển ủều trong khoảng 25 - 300C. Ẩm ủộ thớch hợp trong phạm vi từ 80 - 90%, trờn hoặc dưới ngưỡng nhiệt - ẩm ủộ ủú thỡ nấm sẽ phỏt triển yếu, khi nhiệt ủộ quỏ cao thỡ bào tử dễ bị chết hoặc khụng hỡnh thành bào tử (Phạm Thị Thùy, 2004).
1.3.3. Ảnh hưởng của ánh sáng
Ánh sáng có tác dụng xúc tiến bào tử nảy mầm và hình thành bào tử, mặt khác ánh sáng cũng có tác dụng ức chế và diệt nấm.
Qua nhiều năm sản xuất nấm cụn trựng, Viện Bảo vệ Thực vật xỏc ủịnh nấm Metarhizium anisopliae phỏt triển tốt trong ủiều kiện ỏnh sỏng yếu, chỉ cần một lượng ỏnh sỏng nhỏ trong ngày với thời gian 6 - 8 giờ cũng ủủ cho nấm phỏt triển tốt. Nếu dưới ánh sáng trực xạ nấm Metarhizium anisopliae rất khó nẩy mầm. Vì
vậy, phũng nuụi cấy nấm cần phải che ỏnh sỏng mặt trời ủể hạn chế tia tử ngoại (Phạm Thị Thùy, 2004).
1.3.4. Ảnh hưởng của ủộ thoỏng khớ
Nấm Metarhizium anisopliae thuộc loại hiếu khí, khi nấm phát triển chúng ủũi hỏi ủiều kiện cú hàm lượng oxy thớch hợp trong cả biờn ủộ rộng cũng như trong dụng cụ nuụi cấy. Quỏ trỡnh nghiờn cứu, Phạm Thị Thựy và cs. ủó rỳt ra kết luận phạm vi thích hợp cho nấm Metarhizium anisopliae phát triển là 0,3 - 0,7m3 môi trường/m3 khụng khớ. Nếu sản xuất lớn cần ủể ủộ dầy bề mặt (xốp) của nấm trờn khay hay nia khoảng 10 - 15cm, trong phòng sản xuất có không gian thích hợp và ủiều kiện ẩm ủộ phự hợp (Phạm Thị Thựy, 2004).
1.3.5. Ảnh hưởng của hàm lượng nước
Nấm Metarhizium anisopliae ủũi hỏi lượng nước thớch hợp, nếu quỏ khụ hoặc quỏ ẩm thỡ nấm ủều phỏt triển khụng tốt, tỷ lệ nước thớch hợp trong mụi trường ủể nấm phỏt triển tốt nhất là 30 - 50% (Phạm Thị Thựy, 2004).
1.3.6. Ảnh hưởng của ủộ pH
Phạm vi nấm Metarhizium anisopliae sống ở ủộ pH: 3,5 - 8,0, song nấm Metarhizium anisopliae ưa mụi trường axit và phỏt triển thớch hợp nhất ở ủộ pH từ 5,5 - 6. Vỡ vậy, Phạm Thị Thựy ủó bổ sung vào mụi trường một lượng nhỏ KH2PO4
và MgSO4.7H2O, mục ủớch là ủể duy trỡ tớnh ổn ủịnh pH trong mụi trường nuụi cấy (Phạm Thị Thùy, 2004).
Theo Trần Văn Mão (2002) thì nấm Metarhizium anisopliae có pH từ 6,9 - 7,2. Nói chung, lợi dụng hợp chất cacbon làm giảm pH nhưng lợi dụng protein lại làm tăng pH. Vỡ vậy, theo Phạm Thị Thựy (2004) ủó bổ sung vào mụi trường một lượng nhỏ KH2PO4 và MgSO4.7H2O mục ủớch là ủể duy trỡ tớnh ổn ủịnh của pH trong môi trường nuôi cấy.
Và theo Issaly và cs. (2005), số lượng bào tử Metarhizium anisopliae ủạt cao nhất khi pH = 7.