Chương 3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP KHẢO SÁT
3.4 Phương pháp khảo sát
3.4.1 Phương pháp gián tiếp.
Sử dụng tài liệu lưu trữ của trại về các chỉ tiêu theo dõi của đực giống.
3.4.2 Phương pháp trực tiếp.
3.4.2.1 Xếp cấp ngoại hình thể chất.
Thành lập hội đồng giám định ngoại hình thể chất, gồm các thành viên:
Cán bộ kỹ thuật chuyên về công tác giống của công ty Sunjin.
Sinh viên thực tập.
Xếp cấp dựa theo TCVN 3666 – 89.
Đực giống cần xếp cấp đứng tự nhiên cách hội đồng giám định 2,5 – 3 m, nơi đầy đủ ánh sáng, bằng phẳng, thú được phê xét theo Bảng 3.3
23
Bảng 3.3 Tiêu chuẩn cho điểm và hệ số tính điểm ngoại hình (TCVN 3666 – 89)
Đặc điểm Điểm tối đa Hệ số Điểm * Hệ số
Thể chất, lông da 5 5 25
Đầu và cổ 5 1 5
Vai và ngực 5 2 10
Lưng, sườn, bụng 5 3 15
Mông và đùi sau 5 3 15
Bốn chân và móng 5 3 15
Bộ phận sinh dục và vú 5 3 15
Tính chung 5 20 100
(Trần Văn Chính, 2008) 3.4.2.2 Xếp cấp sinh trưởng
Dài thân (DT): được đo từ điểm nối giữa hai gốc tai dọc sát sống lưng đến khấu đuôi (m).
Vòng ngực (VN): chu vi quanh ngực, tiếp giáp ngay phía sau xương bả vai (m).
Sau đó chúng tôi dựa vào công thức sau để tính trọng lượng (P) của các đực giống
Công thức tính trọng lượng: P = (vòng ngực)2*dài thân*78,5
Từ trọng lượng và dài thân của các đực giống chúng tôi tra bảng tính điểm sinh trưởng của heo đực giống Yorkshire từ 6 tháng tuổi trở lên để cho điểm và xếp cấp cho các cá thể này (theo TCVN 3666 – 89) .
3.4.2.3 Xếp cấp tổng hợp
Do trại chỉ nuôi heo đực nên chúng tôi không xếp cấp sinh sản được. Nên xếp cấp tổng hợp được tính theo công thức như sau:
Điểm TH = [(Điểm ngoại hình *3) + (Điểm sinh trưởng * 6)]/10 Xếp cấp tổng hợp cho từng đực giống được đánh giá dựa vào Bảng 3.4
24
Bảng 3.4 Thang điểm xếp cấp ngoại hình thể chất, sinh trưởng.
Cấp Đặc cấp Cấp I Cấp II Cấp III Không xếp cấp Điểm tổng số 85 – 100 70 – 84 60 – 69 50 – 59 <50
3.4.2.4 Kiểm tra phẩm chất tinh dịch.
Kiểm tra bằng mắt thường.
Màu sắc: tinh dịch có màu trắng đục, trắng sữa hoặc trắng trong.
Mùi: tinh dịch bình thường có mùi đặc trưng hăng tanh như lòng trắng trứng.
Dung lượng (V): là lượng tinh được tính bằng ml trong một lần xuất tinh đã loại bỏ được keo phèn.
Để xác định dung lượng chúng tôi tiến hành lọc bỏ keo phèn bằng cách xếp hai lớp khăn đã tiệt trùng ở miệng ly lấy tinh, vừa lấy vừa lọc bỏ keo phèn, lấy tinh xong đem về phòng pha chế cho vào cốc mỏ quạ có chia vạch từ 50 – 900 ml để biết được số ml sau một lần lấy tinh/con.
Kiểm tra bằng kính hiển vi.
Hoạt lực (A): kiểm tra hoạt lực của tinh trùng qua 3 dạng vận động.
Vận động tiến thẳng: tinh trùng vận động mọi hướng, nhiều tinh trùng chạy thành cuộn sóng, đường kính lớn hơn chiều dài một con tinh trùng. Loại tinh trùng này có khả năng thụ thai rất tốt.
Vận động vòng tròn: đây là tinh trùng có hoạt lực yếu, nó chuyển động vòng tròn. Loại tinh trùng này không có khả năng thụ thai hoặc thụ thai rất kém.
Vận động tại chỗ: tinh trùng lúc này vận động rất yếu ớt, chỉ lắc lư tại chỗ. Loại tinh trùng này không có khả năng thụ thai.
Cách làm: dùng một đũa thủy tinh lấy một giọt tinh nguyên đặt lên lame quan sát dưới kính hiển vi với độ phóng đại 100 lần. Hoạt lực tinh trùng được tính bằng tỷ lệ phần trăm số tinh trùng tiến thẳng so với tổng số tinh trùng trong vi trường quan sát, từ đó hoạt lực của tinh trùng được đánh giá theo thang điêm 10 cấp được trình bày ở Bảng 3.5
25 Bảng 3.5 Điểm hoạt lực tinh trùng
Điểm Số tinh trùng tiến thẳng (%)
0,1 5 – 15
0,2 15 – 25
0,3 25 – 35
0,4 35 – 45
0,5 45 – 55
0,6 55 – 65
0,7 65 – 75
0,8 75 – 85
0,9 85 – 95
1 95 – 100
(Nguồn: theo Milovanop; trích dẫn bởi Danh Thành Đồng, 2011) Nồng độ (C): là số tinh trùng có trong 1 ml tinh dịch.
Ở đây chúng tôi sử dụng máy đếm nồng độ tinh trùng hiệu Metrosperm.
Cách tiến hành: mẫu sử dụng là tinh nguyên chưa pha chế và đã được lọc bỏ hết keo phèn.
Cũng như các máy đo quang phổ khác máy Metrosperm luôn yêu cầu đọc ô trống trước khi đưa vào phân tích. Khi mở máy lên xong ta cho đầu dò vào cốc môi trường đã chuẩn bị sẵn có nhiệt độ bằng nhiệt độ của tinh dịch để máy về trạng thái sẵn sàng. Tiếp theo ta cho đầu dò vào lọ đựng tinh dịch sao cho khoảng cảm biến ngập toàn bộ trong tinh dịch. Chú ý tránh để bọt khí trong khoang sẽ cho kết quả không chính xác. Sau khi máy hoạt động xong lấy ra đọc và ghi nhận kết quả.
Tính tích VAC: để xác định số tinh trùng có khả năng thụ thai trong 1 lần lấy tinh ( 109 tinh trùng/ lần lấy).
Công thức: VAC = V* A * C trong đó:
VAC: tích VAC (109 tttt/ll) V: thể tích tinh dịch (ml)
26 A: hoạt lực tinh trùng
C: nồng độ tinh trùng (106 tinh trùng/ml)
Sức kháng (R): là khả năng chịu đựng của tinh trùng trong điều kiện bất lợi.
Sức kháng phải được kiểm tra ngay sau khi lấy tinh và thời gian không quá 15 phút.
Cách làm: hút 0,1 ml tinh nguyên cho vào lọ đã có sẵn 50 ml NaCl 1 %. Sau đó chấm giọt tinh lên lame và xem trên kính hiển vi, nếu thấy tinh trùng còn tiến thẳng ta tiếp tục hút 1 ml dung dịch ở lọ 1 chuyển qua lọ 2 đã có sẵn 1 ml dung dich NaCl 1 %. Tiếp tục chấm giọt tinh lên lame và quan sát dưới kính hiển vi, nếu thấy tinh trùng vẫn còn tiến thẳng ta tiếp tục lấy 1 ml ở lọ 2 chuyển qua lọ 3 chưa có NaCl 1 %. Lúc này ta tiến hành nhỏ 0,4 ml hoặc 0,2 ml dung dịch NaCl 1 % vào lọ 3 và cứ mỗi lần nhỏ thì ta chấm lên lame để quan sát, đến khi tinh trùng không còn tiến thẳng mà nằm một chỗ lắc lư thì ngưng.
Công thức: R = V NaCl / V td trong đó:
V NaCl: thể tích nước muối NaCl V td: thể tích tinh trùng
Nếu số lần pha chế n > 2 lần thì sức kháng được tính theo công thức Công thức: R = r0 + r * n
trong đó:
R: sức kháng tinh trùng r0: sức kháng tinh trùng ở lọ 2 r : sức kháng mỗi lần thêm vào lọ 3 n: số lần nhỏ thêm dung dịch NaCl 1 % Kiểm tra tỷ lệ sống của tinh trùng
Các chỉ tiêu về tình trạng tinh trùng được thực hiện bằng phương pháp nhuộm tinh trùng do Kovác (1992).
Phương pháp nhuộm:
Một giọt Trypan Blue và một giọt tinh trộn lẫn, phết lên kính và chờ cho vết phết khô
27
Cố định vết phết bằng dung dịch cố định (gồm formaldehyde 37 %, neutralred và HCl 1N) trong 2 phút. Sau đó vết phết được rửa bằng nước thường rồi nước cất.
Ngâm phiến kính trong dung dịch giemsa khoảng 3,5 – 4,5 giờ hoặc qua đêm. Sau đó rửa bằng nước thường rồi nước cất.
Ngâm phiến kính trong nước cất 2 phút, để khô tự nhiên rồi xem kính hiển vi với độ phóng đại 100 lần
Cách đánh giá tinh trùng sau khi nhuộm
Quan sát phần sau của đầu để xác định tinh trùng sống/chết.
Phần sau của đầu tinh trùng từ đen đến xám là tinh trùng chết.
Phần sau của đầu tinh trùng có màu trắng hoặc trắng hồng là tinh trùng sống.
Tinh trùng kỳ hình được nhận diện dựa vào hình dạng của đầu, cổ, thân, đuôi.