- Mục tiêu 1: mô tả cắt ngang
- Mục tiêu 2: mô tả cắt ngang (có so sánh với nhóm chứng)
2.3.2. Cỡ mẫu nghiên cứu
- Mục tiêu 1: Mẫu thuận tiện: tất cả bệnh nhân vảy nến thể mủ toàn thân đến khám và điều trị tại Bệnh viện Da Liễu Trung Ương, Bệnh viện TWQĐ 108 từ tháng 7/2019 đến tháng 5/2020
- Mục tiêu 2: Cỡ mẫu tính theo công thức tính theo công thức tính cỡ mẫu mô tả tỉ lệ:
n1 = n2 = { }
2 2 1
2 2 2
1 1 2
/ 1
) (
) 1 ( ) 1 ( )
1 ( 2
P P
P P
P P Z P P Z
−
− +
− +
−α − β
n1 :cỡ mẫu của nhóm nghiên cứu (NNC).
n2: cỡ mẫu của nhóm đối chứng (NDC).
Z1-α/2 : hệ số tin cậy 95% (= 1,96) Zβ: lực mẫu (80% = 1,645)
p1 : tỷ lệ bệnh nhân nhóm nghiên cứu có giảm Zn, ước lượng là: 85%
p2 : tỷ lệ bệnh nhân nhóm đối chứng giảm Zn, ước lượng là: 45%
P = 2
2
1 P
P +
Kết quả tính cỡ mẫu mỗi nhóm là n1= n2=30 bệnh nhân, Tính cả sai số, mỗi nhóm lấy khoảng 35 bệnh nhân.
2.3.3. Các bước tiến hành nghiên cứu 2.3.3.1. Thực hiện mục tiêu 1
- Tuyển chọn bệnh nhân đủ tiêu chuẩn vào mẫu nghiên cứu.
- Lập phiếu thu thập thông tin, phỏng vấn bệnh nhân về:
•Hành chính: tên, tuổi, giới, địa chỉ, nghề nghiệp…
•Tiền sử: Bản thân: thời gian bị bệnh (tuổi khởi phát), yếu tố khởi phát hay làm nặng bệnh, bệnh lý kết hợp. Gia đình: mắc bệnh vảy nến hay vảy nến thể mủ.
•Triệu chứng cơ năng: ngứa, đau, rát
•Đánh giá mức độ bệnh vảy nến thể mủ
•Triệu chứng lâm sàng:
- Ban đỏ:
- ≥ 75% diện tích: 3 điểm
- 25% - <75% diện tích: 2 điểm - ≤ 25% diện tích: 1 điểm
- Mụn mủ trên nền ban đỏ:
- ≥ 75% diện tích: 3 điểm
- 25% - <75% diện tích: 2 điểm - ≤ 25% diện tích: 1 điểm
- Phù nề:
- ≥ 75% diện tích: 3 điểm
- 25% - <75% diện tích: 2 điểm - ≤ 25% diện tích: 1 điểm
- Sốt:
- ≥ 38.5 độ: 2 điểm - 37 -<38.5 độ: 1 điểm - < 37 độ: 0 điểm
Triệu chứng toàn thân khác: mệt mỏi, ớn lạnh…
•Triệu chứng cận lâm sàng:
- Bạch cầu (G/l):
- ≥ 15: 2 điểm - 10 - <15: 1 điểm - < 10: 0 điểm - CRP (mg/dl):
- ≥ 7: 2 điểm - 0.3-<7: 1 điểm
- <0.3: 0 điểm
- Albumin máu (g/dl):
- <3: 2 điểm - 3-<3,8: 1 điểm - ≥3,8: 0 điểm
•Tổng điểm:
- 0-6 điểm: nhẹ - 7-10 điểm : vừa - 11-17 điểm: nặng 2.3.3.2. Thực hiện mục tiêu 2
Để xác định nồng độ Zn, Cu, Ca trong máu bệnh nhân vảy nến thể mủ toàn thân được tiến hành trên 2 nhóm: nhóm bệnh nhân vảy nến thể mủ toàn thân (nhóm nghiên cứu - NNC) và nhóm người khỏe (nhóm đối chứng - NĐC)
- Nhóm nghiên cứu:
+ Tuyển chọn bệnh nhân vảy nến thể mủ toàn thân + Lấy máu xét nghiệm và xử lý và bảo quản huyết thanh
+ Làm xét nghiệm (huyết thanh để tủ lạnh bảo quản ở ngăn đông, khi đủ số lượng sẽ được tiến hành xét nghiệm cùng một lúc)
-Nhóm đối chứng:
+ Tuyển chọn người cùng tuổi, cùng giới với nhóm nghiên cứu + Lấy máu xét nghiệm và xử lý và bảo quản huyết thanh
+ Làm xét nghiệm (huyết thanh để tủ lạnh bảo quản ở ngăn đông, khi đủ số lượng sẽ được tiến hành xét nghiệm cùng một lúc)
2.3.4. Kỹ thuật ứng dụng trong nghiên cứu 2.3.4.1. Kỹ thuật định lượng kẽm, đồng và canxi
- Phương pháp:Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử là phương pháp hiện đại, có độ nhậy và chính xác cao, thường được sử dụng để định lượng các kim loại có hàm lượng rất bé ( 10-6 – 10-9 ) trong mẫu kiểm tra.
-Nguyên lý: Nồng độ kẽm, đồng, canxi được xác định theo phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử. Dùng ngọn lửa có nhiệt độ cao để nguyên tử hóa mẫu, đo độ hấp thụ nguyên tử và căn cứ vào đồ thị chuẩn để tính toán lượng kẽm có trong mẫu.
Cụ thể: Mẫu sau khi được phá hủy bằng hỗn hợp HCl và HNO3 (3:1) và đuổi hết HNO3, HCl, cặn được hòa tan bởi dung dịch HCl 1N. Dung dịch mẫu thu được sẽ được phun vào ngọn lửa Acetylen không khí và do các giá trị hấp thụ các bức xạ cộng hưởng bởi các nguyên tử trung tính của các nguyên tố cần xác định đã được sinh ra trong quá trình nguyên tử hóa mẫu – để có nguồn bức xạ cộng hưởng người ta dùng các đèn Catốt tương ứng với từng nguyên tố.
-Các bước tiến hành: Lấy 2ml huyết thanh cộng 1ml HCL lắc đều để 10 phút. Sau đó, thêm TCA 10% lắc đều để 30 phút. Ly tâm hút khoảng 8ml dịch nổi. Cho thêm 1,5ml potassium acetate 30% và 2ml bathophenan throlin (25mg/ml) lắc đều, để 5 phút. Thêm 1ml methylisobutylketone, lắc mạnh đều 10 giây. Để lắng và sử dụng phần dịch hữu cơ cho xét nghiệm.
Hút 2 ml dịch chuẩn với methylisobutylketone, thêm các chất thử như chuẩn bị mẫu. Xác định đường chuẩn các nồng độ: 0, 0.3, 0.5, 1.0
-Đọc kết quả: So sánh đường chuẩn với đường mẫu thử và tương ứng với lượng kẽm, đồng, canxi cần định lượng.
-Nơi tiến hành: Khoa Sinh hóa, Viện 69, Bộ Tư lệnh bảo vệ lăng Chủ tịch Hồ Chí Minh.
2.3.4.2. Đánh giá mức độ bệnh vảy nến thể mủ
•Triệu chứng lâm sàng:
- Ban đỏ: ≥ 75% diện tích: 3 điểm; 25% - <75% diện tích: 2 điểm; ≤ 25%
diện tích: 1 điểm
- Mụn mủ trên nền ban đỏ:≥ 75% diện tích: 3 điểm; 25% - <75% diện tích: 2 điểm; ≤ 25% diện tích: 1 điểm
- Phù nề:≥ 75% diện tích: 3 điểm; 25% - <75% diện tích: 2 điểm; ≤ 25%
diện tích: 1 điểm
- Sốt: ≥ 38.5 độ: 2 điểm; 37 -<38.5 độ: 1 điểm; < 37 độ: 0 điểm Triệu chứng toàn thân khác: mệt mỏi, ớn lạnh…
•Triệu chứng cận lâm sàng:
- Bạch cầu (G/l): ≥ 15: 2 điểm; 10 - <15: 1 điểm; < 10: 0 điểm - CRP (mg/dl): ≥ 7: 2 điểm; 0.3-<7: 1 điểm; <0.3: 0 điểm
- Albumin máu (g/dl): <3: 2 điểm; 3-<3,8: 1 điểm; ≥3,8: 0 điểm Tổng điểm: 0-6 điểm: nhẹ; 7-10 điểm : vừa; 11-17 điểm: nặng
2.3.5. Biến số, chỉ số nghiên cứu
- Mục tiêu 1: Các chỉ số theo dõi về các yếu tố liên quan với lâm sàng gồm tuổi đời (tính theo năm), giới, nghề nghiệp, thời gian mắc bệnh (tuổi bệnh: tính theo tháng), các yếu tố khởi phát hay làm nặng bệnh, địa dư, các bệnh phối hợp, triệu chứng cơ năng, đánh giá mức độ bệnh,
- Mục tiêu 2: Các chỉ số gồm nồng độ kẽm, đồng, canxi trong máu của bệnh nhânvảy nến thể mủ toàn thân; nồng độ kẽm, đồng, canxi trong máu của người khỏe, so sánh kết quả của 2 nhóm, mối liên quan nồng độ kẽm, đồng, canxi của bệnh nhân vảy nến thể mủ toàn thân với lâm sàng (tuổi đời, tuổi bệnh, giới tính, yếu tố khởi phát hay làm nặng bệnh, mức độ bệnh, ….); đánh giá tương quan của các yếu tố đồng, kẽm, canxi.