Chương 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp và vật liệu nghiên cứu
2.3.1. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1.1. Điều tra tình hình nhiễm cầu trùng gà tại thành phố BMT Bằng phương pháp xét nghiệm phân và mổ khám.
* Số ủàn ủiều tra: 5 ủàn gà siờu thịt giống Cobb tại thành phố BMT.
Phương pháp lấy mẫu: Ngẫu nhiên không hoàn toàn.
Số mẫu lấy: Số mẫu lấy dược tính theo công thức n=[z2p(1-p)]/d2 = 369.
Với p = 40% (Chỳng tụi ủó lấy 50 mẫu khảo sỏt thử ủể ủỏnh giỏ sơ bộ tình hình nhiễm, và có 20 mẫu dương tính với cầu trùng); z = 1.96; d = 0.05
Chỳng tụi ủó lấy tổng cộng 372 mẫu ủể làm thớ nghiệm. Tại trại 1 và trại 2 chúng tôi lấy mỗi trại 30 mẫu, trại 3 lấy 72 mẫu, trại 4 lấy 90 mẫu, trại 5 lấy 150 mẫu. Số mẫu lấy của mỗi trại ủược chia ủều trong 6 tuần.
Định kỡ kiểm tra phõn mỗi tuần một lần, mẫu ủược lấy ngẫu nhiờn, chọn những mẫu phân tươi mới, dùng giấy carton mới lấy phân cho vào bao ni lụng. Mẫu phõn lấy xong ủược ủưa về phũng thớ nghiệm và ủược xột nghiệm tìm Oocyst theo phương pháp phù nổi.
Phương pháp phù nổi Willis
Phương pháp này dựa vào sự khác biệt về tỉ trọng giữa dung dịch và oocyst cầu trùng. Tỷ trọng oocyst nhỏ hơn dung dịch nên oocyst sẽ nổi lên trên bề mặt.
Dung dịch Willis: NaCl 450g và nước cất vừa ủủ 1000ml (nước muối bảo hòa)
Cách thực hiện:
- Pha dung dịch Willis: Cho 450g NaCl vào 1000ml nước cất, khuấy ủều, lọc qua bụng thấm nước cho dung dịch ủược sạch.
- Dùng 2 - 3g phân cho vào lọ rồi cho nước muối bảo hòa khoảng 2/3 lọ, dựng ủũa thủy tinh khuấy cho tan phõn ra (mỗi mẫu dựng ủũa riờng) ủể yờn 1 phỳt, sau ủú cho qua rõy ủể lọc bỏ phần rỏc cho dung dịch ủược sạch, tiếp tục cho nước muối bảo hũa vào lọ cho ủầy bằng lọ miệng.
- Dựng lamen ủặt lờn lọ từ từ ủể khụng cú bọt khớ, ủể yờn 10 - 15 phỳt, sau ủú lấy phiến kớnh ra ủể kiểm tra.
Tìm oocyst cầu trùng ở vật kính 10 và 40.
* Tính tỷ lệ nhiễm cầu trùng trên gà tại thành phố BMT (%) Tỷ lệ nhiễm (%) = (Số mẫu nhiễm/ Số mẫu kiểm tra) x 100
2.3.1.2. Xỏc ủịnh chủng cầu trựng
Qua quỏ trỡnh ủiều tra chỳng tụi ủó tiến hành mổ khỏm kết hợp gửi 40 mẫu phân dương tính với cầu trùng đi xét nghiệm tại Trạm Chẩn đốn xét nghiệm và ủiều trị - Chi cục Thỳ y thành phố Hồ Chớ Minh.
Phương pháp xét nghiệm: soi tươi, tập trung và lắng gạn.
2.3.1.3. Nghiờn cứu về sự biến ủổi cấu trỳc ruột gà khi bị nhiễm cầu trựng Qua kết quả xét nghiệm phân và dựa vào triệu chứng, bệnh tích mổ khỏm chỳng tụi xỏc ủịnh ủược gà bị bệnh cầu trựng. Sau ủú tiến hành lấy những ủoạn ruột cú bệnh tớch ủiển hỡnh ủi xột nghiệm.
Chỳng tụi tiến hành gửi 8 mẫu (mẫu ủược bảo quản trong dung dịch formol 10%) đến Trạm chẩn đốn xét nghiệm và điều trị - Chi cục Thú y thành phố Hồ Chớ Minh ủể xột nghiệm.
Phương pháp xét nghiệm: nhuộm Hematoxylin - Eosin
2.3.1.4. Thử nghiệm 1 số loại thuốc phòng và trị bệnh cầu trùng trên gà
* Chúng tôi sử dụng 2 loại thuốc phổ biến trị bệnh cầu trùng cho gà hiện nay là Rtd - Cocired, Nova - coc 2.5% cho thí nghiệm.
Liều dùng:
Rtd - Cocired với liều 1g /2 lít nước dùng liên tục trong 5 ngày.
Nova - coc 2.5% với liều 1.5ml /1 lít nước dùng liên tục trong 2 ngày.
Chỳng tụi tiến hành xột nghiệm phõn và chọn ra 60 con dương tớnh ủể thớ nghiệm ủiều trị. Gà ủược chia ủều làm 2 lụ thớ nghiệm, mỗi lụ 30 con, 1 lụ dựng Rtd - Cocired, và 1 lụ dựng Nova - coc 2.5%. Gà thớ nghiệm ủều ở 3 tuần tuổi, ủược nuụi trờn nền với ủệm lút là vỏ trấu, là giống gà Cobb và ủược chăm sóc, nuôi dưỡng như nhau trong suốt quá trình thí nghiệm. Sau khi cho gà uống thuốc, lần lượt 3 ngày, 5 ngày và 7 ngày, mỗi lô thí nghiệm chúng tôi lấy ủều lấy 100% mẫu phõn của từng lụ ủể xột nghiệm.
Sơ ủồ bố trớ thớ nghiệm:
Số lượng (con) Thuốc trị bệnh
TN1 30 Rtd - Cocired
TN2 30 Nova - coc 2.5%
* Đồng thời chỳng tụi cũng sử dụng hai loại thuốc trờn ủể tiến hành thớ nghiệm phòng bệnh cầu trùng cho gà.
Liều dùng:
Rtd - Cocired với liều 1g /4 lit nước dùng liên tục trong 5 ngày Nova - coc 2.5% với liều 1ml/1 lit nước dùng liên tục trong 2 ngày Sơ ủồ bố trớ thớ nghiệm
Đối chứng TN1 TN2
Số lượng (con) 100 100 100
Thuốc phòng bệnh Không sử dụng Rtd-Cocired Nova–coc 2.5%
Đợt 1 Rtd-Cocired Nova–coc 2.5%
Đợt 2 Rtd-Cocired Nova–coc 2.5%
Đợt 1 từ 8 - 10 ngày tuổi, ủợt 2 từ 20 - 22 ngày tuổi. (Áp dụng theo tài liệu Bộ môn Nội chẩn dược, Khoa Thú y, Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội);
Cỏc gà thớ nghiệm ủược nuụi trờn nền với ủệm lút là vỏ trấu, là giống gà
Cobb. Cỏc gà thớ nghiệm cũng ủược chăm súc, nuụi dưỡng như nhau trong suốt thời gian thí nghiệm.
Thành phần thuốc thử nghiệm
Thuốc thử nghiệm Thành phần Hàm lượng trong 100g thuốc Rtd-Cocired Sulfadimerazin
Diaveridine
24, 6 gam 2,6 gam Nova–coc 2.5% Toltrazuril
* Cơ chế tỏc ủộng của thuốc
+ Sulfadimerazin: Thuốc thuộc nhóm sulfamid. Các sulfamid có cấu trúc tương tự với para - aminobenzoic (PABA), do có cấu trúc hơi giống PABA nờn kiểu tỏc ủộng của sulfamid là ức chế tranh chấp với PABA. Vỡ cầu trựng cần PABA ủể tổng hợp acid folic, từ ủú tiếp tục tổng hợp bazo purin và tạo thành acid nucleic. Sulfamid thay thế vị trí của PABA trong phản phản ứng nên hạn chế sự nhân lên của cầu trùng.
+ Diaveridine:
Cấu trúc hóa học: 2,4 - diamino - 5 - (3,4 - dimethoxy benzyl) pyrimidin.
Thuốc cú tỏc dụng làm ổn ủịnh cầu trựng. Thuốc can thiệp vào quỏ trỡnh biến dưỡng của acid folic.
+ Toltrazuril:
Thuốc ở dạng hỗn hợp, ở dạng dung dịch tan trong nước có tác dụng tốt trị cầu trựng ở giai ủoạn schizogony và gametogony. Thuốc cú tỏc dụng ức chế sự sinh sản và phát triển của sporozoites. Dùng 25ppm. (1ppm = 1ml/1lit nước).