Hiện nay, có khoảng 75-80% dân số thế giới, chủ yếu ở các nước đang phát triển được hưởng việc chăm sóc sức khỏe bằng nền Y học cổ truyền (YHCT), do dễ chấp nhận về văn hóa, dễ tương thích với cơ thể con người và ít tác dụng phụ. Thực tế, trong vài năm qua đã chứng kiến sự gia tăng đáng kể trong việc sử dụng thuốc YHCT ở các nước phát triển. Ở Đức và Pháp, nhiều loại thảo mộc và sản phẩm chiết xuất từ thảo mộc được sử dụng như là thuốc kê đơn và được bán hàng tại các nước thuộc Liên minh châu Âu với doanh số khoảng 6 tỷ USD trong năm 1991 và hơn 20 tỷ USD vào năm 2000. Tại Mỹ, các loại thuốc thảo dƣợc hiện đang đƣợc bán tại các cửa hàng thực phẩm chức năng với doanh thu khoảng 4 tỷ USD vào năm 1996 và tăng gấp đôi vào cuối thể kỷ 20. Tại Ấn Độ, thị trường thuốc thảo dược là khoảng 1 tỷ USD và việc xuất khẩu thuốc thô nguồn gốc thực vật khoảng 80 triệu USD. Thuốc thảo dƣợc cũng có vị trí trong thị trường thực phẩm chức năng mà thị trường này được ước tính vào khoảng 80-250 tỷ USD tại Mỹ và châu Âu [72].
Theo báo cáo của WHO, từ những năm 90 của thế kỷ trước, thế giới đã quan tâm đến việc đánh giá chất lƣợng thuốc thảo dƣợc. Với tình hình sử dụng dƣợc liệu cổ
- 17-
truyền ngày càng tăng, tổ chức y tế thế giới đã có các quy định về việc nhận dạng dƣợc liệu cổ truyền từ nguyên liệu là thực vật với việc xây dựng các tiêu chuẩn từ nhận dạng cây, các bộ phận sử dụng đến quá trình chuẩn bị nguyên liệu hay sản phẩm cuối cùng. Nếu không xác định đƣợc hoạt chất thì cần phải có dấu vân tay sắc ký để xác định chất hoặc hỗn hợp các chất [150, 151].
Định nghĩa về dấu vân tay sắc ký: Dấu vân tay sắc ký của một mẫu dƣợc liệu là bản sắc ký đồ của dịch chiết các thành phần hóa học có hoạt tính dƣợc lý của dƣợc liệu đó. Sắc đồ này phải đảm bảo các yêu cầu về sự xuất hiện “rõ ràng” hay “mờ nhạt”, sự “giống nhau” hay “khác nhau” của các yếu tố hóa học có mặt trong dƣợc liệu [3, 70].
Dấu vân tay sắc ký dựa trên cơ sở các phương pháp sắc ký, do đây là phương pháp đƣợc sử dụng phổ biến để định tính thành phần các chất trong dƣợc liệu, trong dịch chiết dƣợc liệu hay phát hiện các tạp chất, các chất giả mạo pha trộn trong dƣợc liệu hay các thành phẩm từ dược liệu. Khi sử dụng các phương pháp sắc ký, có thể phát hiện các thành phần trong hỗn hợp dựa vào số lƣợng, màu sắc các vết trên sắc ký lớp mỏng hay thời gian lưu và diện tích píc trên HPLC... Nếu sử dụng các chất chuẩn sắc ký trong cùng điều kiện, ta có thể xác nhận sự có mặt của chất đó trong dƣợc liệu.
Điều này giúp cho việc xác nhận dƣợc liệu, tránh nhầm lẫn vì mỗi dƣợc liệu có thành phần hóa học nhất định và đặc trƣng gọi là dấu vân tay của dƣợc liệu. Với việc định tính dấu vân tay, thay cho chất chuẩn, người ta sử dụng một dược liệu chuẩn và tiến hành chiết xuất, tiến hành sắc ký trong cùng một điều kiện với dƣợc liệu cần kiểm nghiệm. Sự khác biệt giữa sắc ký đồ của mẫu chuẩn và mẫu thử cho phép đánh giá chất lƣợng dƣợc liệu. Các thành phần lạ trên mẫu thử không có ở mẫu chuẩn có thể là dấu hiệu cho thấy dƣợc liệu không đúng, bị pha tạp hay kém chất lƣợng.
Về nguyên tắc, hai mẫu dƣợc liệu của cùng một loài phải có sắc ký đồ đồng nhất. Từ đó, có thể xác nhận đƣợc mẫu kiểm nghiệm có đúng hay không, có bị giả mạo hay pha tạp. Trên thực tế, thành phần các chất trong các mẫu có thể có những sai biệt nhất định do các điều kiện di truyền (các chủng, dạng, thứ hay loài phụ, các loài lai, loài trồng trọt...) hay điều kiện phát triển (thổ nhƣỡng, khí hậu), điều kiện thu hái (tuổi, mùa thu hái) v.v... Tùy thuộc vào từng loài và yêu cầu sử dụng mà chấp nhận những sự khác biệt về thành phần đến một mức độ nào đó. Nếu sự khác biệt quá lớn, đặc biệt là trên những thành phần chính, thường là do các biến thể dưới loài hay cây mọc ở các vùng có điều kiện rất cách biệt nhau thì có thể phải coi là những dƣợc liệu riêng biệt [3, 70].
Dựa vào những đặc tính nêu trên, phương pháp dấu vân tay sắc ký được sử dụng trong việc đánh giá và kiểm soát chất lƣợng dƣợc liệu. Đã có nhiều nghiên cứu trên thế giới tập trung vào việc xây dựng dấu vân tay sắc ký. Dưới đây là bảng liệt kê Header Page 30 of 148.
một số công trình trên thế giới liên quan đến dấu vân tay sắc ký của các loài thảo dƣợc.
Bảng 1.4. Một số công trình trên thế giới nghiên cứu dấu vân tay sắc ký
STT Đối tƣợng nghiên cứu Kỹ thuật sử dụng TLTK
1 Chyawanprash
(Emblica officinalis Gaertn.) HPTLC [74]
2 Radix Scutellariae (Scutellaria
baicalensis Georgi.) CE, HPLC-DAD [146]
3 Radix Semiaquilegiae (Semiaquilegia
adoxoides (DC.) Makino.) HPLC-DAD [104]
4 Flos Carthami (Carthamus tinctorius
L.) CE, HPLC-UV [155]
5 Ginkgo biloba L. HPLC-DAD [38]
6
Baishouwu (Cynanchum auriculatum Royle ex Wight, Cynanchum bungei Decne., and Cynanchum wilfordii (Maxim.) Hemsl.
HPLC-DAD [168]
7 12 loại dầu cây lá kim (Pine Needle
Oil) GC-MS [59]
8 Nhựa cây (Dracaena
cochinchinensis (Lour.) S.C. Chen.) MEEKC, HPLC-DAD [32]
9 Hương thuốc lá (Tobacco Flavor) GC, GC-MS [173]
10 Eucommia Bark (Eucommia ulmoides
Oliv.) HPLC-DAD, HPLC-MS [103]
11 Linh chi (Ganoderma species) HPLC-UV [127]
12 Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC. CE [62]
13 Erigeron breviscapus (vant.) Hand.
Mazz. CE [87]
14 Poria cocos (Schw.) Wolf. HPLC-DAD [169]
15 Tinh dầu nghệ kwangsiensis ở Quảng
Tây GC-MS [162]
16 Cirsium setosum (Willd.) MB. HPLC-UV [91]
17 Macrothelypteris torresiana (Gaud.) HPLC-UV [157]
18 Dâu tây (Rubus chingii Hu.) HPLC-UV [35]
19 Euonymus alatus (Thuhb.) Siebold. HPLC-UV, LC-ESI-MS [167]
20 Rễ cây Glehnia littorali F. Schmidt
ex Miq. HPLC-DAD [145]
21 Nước sắc thuốc Gegen Qinlian HPLC-DAD, LC-ESI-MS [37]
- 19-
STT Đối tƣợng nghiên cứu Kỹ thuật sử dụng TLTK
22 Andrographis paniculata Nees. HPLC-DAD [40]
23 Crocus sativus L. HPLC-DAD [147]
24 Thuốc cổ truyền Sheng-Mai-San CE-DAD [48]
25 Lippia gracilis Schauer. HPLC-DAD [54]
26 Bạch quả (Ginkgo biloba L.) HPLC-DAD [138]
27 Lá đậu Senna (Cassia acutifolia Del.) HPLC-DAD [43]
28
Chaihu (rễ Bupleuri: Bupleurum chinense DC., B. scorzonerifolium Willd. and B. smithii Wolff.)
HPLC-UV [89]
29 Aconitum heterophyllum Wall. ex
Royle., Cyperus rotundus L. HPLC-UV [144]
30 Rhizoma Smilacis Glabrae HPLC-DAD, HPLC-MS/MS [165]
31 Cyperus rotundus L. GC-MS [153]
32 Achillea collina Becker ex Rchb. HS-SPME-GC-MS [53]
33 Licorice (Glycyrrhiza uralensis
Fisch.) HPLC-DAD [44]
34 Drynaria fortunei (Kunze) J. Sm. HPLC-DAD [88]
35 Ostericum koreanum Maximowicz. HPLC-UV [77]
36 Rễ Aconiti (Aconitum carmichaeli
Debx.) và rễ Aconiti đã qua xử lý UPLC-MS [172]
37
Zingiber montanum Link ex A.Dietr., Zingiber americans Bl., Zingiber zerumbet (L.) Roscoe ex Sm.
Sắc ký lỏng mao quản-MS
[112]
38 Nước sắc thuốc Siwu UPLC-QTOF-MS/MS, HPLC-
DAD [135]
39
Andrographis paniculata (Burm.f.) Wall. ex Nees., và thuốc chữa cao huyết áp
HPTLC [23]
40 Kỹ thuật phân tích dấu vân tay TLC [96]
41 Cúc (Chrysanthemum morifolium
Ramat.) UPLC-DAD [86]
42 Senecio vulgaris L. và Senecio
scandens Buch.-Ham. UPLC-ESI-MS [156]
43 Rubia cordifolia L. HPLC-UV, TLC [166]
44 ƣởi (Citrus grandis (L.) Osbeck.) HPLC-ESI-(+)-DAD-MS/MS [161]
45 Phyllanthus urinaria Linn. và
Phyllanthus amarus Schum. & HPLC-TOF-MS [57]
Header Page 32 of 148.
STT Đối tƣợng nghiên cứu Kỹ thuật sử dụng TLTK Thonn.
46 Fuzi (Aconitum carmichaeli
Debeaux.) UPLC–DAD [174]
47 Trà xanh Pu-Erh (Camellia sinensis
(L.) Kuntze.) HS-SPME-GC-MS [92]
48 Thuốc Shuang-Huang-Lian HPLC-DAD [164]
49 Juniperus communis L. NMR [46]
50 Stemona tuberosa Lour., S. japonica
(Bl.) Miq., và S. sessilifolia Miq. HPLC-DAD, LC-MSn [47]
51 Curcuma xanthorrhiza Roxb., và
Curcuma longa L. HPLC-DAD [113]
52 Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.
và Schisandra sphenanthera Rehd. Flash Evaporation-GC-MS [64]
53 Rhizoma Chuanxiong (Ligusticum
chuanxiong Hort.) HPLC-DAD [49]
Tại Việt Nam, năm 2006 tác giả Nguyễn Thị Bích Thu [7] ở Viện Dƣợc liệu – Bộ Y tế đã tiến hành “Nghiên cứu chuẩn hóa dƣợc liệu bằng sắc ký lỏng cao áp với kỹ thuật điểm chỉ vân tay” cho 10 loại dƣợc liệu gồm: Cúc hoa, Hạ khô thảo, Hoàng cầm, Sinh địa, Ngũ gia bì gai, Ngũ gia bì hương, Sài hồ, đầu, Tam thất và Mật gấu. Đề tài này đã thực hiện các công việc nhƣ sau:
- Thu thập mẫu dƣợc liệu chuẩn;
- Khảo sát lựa chọn phương pháp chiết tách và phân tích thích hợp cho từng loại dược liệu;
- Xây dựng dấu vân tay sắc ký lỏng hiệu năng cao của dƣợc liệu chuẩn bao gồm xác định thời gian lưu, diện tích píc và phổ UV của từng píc trong sắc đồ;
- Ứng dụng kết quả nghiên cứu để xác định chất lƣợng một số dƣợc liệu trên thị trường.
Trong năm 2006 tác giả Nguyễn Kim Bích [6] ở Viện Dƣợc liệu – Bộ Y tế cũng tiến hành đề tài “Phân tích và xác định các đặc điểm hóa học đặc trƣng của dƣợc liệu phục vụ công tác tiêu chuẩn hóa” cho 20 loại dƣợc liệu gồm:
Bảng 1.5. Các loại dƣợc liệu trong công trình [6].
STT Tên dƣợc liệu STT Tên dƣợc liệu
1 Ba kích 11 dƣợc
2 Bồ công anh 12 Sài hồ
3 Cẩu tích 13 Tô mộc
- 21-
STT Tên dƣợc liệu STT Tên dƣợc liệu
4 Cỏ nhọ nồi 14 Tang bạch bì
5 Dây đau xương 15 Thảo quyết minh
6 Đảng sâm 16 Thổ phục linh
7 Đỗ trọng 17 Tiền hồ
8 Hà thủ ô 18 Trạch tả
9 Mộc hương 19 Xa tiền tử
10 Nga truật 20 Xuyên khung
Đề tài đã đưa ra phương pháp phân tích dựa trên cơ sở xác định các đặc điểm đặc trưng dạng “vân tay” nhóm chất của dược liệu theo 2 bước:
- Phân tích sàng lọc xác định nhóm chất của dƣợc liệu.
- Tiến hành khảo sát, xác định các đặc điểm hóa học đặc trƣng của nhóm chất đã đƣợc phát hiện sơ bộ từ kết quả phân tích sàng lọc của dƣợc liệu bằng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng.
- Đề tài cũng khảo sát, xác định đặc điểm hóa học đặc trưng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và sắc ký khí, sắc ký khí – khối phổ tuy nhiên chỉ cho nhóm lignan của Đỗ trọng, alcaloid bay hơi của Xuyên khung và thành phần bay hơi của dƣợc.