CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
4.3. Nghiên cứu định tính dấu vân tay sắc ký bằng HPLC
4.3.2. Kết quả phân tích dấu vân tay sắc ký
Xuất phát từ nghiên cứu phổ UV của các chất đánh dấu, dựa trên kết quả các sắc đồ của 16 mẫu tại nhiều bước sóng nghiên cứu, bước sóng lựa chọn để xây dựng dấu vân tay sắc ký là 275 nm do tại bước sóng này các píc của các mẫu đều xuất hiện và thể hiện rõ. Tại các bước sóng khác (230, 290, 320 nm) các sắc đồ xuất hiện ít píc hơn hoặc tín hiệu diện tích píc nhỏ hơn và qua đánh giá cũng không cho các kết quả khác so với tại bước sóng 275 nm. Kết quả nghiên cứu sắc ký dấu vân tay của các mẫu đƣợc thể hiện qua các sắc đồ sau:
Hình 4.22: sắc ký đồ các mẫu CGV từ 1 đến 6 xếp từ dưới lên trên, Hình 4.23: sắc ký đồ các mẫu CGB từ 1 đến 6 xếp từ dưới lên trên, Hình 4.24: sắc ký đồ các mẫu HP từ 1 đến 4 xếp từ dưới lên trên,
Các hình 4.25, 4.26, 4.27, 4.28: các mẫu xếp từ dưới lên trên lần lượt là mẫu HP1 đến HP4, mẫu CG 1 đến CGB6, mẫu CGV1 đến CGV6.
Header Page 128 of 148.
Hình 4.22. Sắc ký đồ các mẫu thân rễ củ gấu ở bước sóng 275 nm.
Hình 4.23. Sắc ký đồ các mẫu thân rễ củ gấu biển ở bước sóng 275 nm.
Hình 4.24. Sắc ký đồ các mẫu dược iệu Hương phụ ở bước sóng 275 nm.
HP1 HP2
HP3 HP4 CGB1
CGB6 CGV1
CGV6
CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGV2
CGV3 CGV4 CGV5
- 117-
Hình 4.25. Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu ở bước sóng 275 nm.
Hình 4.26. Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu ở bước sóng 230 nm.
Hình 4.27. Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu ở bước sóng 290 nm.
Header Page 130 of 148.
Hình 4.28. Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu ở bước sóng 320 nm.
Trên cơ sở sắc ký đồ tại bước sóng 275 nm, 32 píc chính đã được lựa chọn làm các píc đặc trưng cho nhận dạng dấu vân tay sắc ký. Thời gian lưu và diện tích các píc đƣợc liệt kê trong các bảng tại phụ lục 20, 21. Các píc đƣợc nhận dạng bằng tín hiệu phổ khối (phụ lục 22). Trong số 32 píc này, có 12 píc với thời gian lưu như trong bảng 4.21 đã đƣợc định danh nhờ các chất chỉ thị là các chất sạch đã phân lập đƣợc. Đây là các chất đƣợc quan tâm nhất có phổ UV và/hoặc phổ MS rõ ràng, có tín hiệu xuất hiện trên sắc đồ. Các chất khác có tín hiệu rất nhỏ nên không đƣa vào bảng danh sách này.
Bảng 4.21. Danh sách các chất chỉ thị sử dụng trong nghiên cứu sắc ký dấu vân tay.
STT Thời gian ƣu
(phút) Tên chất Ký hiệu
1 12,67 (+)-Catechin CR2-CS5
2 14,71 ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane CR1-CS4
3 15,90 (+)-Lyoniresinol 3a-O--D-glucoside CR15
4 18,21 Piceatannol CR7-CS8
5 18,89 trans-Scirpusin B CR10-CS11
6 20,13 Resveratrol và
trans-Scirpusin A
CR8-CS9, CR9-CS10
7 21,97 Eriodictyol CR3-CS6
8 22,81 Rengasin CS2
9 23,11 7,4-dihydroxy-5,3-dimethoxyflavone CR5
10 24,27 Luteolin CR4-CS7
11 27,12 (S)-5,5,7-trihydroxy-2,4-dimethoxy-6-
methylflavanone CS1
12 34,83 -Mangostin CS3
- 119-
Trong khuôn khổ luận án, việc nghiên cứu sắc ký dấu vân tay tập trung vào hai đối tƣợng là thân rễ của củ gấu và củ gấu biển do xuất xứ của mẫu cũng nhƣ việc sơ chế, xử lý mẫu hoàn toàn đƣợc kiểm soát theo các điều kiện đã đƣợc đƣa ra trong chương 3 phần Thực nghiệm. Đối với mẫu dược liệu Hương phụ mua tại các hiệu thuốc Đông y, đây là các dƣợc liệu đã đƣợc chế biến nhƣng không rõ nguồn gốc, xuất xứ. Quá trình chế biến có thể làm biến đổi thành phần hóa học của dƣợc liệu dẫn đến dấu vân tay sắc ký có thể bị thay đổi. Tuy nhiên luận án vẫn đƣa ra một số đánh giá trên cơ sở các số liệu và kết quả thu được về các mẫu dược liệu Hương phụ đã thu mua để từ đó có các định hướng nghiên cứu tiếp theo.
Việc xem xét đánh giá tín hiệu diện tích các píc nghiên cứu dấu vân tay sắc ký tại bước sóng 275 nm cho một số nhận xét như sau:
- Píc ở thời gian lưu 1,44 phút có diện tích lớn đối với các mẫu CGV và mẫu CGB2 (mọc trên đất), với các mẫu CGB còn lại thì diện tích này nhỏ và đặc biệt là mẫu HP thì diện tích này rất nhỏ.
Hình 4.29. Diện tích píc tại RT 1,44 phút
- Nhóm mẫu CGV có diện tích các píc ở thời gian lưu 10,08; 20;42; 22,82 và 31,53 phút lớn hơn các mẫu thuộc nhóm CGB và HP, tuy nhiên các píc này chiếm tỷ trọng nhỏ trong sắc ký đồ.
Hình 4.30. Diện tích píc tại RT 10,08 phút Hình 4.31. Diện tích píc tại RT 20,42 phút
0 200 400 600 800
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4
0 50 100 150
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4 0
20 40 60 80 100 120
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4
Header Page 132 of 148.
Hình 4.32. Diện tích píc tại RT 22,82 phút Hình 4.33. Diện tích píc tại RT 31,53 phút - Trong khi đó nhóm mẫu là CGB và HP có diện tích các píc ở thời gian lưu 12,04;
12,67; 18,21; 18,89 phút lớn hơn hẳn các mẫu thuộc nhóm CGV mà đây lại là các píc có tỷ trọng lớn trong sắc ký đồ. Trong đó có 3 píc có thời gian lưu 12,67; 18,21; 18,89 phút đã đƣợc định danh lần lƣợt là (+)-catechin, piceatannol, trans-scirpusin B.
Hình 4.34. Diện tích píc tại RT 12,04 phút Hình 4.35. Diện tích píc tại RT 12,67 phút
Hình 4.36. Diện tích píc tại RT 18,21 phút Hình 4.37. Diện tích píc tại RT 18,89 phút - Nhóm mẫu HP có diện tích píc ở thời gian lưu 8,98 phút lớn hơn các mẫu thuộc nhóm CGV và CGB.
Hình 4.38. Diện tích píc tại RT 8,98 phút
0 20 40 60 80 100
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4 0
50 100 150 200
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4
0 200 400 600 800 1000 1200
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4 0
200 400 600 800 1000 1200
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4
0 100 200 300 400 500
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4 0
200 400 600 800 1000
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4
0 50 100 150 200 250 300
CGV1 CGV2 CGV3 CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 CGB3 CGB4 CGB5 CGB6 HP1 HP2 HP3 HP4
- 121-
Các kết quả cho thấy trong vùng sắc ký đồ từ 8 đến 20 phút, các píc có sự khác biệt giữa mẫu thân rễ củ gấu và củ gấu biển, vùng sắc ký đồ từ 30 đến 35 phút các píc xuất hiện giống nhau. Điều này có thể thấy rõ trên sắc đồ của các mẫu thân rễ củ gấu và củ gấu biển thu thập tại cùng một địa điểm tại Thái Bình và tại Ninh Bình. Trong vùng sắc ký đồ từ 8 đến 20 phút các píc ở RT 12,04 và 12,67 có tín hiệu lớn với mẫu củ gấu biển, còn mẫu củ gấu thì các píc này rất nhỏ, sắc ký đồ mẫu củ gấu có đường nền thấp hơn. Vùng sắc ký đồ từ 30 đến 35 phút các píc của mẫu củ gấu và củ gấu biển giống nhau.
Hình 4.39. Sắc đồ mẫu củ gấu v củ gấu biển thu thập tại Thái Bình.
Hình 4.40. Sắc đồ mẫu củ gấu v củ gấu biển thu thập tại Ninh Bình.
Header Page 134 of 148.
Trên cơ sở số liệu về thời gian lưu và tín hiệu của các píc (ở đây là diện tích píc), luận án sử dụng thuật toán đánh giá mức độ tương đồng của các sắc ký đồ theo công thức sau [62, 167, 55]:
Trong đó:
S: độ tương đồng giữa mẫu x và mẫu y, S có giá trị từ 0 ≤ S ≤ 1. Khi S càng gần 1 thì hai mẫu càng giống nhau.
xi: diện tích của píc thứ i trong mẫu x; yi: diện tích của píc thứ i trong mẫu y.
n: số lƣợng píc tham gia quá trình đánh giá.
Tiến hành đánh giá độ tương đồng theo hai cách:
- Cách 1: So sánh độ tương đồng của hai mẫu CGV1 và CGB1 với các mẫu nghiên cứu. Kết quả thể hiện trong bảng 4.22.
Bảng 4.22. Hệ số tương đồng của các mẫu so với mẫu CGV1, CGB1.
Mẫu Hệ số tương đồng so với mẫu CGV1
Hệ số tương đồng so với mẫu CGB1
CGV1 1 0,2996
CGV2 0,6691 0,5113
CGV3 0,8682 0,5192
CGV4 0,3234 0,4963
CGV5 0,7742 0,5191
CGV6 0,8907 0,4857
CGB1 0,2996 1
CGB2 0,6754 0,7077
CGB3 0,1609 0,9424
CGB4 0,2077 0,9479
CGB5 0,3783 0,9903
CGB6 0,2959 0,9677
HP1 0,3727 0,6556
HP2 0,3658 0,6943
HP3 0,2972 0,8893
HP4 0,3685 0,6157
Kết quả cho thấy: mẫu CGV1 có độ tương đồng không cao với các mẫu CGV khác, hệ số tương đồng từ 0,3234 đến 0,8907.
Mẫu CG 1 có độ tương đồng cao với các mẫu CGB khác (hệ số tương đồng từ 0,9424 đến 0,9903) trừ mẫu CGB2 (hệ số tương đồng là 0,7077). Điều này có thể
- 123-
đƣợc lý giải do mẫu CGB2 là mẫu củ gấu biển nhƣng mọc trên đất trong khi các mẫu CG khác đều mọc trên cát. Trên sắc ký đồ có thể thấy mẫu CGB2 có diện tích píc ở thời gian lưu 1,44 phút cao hơn hẳn mẫu CGB1 còn ở các phần khác của sắc ký đồ thì có ít píc hơn. Điều này lý giải hệ số tương đồng của mẫu CGB2 thấp hơn so với các mẫu CGB khác.
Các mẫu HP có độ tương đồng với mẫu CG 1 cao hơn với mẫu CGV1 (hệ số tương đồng từ 0,6157 đến 0,8893 so với từ 0,2972 đến 0,3727). Điều này cũng là một minh chứng cho thấy các dược liệu Hương phụ được chế biến từ củ gấu biển.
- Cách 2: Để đánh giá mang tính đại diện, mẫu trung bình cộng đƣợc tạo ra bằng cách lấy trung bình cộng giá trị diện tích của các píc trong các mẫu cùng nhóm rồi so sánh mẫu trung bình cộng này với các mẫu khác để đánh giá. Kết quả thể hiện trong bảng 4.23.
Bảng 4.23. Hệ số tương đồng của các mẫu so với mẫu CGV, CGB trung bình cộng.
Mẫu Hệ số tương đồng với CGV
Hệ số tương đồng với CGB
CGV1 0,8496 0,3719
CGV2 0,8541 0,5574
CGV3 0,8776 0,5311
CGV4 0,7078 0,5690
CGV5 0,9658 0,6120
CGV6 0,9277 0,5714
CGB1 0,5673 0,9817
CGB2 0,8642 0,7860
CGB3 0,4818 0,9639
CGB4 0,5058 0,9722
CGB5 0,6297 0,9861
CGB6 0,5179 0,9700
HP1 0,6432 0,6484
HP2 0,6472 0,7035
HP3 0,5522 0,8831
HP4 0,6257 0,6043
Theo đó: mẫu trung bình cộng CGV có sự khác nhau nhiều trong nhóm mẫu thân rễ củ gấu với hệ số tương đồng dao động từ 0,7078 đến 0,9658. Mẫu trung bình cộng CG có độ tương đồng với các mẫu thân rễ củ gấu biển khác chỉ từ 0,7860 đến Header Page 136 of 148.
0,9861. Nếu không tính đến mẫu CGB2 mọc trên đất thì độ tương đồng chỉ dao động trong khoảng 0,9639 đến 0,9861 tức là các mẫu CGB rất giống nhau.
Số liệu theo cách so sánh này cũng cho thấy sự khác biệt giữa các mẫu CGV lớn hơn so với các mẫu CGB. Sự khác nhau về mặt hóa học của thân rễ củ gấu có thể do điều kiện thổ nhưỡng nơi củ gấu mọc khác nhau. Do đó dược liệu Hương phụ chế biến từ củ gấu sẽ có chất lƣợng không đồng đều so với chế biến từ củ gấu biển.
Từ các kết quả phân tích thành phần đánh giá độ tương đồng kết hợp với các sắc ký đồ thu được cho thấy: độ tương đồng giữa hai loài củ gấu và củ gấu biển có sự giống và khác nhau ở từng khoảng thời gian lưu khác nhau. Cụ thể với các mẫu thu hái ở Thái Bình và Ninh Bình, vùng sắc ký dấu vân tay đã đƣợc đề xuất nhƣ ở hình 4.39, 4.40 cho thấy sự giống và khác nhau trong các vùng khi đánh giá độ tương đồng.
Cụ thể, độ tương đồng của sắc ký đồ trong vùng 30 đến 35 phút (vùng giống nhau) của 2 mẫu ở Thái Bình là 0,9780, Ninh Bình là 0,9733. Độ tương đồng của sắc ký đồ trong vùng 8 đến 20 phút (vùng khác nhau) của 2 mẫu ở Thái Bình là 0,7171, Ninh Bình là 0,6881. Như vậy với phương pháp HPLC đã thiết lập có thể cho phép phân biệt hai loài củ gấu và củ gấu biển dựa vào vùng sắc ký đồ trong khoảng thời gian lưu từ 8 đến 20 phút ở bước sóng 275 nm.
Những kết quả thu đƣợc ở trên cho thấy việc áp dụng thuật toán đánh giá độ tương đồng của sắc ký đồ sử dụng trong luận án là phù hợp với điều kiện nghiên cứu của Việt Nam hiện nay. Phương pháp này cũng đã được áp dụng ở một số nơi khác phục vụ công tác phân tích sắc ký dấu vân tay [62, 103, 167].
4.4. Nghiên cứu định lượng một số thành phần chính bằng HPLC 4.4.1. Chuẩn bị chất chỉ thị v thiết ập đường chuẩn định ượng
Một dãy các chất chỉ thị có nồng độ xác định đƣợc pha để tạo dung dịch gốc (A1). Từ dung dịch gốc này tiến hành pha một dãy các nồng độ khác nhau (từ B1 đến 5) để tiến hành xây dựng đường chuẩn. Kết quả khảo sát cho thấy các hợp chất CR2-CS5, CR1-CS4, CR15 phù hợp định lượng ở bước sóng 230 nm, hợp chất CR7- CS8 phù hợp định lượng ở bước sóng 320 nm, các hợp chất CR10-CS11, CR3-CS6, CS1 phù hợp định lượng ở bước sóng 290 nm (phổ UV của các chất phân tích định lượng được trình bày ở phụ lục 23). Do vậy, phương pháp phân tích được xác lập để định lượng đồng thời các hợp chất tại 3 bước sóng như trên. Trên cơ sở 3 bước sóng đã chọn, tiến hành xác định giới hạn phát hiện (LOD) và xây dựng đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ giữa diện tích píc và nồng độ các chất.
- 125-
LOD đƣợc định nghĩa là nồng độ tối thiểu của chất cần phân tích mà ở đó píc có tín hiệu bằng 3 lần nhiễu đường nền (S/N=3). Đây là một thông số đặc trưng cho độ nhạy của phương pháp. Chất nào nhạy hơn sẽ có giới hạn phát hiện nhỏ. LOD thường được xác định bằng hai cách sau:
- Phương pháp trực tiếp:
* Dùng chính chất phân tích tiến hành pha loãng tới nồng độ nhỏ nhất mà vẫn thu được tín hiệu lớn gấp 3 lần tín hiệu nhiễu đường nền.
Do việc xác định theo cách trực tiếp sẽ khó thực hiện đƣợc vì độ nhạy của từng chất không giống nhau nên phương pháp tính toán được sử dụng.
- Phương pháp tính toán:
Trong đó : C là nồng độ các chất
Sn: là diện tích nhiễu; Ss: là diện tích píc của từng chất
Phương pháp tính toán dựa trên việc phân tích lặp lại các mẫu tại nồng độ biết trước cùng với việc tính toán diện tích nhiễu và diện tích píc của các chất sẽ cho giá trị LOD. Giá trị giới hạn định lƣợng (LOQ) sẽ đƣợc tính là giá trị gấp 3 lần LOD.
Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và xây dựng đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ giữa diện tích píc và nồng độ các chất cho thấy hệ số hồi quy tuyến tính r2 của đường chuẩn của các chất phân tích đều lớn hơn 0,995. Giới hạn phát hiện (LOD) của các chất nằm trong khoảng từ 0,2 - 0,6 μg/ml. Độ lặp lại nằm trong khoảng 0,5 – 1,2%. Phương pháp định lượng này có thể được áp dụng để đánh giá hàm lượng một số chất chính trong mẫu thân rễ củ gấu và thân rễ củ gấu biển. Các thông số của phương pháp định lượng được trình bày trong bảng 4.24.
Bảng 4.24. Các thông số phân tích định ƣợng của một số chất bằng HPLC
Chất Đường chuẩn r2 LOD
(àg/ml)
Dải nồng độ (àg/ml)
λ (nm)
RT (phút) CR2-CS5 y= 12,74x - 42,43 0,995 0,6 5 – 100 230 12,67 CR1-CS4 y= 17,72x - 21,82 0,998 0,5 5 – 100 230 14,71 CR15 y= 10,35x - 48,01 0,997 0,6 10 – 200 230 15,90 CR7-CS8 y= 10,82x - 13,01 0,999 0,6 5 – 100 320 18,21 CR10-CS11 y= 21,33x - 17,17 0,998 0,2 5 – 100 290 18,89 CR3-CS6 y= 9,862x - 2,144 0,996 0,2 5 – 100 290 21,97
CS1 y= 28,79x - 132,3 0,995 0,2 5 – 100 290 27,12
Header Page 138 of 148.
4.4.2. Đánh giá h m ƣợng của các chất trong mẫu
Tiến hành phân tích mẫu dịch chiết thân rễ củ gấu, thân rễ củ gấu biển và dƣợc liệu Hương phụ theo các điều kiện đã được thiết lập cho thấy khả năng phân tách tốt các hợp chất ở các bước sóng và điều kiện sắc ký đã chọn. Tại các bước sóng 230, 290 và 320 nm, tín hiệu píc của các chất thể hiện rõ ở dịch chiết của các mẫu. Do vậy có thể kết luận phương pháp định lượng đã xây dựng hoàn toàn phù hợp để đánh giá các chất chính trong các mẫu thân rễ củ gấu và thân rễ củ gấu biển, phục vụ cho công tác đánh giá dược liệu. Từ phương pháp đã thiết lập, tiến hành đánh giá hàm lượng các chất trong mẫu phân tích. Kết quả đƣợc trình bày trong bảng 4.25.
Bảng 4.25. H m ƣợng cỏc chất (àg/g) trong mẫu nghiờn cứu.
Chất Mẫu
CR2- CS5
CR1- CS4
CR15 CR7- CS8
CR10- CS11
CR3- CS6
CS1
CGV1 180,4 13,06 28,61 141,69 136,65 - 23,00
CGV2 519,6 1,32 29,99 49,18 47,52 4,46 37,45
CGV3 572,1 24,80 35,74 587,53 318,27 8,31 38,01
CGV4 450,3 12,93 100,23 19,23 15,79 - 113,70
CGV5 180,4 13,06 28,61 88,73 85,78 - 23,00
CGV6 438,9 6,50 23,18 54,45 49,45 - 32,12
CGB1 2.396,7 85,99 348,96 856,29 260,61 54,82 98,08 CGB2 1.385,7 79,31 106,19 322,75 219,77 29,90 58,72 CGB3 3.623,8 170,60 436,65 178,01 109,64 4,88 74,99
CGB4 1.137,9 78,80 64,90 141,14 100,36 0,62 30,15
CGB5 2.015,1 98,36 177,71 605,46 264,22 41,64 78,82 CGB6 3.230,4 105,68 139,08 648,90 266,93 36,13 82,19 HP1 1.154,2 61,64 131,26 373,16 507,35 59,18 104,70 HP2 1.310,8 105,30 121,84 691,97 357,28 74,24 69,75 HP3 3.348,2 261,64 136,31 1.372,56 376,92 58,35 21,04
HP4 506,2 58,11 71,29 654,45 331,30 61,99 23,94
Ghi chú: tên các chất được định lượng như sau:
CR2-CS5: (+)-catechin
CR1-CS4: ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane CR15: (+)-lyoniresinol 3a-O--D-glucoside CR7-CS8: piceatannol
CR10-CS11: trans-scirpusin B CR3-CS6: eriodictyol
CS1: (S)-5,5,7-trihydroxy-2,4-dimethoxy-6-methylflavanone
- 127-
Các kết quả phân tích định lượng trên HPLC có sự tương đồng với kết quả phân tích trên HPTLC. Cụ thể là với chất chỉ thị piceatannol, kết quả cũng cho thấy hàm lƣợng piceatannol trong cỏc mẫu HP là cao nhất (từ 373 đến 1.372 àg/g) sau đú đến cỏc mẫu CGB1,2,5,6 (trờn 300 àg/g), CGB3,4 (khoảng 150 àg/g) cỏc mẫu CGV đều thấp (dưới 150 àg/g) chỉ trừ mẫu CGV3 (587 àg/g). Mẫu CGV3 là mẫu cú cường độ ở vết Rf=0,22 trên HPTLC cao hơn nhiều các mẫu CGV khác và xấp xỉ các mẫu CGB, HP. Kết quả định lƣợng trên HPLC rõ ràng thể hiện sự ƣu việt hơn so với HPTLC và có độ nhạy hơn tốt hơn (nhƣ đối với mẫu có hàm lƣợng nhỏ nhƣ của CGV4 là 19 àg/g vẫn thể hiện kết quả trong khi khụng thấy tớn hiệu trờn HPTLC).
Kết quả phân tích định lƣợng HPLC cho thấy hầu hết sắc ký đồ của 2 mẫu thân rễ củ gấu và thân rễ củ gấu biển đều có các píc tương tự nhau chứng tỏ thành phần hoá học của 2 loài này có nét tương đồng và chỉ khác nhau về hàm lượng. Điều này có thể giải thích trong Đông y cả hai loài đều đƣợc sử dụng với cùng công dụng.
Mặt khác các kết quả cho thấy hàm lƣợng của hầu hết các chất ở mẫu thân rễ củ gấu biển cao hơn mẫu thân rễ củ gấu. Cụ thể với nhóm chất flavan-3-ol nhƣ (+)- catechin, ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane, hàm lƣợng các hợp chất này trong thân rễ củ gấu biển cao trung bình tương ứng gấp 5,8 và 8,6 lần so với thân rễ củ gấu, trong mẫu dược liệu Hương phụ cao gấp 4,0 và 10,2 lần so với thân rễ củ gấu.
Với nhóm chất flavanone nhƣ eriodictyol, (S)-5,5,7-trihydroxy-2,4- dimethoxy-6-methylflavanone, hàm lƣợng các hợp chất này trong thân rễ củ gấu biển cao trung bình tương ứng gấp 4,3 và 1,6 lần so với thân rễ củ gấu, trong mẫu dược liệu Hương phụ cao gấp 9,9 và 1,2 lần so với thân rễ củ gấu.
Với nhóm chất stilbenoid nhƣ piceatannol, trans-scirpusin , hàm lƣợng các hợp chất này trong thân rễ củ gấu biển cao trung bình tương ứng gấp 2,9 và 1,8 lần so với thân rễ củ gấu, trong mẫu dược liệu Hương phụ cao gấp 4,9 và 3,6 lần so với thân rễ củ gấu.
Với hợp chất lignan nhƣ (+)-lyoniresinol 3a-O--D-glucoside, hàm lƣợng hợp chất này trong thân rễ củ gấu biển cao trung bình gấp 5,1 lần so với thân rễ củ gấu, trong mẫu dược liệu Hương phụ cao gấp 2,8 lần so với thân rễ củ gấu.
Điều đó cũng minh chứng nhận định việc “Sử dụng thân rễ củ gấu biển để chữa các bệnh như vị Hương phụ lại có tác dụng rõ rệt hơn” [15].
Ngoài ra kết quả đánh giá hàm lƣợng cho thấy một số chất nhƣ (+)-catechin (CR2), piceatannol (CR7) có hàm lƣợng khá lớn trong các mẫu thân rễ củ gấu, thân rễ củ gấu biển và dược liệu Hương phụ. Hai hợp chất này đã được chứng minh có nhiều hoạt tính sinh học quý nhƣ kháng ung thƣ, kháng viêm, kháng khuẩn…[56, 110]. Do Header Page 140 of 148.