Kỹ thuật sinh sản nhân tạo cho thụ tinh khô được áp dụng cho cá tra đẻ, có hiệu quả tốt và kinh tế nhất cho loại cá này.
4.1. Các loại kích th ích tô
Các loại kích thích tô" thường dùng cho cá tra sinh sản nhân tạo là não thùy của cá nước ngọt, LH- RHa (Luteotropin Hormon Releasing Hormon analog), HCG (Human Chorigonic Gonadotropin) và hiện nay có nơi đang dùng 17,20P là 17a-Hydroxy -20p-
dihydroxy -4-pregnen -3-one (hormon steroid tự nhiên do nang trứng tiế t ra).
- HCG (Human Chorigonic Gonadotropin) là hormon sinh dục có nguồn gốc động vật còn gọi là kích dục tô" nhau th ai có tác dụng chuyển hóa buồng trứng và gây rụng trứng trên rấ t nhiều loài cá nước ngọt. Hiện nay, thuốc kích dục tô" này đang sử dụng ở Việt Nam do Trung Quốc sản xuất, được đóng chai thủy tin h chứa 5.000 UI hoặc 10.000 UI (đơn vị tín h quốc tê' U nit International).
- LRH-A (LH-Rha) (Luteotropin Hormon Releasing Hormon analog) là hormon tổng hợp có tác dụng chuyển hóa buồng trứng và đồng thời gián tiếp gây rụng trứng, khi sử dụng nên dùng kèm viên DOM (Domperidon). Thuốc này do Trung Quốc sản xuất dạng bột chứa trong ông thủy tinh với 200, 500 và
1.000 microgram.
- 17,20P là 17a-Hydroxy -20p-dihydroxy -4- pregnen -3-one, đây là hormon steroid tự nhiên do nang trứng tiế t ra có khả năng kích thích gây chín noãn bào cho nhiều cho các loài cá nước ngọt, có khả năng kích thích trứng chín trước khi cá th àn h thục hoàn toàn và có phản ứng thuận lợi vói kích dục tố.
Các kích thích tô' này phần lớn được sản xuất ở Trung Quốc, không ghi hạn sử dụng rõ ràng, khi dùng nên thử nghiệm trước trên một vài con cá sặc, cá chép hay một hai con cá tra dể xác định hiệu lực của thuốc,
để không sử dụng thuốc giả thuốc quá hạn khi cho cá tra sinh sản số lượng lớn không có kết quả bị thiệt hại cá bố mẹ.
4.1.1. Kỹ thuật lấy não thùy và bảo quản
Não thùy của cá dùng kích thích cho cá đẻ được dùng từ nhiều năm nay.
Những trại nuôi thủy sản có thể tự lấy não thùy từ cá chép, cá trê đã thành thục sinh dục để sử dụng.
Não thùy của cá chép nằm ngay dưới não bộ ở buồng não thứ ba.
Dùng dao vạt đầu cá dể mở hộp sọ ở những con cá còn sống hoặc mới chết, trước khi vạt đầu cá cần cắt đứt mang cá để máu thoát ra không ứ đọng trong hộp sọ che khuất não thùy.
Dùng móc tai nâng não bộ cá từ dây thần kinh khứu giác ở phía trước là thấy não thùy nằm ngay dưới não bộ, bứt các dây liên kết với não thùy và múc não thùy ra đặt não thùy trên mu bàn tay và móc làm sạch các mảnh mô liên kết và máu.
Não thùy nguyên vẹn to bằng hạt tấm có hình cầu hềặc hình bầu dục, cá nặng 1 kg não thùy nặng 1 mg, có thể dùng ngay não thùy tươi tiêm cho cá sinh sản nhân tạo.
Có thể tích trữ não thùy để dùng trong mùa vụ cho cá đẻ và những năm sau.
Não thùy sau khi làm sạch cho vào lọ thủy tin h có aceton nguyên chất để khử nước và các mô mỡ của não thùy, ngâm 1 ngày rồi bỏ acetori cũ và cho aceton mới vào lọ, làm vài lần cho đến khi aceton không biến màu.
Ngâm aceton có thể tích nhiều gấp 20 lần thể tích của não thùy cần bảo quản, đậy kín nút lọ và để ở nơi thoáng m át trá n h ánh sáng trực tiếp của m ặt trời, p h át hiện lọ nào cạn aceton thì châm thêm hoặc thay aceton mới. Có th ể dùng cồn tuyệt đốì hoặc cồn 96°
thay aceton, với cách bảo quản này não thùy giữ nguyên hoạt tín h trong nhiều năm.
Não thùy cá th àn h thục tốt hơn não thùy cá chưa th àn h thục, não thùy lấy từ cá có tuyến sinh dục thoái hóa không có hoạt tính.
Não thùy cá cái có hoạt tín h kích dục gấp 2-2,5 lần não thùy cá đực cùng loài và có sự th àn h thục tương ứng não thùy cá chép, cá trê m ạnh gấp 1,5-2 lần não thùy cá mè, cá trắm .
Não thùy cá rô phi không có tác dụng.
4.1.2. Cách pha và tiêm thuốc cho cá - Não thùy
Dùng móc tai inox lấy não thùy trong lọ thủy tin h ra, đặt lên giấy sạch để cho bốc h ế t hơi aceton rồi cho vào côi sứ hay chén sành với sô lượng cần nghiền. Cho vào cối vài giọt nước muối sinh lý NaCl 0,7%, một tay giữ côi một tay cầm chày, ấn m ạnh đầu
chày sát đáy cối rồi quay chày theo đường tròn khoảng mươi vòng, não thùy nát sệt, cho nước muối vào cối và tiếp tục nghiền thêm một lần nữa. Dùng bơm tiêm xịt mạnh nước muôi để rửa đầu chày, nước muôi dùng tiêm cho mỗi kg cá tra là 1-2 ml.
- Thuốc kích thích HCG, LH-RHa và 17,20P.
Dùng bơm tiêm bơm nước muối vào lọ đựng thuốc và lắc nhẹ cho tan đều. Khi cần bơm nhiều dung dịch vào lọ có nút cao su nên cắm thêm một cây kim xuyên qua nút để làm lôi thoát cho không khí.
Nếu dùng hỗn hợp HCG với não thùy cá thì pha HCG trước rồi dùng dung dịch HCG thay nước muôi để nghiền tan não thùy trong cối, sau khi dùng hết thuốc hoặc dung dịch não thùy có thể lấy nước muối tráng cối và các lọ chứa HCG. Nước tráng này có thể thay cho nước muối dùng pha thuốc tiêm cho cá tra đực.
- Tiêm thuốc
Cá tra có thể tiêm thuốc kích thích ở gốc vây ngực, ở cơ lưng hoặc trực tiếp vào xoang bụng buồng trứng.
Khi tiêm, dặt kim tiêm nghiêng một góc 45° so với th ân cá và sâu khoảng 1 cm, bơm tiêm nhanh và rút kim ra từ từ để tránh thuốc tràn ra. Vị trí tiêm nên khác nhau mỗi lần.
Để cá nằm trong vợt lưới hoặc trong giai vèo lưới kéo cao hơn m ặt nước trong bể chứa, giữ nguyên cá không cho vùng vẫy có thể làm hư trứng, tiêm thuốc
nhanh thao tác gọn cá ít vùng vẫy và trả cá trở lại ngay trong vèo hay bể chứa sau khi tiêm xong.
4.1.3. S ử dụng và liều lượng kích thích tố
Khác với các loài cá nước ngọt khác, để giúp cá tra cái th àn h thục sinh dục chuyển sang sinh sản phải tiêm 4-5 liều thuốc kích thích. Đầu mùa và cuối mùa sinh sản có th ể tiêm 5 liều gồm 3 liều dẫn, 1 liều sơ bộ và 1 liều quyết định; trong mùa sinh sản có thể tiêm 3-4 liều gồm 1-2 liều dẫn, 1 liều sơ bộ và 1 liều quyết định.
Cá đực chỉ tiêm 1 liều cùng lúc với liều quyết định của cá cái.
Thời gian giữa các liều là thời gian thuốc có hiệu ứng đối với cá tra cái thường là 8-12 giờ, nên thời gian giữa các liều dẫn, liều sơ bộ và liều quyết định cách nhau 8-12 giờ.
Đối với cá tra nên dùng não thùy cá hoặc HCG cho liều dẫn và liều sơ bộ, không nên dùng LH-RHa cho liều sơ bộ vì có thể gây ra sự rụng trứng cục bộ trong khi đa số trứng trong buồng trứng chưa chuyển hóa sang giai đoạn chín sẽ làm kết quả sinh sản thấp.
Sử dụng các thuốc kích thích (KTSS) và kích dục tố (KDT) với các liều như sau:
L o ại c á
L o ạ i KDT v à K TSS
L iề u d ẫ n v à liề u sơ b ộ / k g cá
L iề u q u y ế t đ ịn h / kg c á Cá cái HCG Liều dẫn I: 300-500 UI
Liều dẫn II: 500-700 UI Liều sơ bộ: 500-800 UI
2.500-5.000 UI
Não thùy 0,5 mg ( 1/2 não thùy) 5-7 mg (2Vế-3Vấ cái não thùy)
LH-Rha Không dùng 100-150gg/kg
Phôi hợp HCG 300-800 UI hoặc não thùy 0,5 mg (1/2 não thùy)
HCG 1.000 UI + 2 mg não thùy (2 cái não thùy)
Cá đực HCG 300 UI
Não thùy 0,5 mg (1/2 não
thùy)
Phối hợp Bằng 1/3 -1/2
liều phối hợp của cá cái
Thời gian hiệu ứng thuốc hay rụng trứng là sau khi tiêm liều quyết định từ 8-12 giờ.
Hiện nay đã có một số nghiên cứu dùng chất 17,20P trong liều quyết dịnh cho cá tra sinh sản, cho kết quả tốt rấ t khả quan.
Dùng chất 17,20P trong liều quyết định sẽ bỏ các lần tiêm liều dẫn, rút ngắn được chu trình kích thích cho cá tra sinh sản phải kéo dài nhiều ngày giảm nguy cơ rủi ro và tử vong cho cá cái khi bị tiêm các liều dẫn. Chi phí thời gian và lao động giảm trong khi chi phí về chất kích thích sinh sản trong trường hợp
dùng liều tôi ưu vẫn không tăng so với cách dùng chất kích thích phổ biến cho loài cá tra.
Khi dùng chất 17,20 p trong liều quyết định cho cá tra cái sinh sản là bỏ không tiêm các liều dẫn, chỉ tiêm 1 liều sơ bộ và 1 liều quyết định.
Tiêm liều sơ bộ là 800 IƯ/kg và liều quyết định có thể là 5 mg 17,20P kết hợp vởi 0,6mg não thùy cá chép /kg cá hoặc là 5 mg 17,20P kêt hợp với 500 UI HCG/ kg cá.
Thời gian tiêm giữa liều sơ bộ với liều quyết định là 8-10 giờ và thời gian hiệu ứng rụng trứng sau khi tiêm liều quyết định là 8-12 giờ, kết quả tỷ lệ rụng trứng róc là 100%, tỷ lệ thụ tinh là 74-80% ± 7- 10 và tỷ lệ nở là 90-93%± 4.
4.2. T uyển chọn c á cá i v à c á đực cho sin h sả n Cá tr a không có cơ quan sinh dục phụ hay còn gọi là sinh dục thứ cấp, nên khi cá chưa th àn h thục sinh sản nhìn hìn h dạng bên ngoài rấ t khó phân biệt được cá đực cá cái.
Khi cá tra ở vào thời kỳ th àn h thục, ở cá đực tuyến sinh dục phát triển gọi là buồng tinh hay tinh sào, ở cá cái tuyến sinh dục phát triển gọi là buồng trứng hay noãn sào.
Từ giai đoạn II của thời kỳ th àn h thục sinh sản, có th ể b ắt đầu phân biệt được cá đực cá cái nhưng
chưa rõ ràng vì tuyến sinh dục mới phát triển, màu sắc chưa khác nhau nhiều.
0 các giai đoạn sau, buồng trứng của cá tra cái tăng trưởng lớn lên về kích thước và hạt trứng có màu vàng, tinh sào của cá đực phát triển có hình phân nhánh từ màu hồng chuyển dần sang màu trắng sữa.
Nhờ sự phát triển tăng trưởng của buồng trứng và tinh sào này, có thể tuvển chọn được cá tra đực cái thành thục sinh dục cho sinh sản, kiểm tra từng con.
Cá bô' mẹ cho đẻ phải khỏe mạnh, màu sắc cá sáng bóng nhiều nhớt, chọn từ những con đã đtrợc đánh dấu thôhg kê ghi chép đã thành thục phát triển tốt ở lần kiểm tra trước.
Chọn cá cái, nhìn bên ngoài bụng cá to phình ra hai bên hông, dùng tay sờ nắn bụng mềm, lỗ sinh dục cương có màu hồng; lấy trứng ra kiểm tra, nhìn bằng m ắt thường thấy các hạt trứng đều, rời ra và căng tròn, màu vàng nhạt hoặc trắng nhạt, nhìn trên kính lúp đường kính trứng đo được 0,9-1,1 mm, có mạch máu phân bô' ít hoặc đã bị đứt đoạn và có trên 70% số trứng có nhân đã phân cực.
Cá tra đực có lỗ niệu sinh dục hơi lồi, khi vuốt nhẹ hai bên từ sườn bụng đến hậu môn thì thấy tính dịch chảy ra có màu trắng như sữa, chọn những con cá đực có tinh đặc cho tham gia sinh sản.
Những con cá đực thành thục tốt có tính hung hăng, mỗi khi bị chạm vào cá đực thường quẫy mạnh.
4.3. Thực h iện cho sin h sả n n h ăn tạo 4.3.1. Vệ sinh khử trùng dụng cụ cho sinh sản
Các dụng cụ cho cá sinh sản nhân tạo cần được chuẩn bị đầy đủ như thuốc kích thích tố, nước muối sinh lý, ống kim tiêm , tô thau nhựa, cối sứ và những dụng cụ khác như bình weys hay bể ấp, khung lưới ấp trứng. Trước khi sử dụng phải khử trùng bằng dung dịch Clorine hay Formol 120 ppm rồi rửa lại bằng nước sạch.
4.3.2. T hụ tinh
- Thời gian hiệu ứng thuốc
Cá tra cái, sau khi tiêm các liều dẫn thuốc kích thích sẽ có hiệu ứng thuốc, tác động đến buồng trứng, buồng trứng phát triể n tăng khối lượng và chuẩn bị chuyển sang giai đoạn sinh sản, quan sát kỹ sẽ thấy bụng cá sẽ lớn thêm ra và bụng cá mềm hơn.
Cân trọng lượng từng cá cái để tín h các liều thuốc kích thích tố tương ứng với trọng lượng từng cá th ể cá, sau mỗi lần tiêm các liều dẫn, liều sơ bộ và liều quyết định, th ả cá vào ngay trong vèo (giai) hay bể chứa chờ thời gian hiệu ứng thuốc. Cá th ả trong vèo ở trong ao hay trong bể đòi hỏi môi trường nước phải sạch và chất lượng được duy trì ổn định, sục khí liên tục oxy hòa tan đầy đủ, nhiệt độ nước 28-30°C, độ pH = 7-8.
Trong điều kiện nhiệt dộ trong nước là 28-30°C, thời gian hiệu ứng thuốc là 8-12 giờ, buồng trứng cá
cái bắt đầu từ từ chuyển sang giai đoạn chín đồng loạt theo các liều thuốc đã tiêm.
Sau khi tiêm liều dẫn thứ hai, chờ thời gian hiệu ứng thuốc kết thúc, tiến hành thăm trứng, nếu trứng cá chuyển sang giữa giai đoạn IV thì tiến hành tiêm liều quyết định cho cá cái và đồng thời tiêm liều cho cá đực.
Trong trường hợp trứng chưa chuyển sang giữa giai đoạn IV thì tiến hành tiêm liều sơ bộ và sau thời gian hiệu ứng thuốc 8-12 giờ là tiêirt liều quyết định cuối cùng.
Sau khi tiêm liều quyết định phải theo dõi xác định đúng thời gian hiệu ứng thuốc để định được thời điểm rụng trứng cho thụ tinh nhân tạo sẽ có kết quả cao. Sau thời điểm rụng trứng đồng loạt, khả năng thụ tinh của trúng giảm dần theo thời gian và sau 1,3-2 giờ là trứng hoàn toàn m ất khả năng thụ tinh.
Trứng cá bắt đầu rụng đồng loạt đã chuyển đến giai đoạn V, thời gian hiệu ứng có thể bị biến động do nhiệt độ, do liều lượng thuốc và còn do một số yếu tố khác như dòng chảy, chỗ nhốt cá., nhưng thời điểm rụng trứng chỉ xê dịch trong khoảng trước và sau hai giờ.
- Vuốt thu trứng
Theo dõi khi cá rụng trứng thì tiến hành khẩn trương vuốt trứng.
Trước khi vuốt trứng, nếu cá lớn trên 10 kg/ con
nên gây mê để cá không dẫy dụa trong khi vuốt trứng.
Dung dịch thuốc gây mê là MS 222 hay Tricane (3- amino benzoic acid ethy ester m ethane sulfonate) với nồng độ 40mg/l trong 3-4 phút, có th ể dùng Phenoxyethanol rẻ tiền để gây mê cho cá, có th ể dùng các loại thuốc cho cá ngủ khi xuất khẩu các loại cá sống ra nước ngoài.
Sau khi gây mê cho cá là thực hiện vuốt trứng ngay, vuốt trứng nên thực hiện hai hay ba người, một người giữ cá bắt cá quấn trong khăn vải cotton, lau khô mình cá và lỗ sinh dục, giữ cá hơi nghiêng và đuôi chúc xuôhg. Một người dùng ngón cái và ngón trỏ của một tay vuốt trứng, vuốt nhẹ dọc theo bụng cá từ phía đầu cá xuống bụng, vuốt từ từ và vuốt nhiều lần cho trứng chảy ra, hứng trứng vào thau nhựa khô sạch. Vuốt cho trứng chảy gọn vào trong chậu khô, không để nước chảy vào trứng. Cá vuốt trứng xong nhanh chóng ngâm trong nước sạch từ 3-4 phút để cá tỉnh lại.
Trường hợp trứng rụng cục bộ hoặc rụng không đồng loạt thì phải vuốt nhiều lần, nếu thấy trứng rụng khó ra hoặc lẫn máu thì ngưng vuốt trứng vì chưa đến thời điểm trứng rụng nên th ả vào trong vèo cho cá tỉnh lại và chờ thêm một thời gian cho thuốc hiệu ứng.
Thu trứng đúng thời điểm rụng đồng loạt là trứng đã chín, kích thước đồng đều đạt độ lớn tối đa 0,9 mm trở lên, tỷ lệ thụ tinh và tỷ lệ sông của trứng sẽ cao, chất lượng cá bột tốt khỏe mạnh.
Vuốt trứng trước thời điểm rụng đồng loạt thì số trứng thu được không đáng kể mà làm chấn thương xây xát cá có thể dẫn đến cá chết sau khi thụ tinh nhân tạo, vuốt trứng sau thời điểm rụng đồng loạt mà vuốt không kịp thu trứng thì khi cá quậy trứng sẽ văng ra ngoài m ất khả năng thụ tinh. Những trứng đã chín nếu bị giữ lâu trong xoang thân hoặc đã vuốt ra nhưng gieo tinh không kịp thời sẽ dẫn đến mất khả năng thụ tinh.
- Vuốt lấy sẹ tinh trùng
Trong khi vuốt trứng nên vuốt tinh dịch của cá đực trực tiếp lên trứng đang vuốt hoặc vuốt vào một tô nhựa. Cá đực được quấn trong khăn vải cotton lau khô sạch phần bụng và lỗ sinh dục, giữ cá hơi nghiêng đuôi chúc xuống, dùng ngón cái và ngón trỏ của tay còn lại vuốt bụng cá, vuốt nhẹ dọc theo bụng cá từ phía đầu cá xuống bụng, vuốt từ từ nhiều lần tinh dịch sẽ chảy ra và hứng thẳng vào tô đã có trứng.
Tinh trùng màu trắng đục vuốt phun ra thành tia nhỏ xuống tô đựng trứng, dùng lông gà trộn đảo 15-20 giây. Khi tinh trùng tiếp xúc với trứng thì cho nước vào từ từ, mỗi lít trứng cho 300 ml nước cất đủ vừa ngập trứng, đảo trộn đều bằng lông gà thêm 30- 40 giây để trứng hoạt hóa và thụ tinh, trứng hút nước và trương căng phồng lên, màng ngoài của trứng căng đến khi đạt kích thước tối đa 1,6 mm. Bỏ nước cũ thay nước mới và tiếp tục khuấy đều thêm 15-20 giây.