CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.4. Khảo sát quá trình thu nhận saponin triterpenoid bằng enzyme cellulase và
3.4.1. Khảo sát tỉ lệ nguyên liệu:nước
Khảo sát này đánh giá ảnh hưởng của tỉ lệ nước:nguyên liệu đến quá trình trích ly thu nhận saponin triterpenoid từ đảng sâm bằng enzyme cellulase và enzyme pectinase. Chúng tôi chọn tỉ lệ nước:nguyên liệu sao cho phù hợp, đạt được hiệu quả trích ly cao.
Mỗi mốc thí nghiệm được tiến hành khảo sát lặp lại 3 lần và kết quả thu được là giá trị trung bình của 3 lần lặp lại. Số liệu được xử lý ANOVA để nhận xét sự khác biệt giữa các mẫu.
68
Hình 3.11. Ảnh hưởng của tỉ lệ nguyên liệu:nước đến hàm lượng saponin triterpenoid thu nhận được bằng enzyme cellulase
Hình 3.12. Ảnh hưởng của tỉ lệ nguyên liệu:nước đến hàm lượng saponin triterpenoid thu nhận được bằng enzyme pectinase
2411,54a
3105,37b 3172,04b
3598,22c 3540,56cd 3499,81d
1800 2100 2400 2700 3000 3300 3600
ĐC 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7
Hàm lượng Triterpenoid saponin (mg/100gDW)
Tỉ lệ nguyên liệu:nước (w/v)
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau là khác nhau có ý nghĩa thống kê P < 0,05
ĐC: Hàm lượng saponin triterpenoid thu được khi trích ly bằng nước với điều kiện tối ưu
2414,32a
3423,19b 3465,22b
3667,07c
4003d 3934,26d
1800 2100 2400 2700 3000 3300 3600 3900
ĐC 1:5 1:6 1:7 1:8 1:9
Hàm lượng Triterpenoid saponin (mg/100gDW)
Tỉ lệ nguyên liệu:nước (w/v)
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau là khác nhau có ý nghĩa thống kê P < 0,05
ĐC: Hàm lượng saponin triterpenoid thu được khi trích ly bằng nước với điều kiện tối ưu
69
Chúng tôi tiến hành xử lý ANOVA kết quả khảo sát và nhận thấy rằng P-value
< 0,05 đều đó có nghĩa là có sự khác biệt giữa các kết quả khảo sát ở mức ý nghĩa 95% và được thể hiện ở Bảng PL3.1 và Bảng PL3.2 (xem Phụ lục)
Trong nghiên cứu này, chúng tôi khảo sát tỉ lệ nguyện liệu và nước sử dụng khi sử dụng hai loại enzyme là cellulase và pectinase để tiến hành trích ly saponin triterpenoid từ đảng sâm.
Đối với enzyme cellulase, chúng tôi khảo sát tỉ lệ nguyên liệu và nước từ 1:3 đến 1:7 (w/v tính theo khối lượng nguyên liệu tươi), còn đối với enzyme pectinase, chúng tôi sử dụng tỉ lệ nguyên liệu và nước là từ 1:5 đến 1:9 (w/v tính theo khối lượng nguyên liệu tươi). Ở cả 2 enzyme, khi tỉ lệ nguyên liệu : nước tăng lên thì hàm lượng saponin triterpenoid thu nhận được cũng tăng, tuy nhiên khi tiếp tục tăng tỉ lệ này thì hàm lượng saponin triterpenoid không tăng nữa. Tương tự như cách giải thích ở 1.1 khi tiến hành trích ly saponin triterpenoid bằng nước, hàm lượng nước trong nguyên liệu góp phần cho việc tạo ra sự chênh lệch gradiant nồng độ, tỉ lệ nước càng cao thì sự chênh lệch càng cao và trong trường hợp này với sự hỗ trợ của enzyme thì sẽ giúp tăng thêm hiệu quả trích ly. Thành phần chính của thành tế bào thực vật gồm pectin, cellulose, hemicellulose… [44]. Khi sử dụng enzyme pectinase và cellulase, chúng sẽ thủy phân pectin và cellulose trong cấu trúc mô thực vật và từ đó dịch trong tế bào thoát ra bên ngoài dễ dàng hơn, cộng với sự tác động của nước làm chênh lệch nồng độ nên quá trình diễn ra nhanh hơn, hiệu quả hơn so với khi chỉ trích ly bằng nước.
Điều này ta nhận thấy rõ ràng trên Hình 3.12, Hình 3.13 khi sử dụng enzyme để trích ly thì hàm lượng saponin triterpenoid thu được ở cả 2 enzyme đều cao hơn so với mẫu đối chứng (mẫu chỉ trích ly với nước). Đối với enzyme cellulase, khi tăng tỉ lệ nước từ 1:3 đến 1:5 thì hàm lượng saponin triterpenoid cũng tăng từ 3105,37 mg/100gDW đến 3598,22 mg/100gDW, nếu tiếp tục tăng tỉ lệ nước thì hàm lượng saponin triterpenoid thu được không có sự khác biệt nhiều. Đối với enzyme pectinase thì khi tăng tỉ lệ nguyên liệu:nước từ 1:5 đến 1:8 thì hàm lượng saponin triterpenoid thu được cũng tăng mạnh từ 3423,19mg/100gDW đến 4003,00mg/100gDW và khi tăng lên tỉ lệ 1:9 thì hàm lượng saponin triterpenoid thu được có xu hướng giảm. Khi
70
tăng hàm lượng nước lên quá cao thì hàm lượng saponin triterpenoid thu được không tăng nữa là do nồng độ chất chiết và nồng độ cơ chất trong nguyên liệu có giới hạn.
Từ những lập luận và kết quả nêu trên, chúng tôi chọn tỉ lệ nguyên liệu và nước bổ sung khi tiến hành trích ly thu nhận saponin triterpenoid là 1:5 đối với khi dùng enzyme cellulase và 1:8 khi dùng enzyme pectinase.