CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1. Một số chỉ tiêu sinh hóa ở rong bún Enteromorpha spp
3.6. Tinh sạch hoạt chất protein qua lọc gel
Sau khi tiến hành chiết xuất và tủa protein bằng 3 tác nhân: cồn lạnh, TCA và HCl, chúng ta tiến hành chạy sắc ký các sản phẩm tủa ở các tỷ lệ, nồng độ và pH tối ưu. Đối với sản phẩm tủa bằng cồn lạnh, TCA và HCl, quá trình tinh sạch được thực hiện qua lọc gel Biogel P - 100.
3.6.1. Tinh sạch protein qua lọc gel Biogel P - 100 sau khi tủa protein bằng TCA.
Lấy 2 ml dịch protein từ 4 ml dịch tủa đã pha trong NaOH 0,1 N, cho chạy qua hệ sắc ký cột Biogel P - 100.
Hình 3.1: Sắc ký đồ qua tinh sạch protein bằng sắc ký lọc gel sau khi tủa protein bằng TCA.
Kết quả tinh sạch protein qua lọc gel sau khi tủa protein bằng TCA thu được 2 peak với thứ tự như sau.
Peak 1:Từ ống 19 đến ống 32 thu được 28 ml Peak 2:Từ ống 33 đến ống 69 thu được 74 ml
Xác định hàm lượng cho từng peak. Tuy nhiên hàm lượng protein của peak 2 là cao nhất nên có thể dự đoán peak 2 có chứa protein quan tâm.
Bảng 3.20: Kết quả xác định hàm lượng protein trước và sau khi tinh sạch qua tác nhân tủa protein bằng TCA.
∑Hàm lượng (mg) Hiệu suất tinh sạch (%)
Trước sắc ký 9.125 100%
Sau sắc ký 8,17 90%
Nhận xét: Từ kết quả ở bảng 3.20, ta nhận thấy sau khi tinh sạch protein qua sắc ký lọc gel ta có thể nhận thấy hàm lượng protein sau khi tinh sạch thấp hơn hàm lượng protein trước khi tinh sạch. Vì một số protein tạp được loại bỏ sau khi chạy sắc ký lọc gel Biogel P - 100.
3.6.2 Tinh sạch hoạt chất protein qua lọc gel Biogel P - 100 sau khi tủa protein bằng HCl.
Lấy 2 ml dịch protein từ 4ml dịch tủa đã pha trong NaOH 0,1 N, cho chạy qua hệ sắc ký cột Biogel P - 100.
Hình 3.2: Sắc ký đồ qua tinh sạch protein bằng sắc ký lọc gel sau khi tủa protein bằng HCl
Kết quả tinh sạch protein qua lọc gel sau khi tủa protein bằng HCl thu được 2 peak với thứ tự như sau.
Peak 1:Từ ống 16 đến ống 31 thu được 32 ml Peak 2:Từ ống 32 đến ống 60 thu được 58 ml
Xác định hàm lượng cho từng peak. Tuy nhiên hàm lượng protein của peak 1 là cao nhất nên có thể dự đoán peak 1 có chứa protein quan tâm.
Bảng 3.21: Kết quả xác định hàm lượng protein trước và sau khi tinh sạch qua tác nhân tủa protein bằng HCl.
∑Hàm lượng (mg) Hiệu suất tinh sạch (%)
Trước sắc ký 7,125 100%
Sau sắc ký 4,17 59%
Nhận xét: Từ kết quả ở bảng 3.21, ta nhận thấy sau khi tinh sạch protein qua sắc ký lọc gel ta có thể nhận thấy hàm lượng protein sau khi tinh sạch thấp hơn hàm lượng protein trước khi tinh sạch. Vì một số protein tạp được loại bỏ sau khi chạy sắc ký lọc gel Biogel P - 100.
3.6.3 Tinh sạch hoạt chất protein qua lọc gel Biogel P - 100 sau khi tủa protein bằng cồn 96o.
Lấy 2 ml dịch protein từ 4 ml dịch tủa đã pha trong NaOH 0,1 N, cho chạy qua hệ sắc ký cột Biogel P - 100.
Hình 3.3: Sắc ký đồ tinh sạch protein bằng sắc ký lọc gel sau khi tủa protein bằng cồn 96o.
Kết quả tinh sạch protein qua lọc gel sau khi tủa protein bằng cồn 96o thu được 2 peak với thứ tự như sau.
Peak 1:Từ ống 16 đến ống 26 thu được 22 ml Peak 2:Từ ống 33 đến ống 69 thu được 74 ml
Xác định hàm lượng cho từng peak. Tuy nhiên hàm lượng protein của peak 1 là cao nhất nên có thể dự đoán peak 1 có chứa protein quan tâm.
Bảng 3.22: Kết quả xác định hàm lượng protein trước và sau khi tinh sạch qua tác nhân tủa protein bằng cồn 96o.
∑hàm lượng (mg) Hiệu suất tinh sạch (%)
Trước sắc ký 3,225 100%
Sau sắc ký 2,35 73%
Nhận xét: Từ kết quả ở bảng 3.22, ta nhận thấy sau khi tinh sạch protein qua sắc ký lọc gel ta có thể nhận thấy hàm lượng protein sau khi tinh sạch thấp hơn hàm lượng protein trước khi tinh sạch. Vì một số protein tạp được loại bỏ sau khi chạy sắc ký lọc gel Biogel P – 100.
3.6.4 So sánh kết quả tinh sạch protein với 3 tác nhân tủa bằng cồn 96o, TCA, HCl.
Bảng 3.23: Kết quả tinh sạch protein với 3 tác nhân tủa bằng cồn 96o, TCA, HCl qua sắc ký lọc gel.
Hàm lượng protein (mg) Hiệu suất (%) Dịch thu được sau khi
chạy sắc ký, khi tủa protein bằng TCA
8,17 90 %
Dịch thu được sau khi chạy sắc ký, khi tủa protein bằng cồn 96o
2,35 73 %
Dịch thu được sau khi chạy sắc ký, khi tủa
4,17 59 %
protein bằng HCl
Đồ thị 3.10: Hàm lượng protein TSK và SSK của 3 dung dịch tủa
Nhận xét:Vậy sau khi tinh sạch protein trên sắc ký cột Biogel P - 100 thu hàm lượng cao trong quá trình tinh sạch, một số protein tạp được loại bỏ.
Ta dựa vào bảng 3.14 thì độ tinh sạch và hiệu suất thu nhận của tủa TCA là tốt nhất khi qua gel Biogel P - 100 và tủa HCl là thấp nhất.
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ