Hình 2.3 Bịch hạt giống.
Cải dùng làm thí nghiệm được trồng từ hạt giống mua ở công ty Gino. Được trồng trong các khay xốp, giá thể để trồng là xơ dừa trộn với đất và phân trùng quế.
Hình 2.4 Khay xốp trồng cải.
Tiến hành trồng cải trong 4 khay xốp khác nhau (K1, K2, K3, K4) với mật độ vừa phải và theo hướng dẫn của nhà cung cấp và một số tài liệu tham khảo được.
Hình 2.5 Cải dùng làm thí nghiệm.
Trong 5 ngày đầu (từ khi hạt được gieo cho đến khi nảy mầm) cây được tưới nước mỗi ngày.
Sau đó cây cải được tưới nước cách nhật (1 ngày tưới – 1 ngày ngưng).
Các cây cải sau khi trồng được 15 ngày, cây có chiều cao khoảng 5cm, tiến hành phun riêng các hóa chất Na-Glutamat, K-Glutamat và Mg-Glutamat (với nồng độ 0.5 g/l) trên 3 khay khác nhau (K1, K2, K3) và 1 đối chứng (K4) không phun hóa chất gì cả.
Sau 3 ngày phun thuốc, tiến hành lây nhiễm nhân tạo bằng nấm Rhizoctonia Solani (được nhân giống từ trước) vào 3 khay đã phun hóa chất (K1, K2, K3) và 1 khay đối chứng (K4).
Sau vài ngày, các cây cải đã có dấu hiệu xuất hiện bệnh. Ta tiến hành chọn ngẫu nhiên một số cây mang đi phân tích môt số chỉ tiêu sau:
2.2.1 Thí nghiệm 1: Đánh giá hàm lượng Chlorophyll.
- Bố trí thí nghiệm: Các mẫu lá (5 lá) được lấy một cách ngẫu nhiên, sau đó cắt mỗi lá một phần nhỏ và cân đủ 25 mg. Các mẩu lá được lấy theo sơ đồ như sau:
Hình 2.6. Sơ đồ các vị trí lấy mẫu.
- Mô tả thí nghiệm: Phương pháp đo Chlorophyll (Arnon D. I, 1949).
- Mỗi nghiệm thức lấy 10 mẫu. Mỗi mẫu cân 25 mg lá (lá xanh tốt) và cắt nhuyễn. Cho từng mẫu vào ống nghiệm, sau đó dùng pipet 10 ml hút và cho vào mỗi ống nghiệm 10 ml aceton 80%. Đậy kín ống nghiệm bằng giấy bạc và nilon và để các mẫu không tiếp xúc ánh sáng trong 72 giờ.
- Đồng thời cân mỗi nghiệm thức 10 mẫu lá có trọng lượng mỗi mẫu là 25 mg. Gói giấy và đem sấy khô ở nhiệt độ 800C trong 72 giờ. Suy ra trọng lượng khô trung bình A của mỗi mẫu đo Chlorophyll.
- Sau 72 giờ, mang đi đo mật độ quang của từng ống nghiệm ở 2 bước sóng 645 nm và 663 nm bằng máy đo quang phổ.
- Hàm lượng chlorophyll a và b được tính theo công thức sau:
+ Chl a (mg/g TLK lá) =
mA
Abs
Abs663) (2.69* 645))*10
* 7 . 12
(( −
+ Chl b (mg/g TLK lá) =
mA
Abs
Abs645) (4.68* 663))*10
* 9 . 22
(( −
Khay trồng cải.
Các vị trí lấy mẫu.
50 cm.
27 cm.
+ Chl a+b (mg/g TLK lá) =
mA
Abs
Abs663) (20.29* 645))*10
* 02 . 8
(( +
+ Tỷ lệ Chlorophyll a/b = Chl a / Chl b.
- Trong đó:
mA: Trọng lượng khô của lá.
Chl a: Chlorophyll a.
Chl b: Chlorophyll b.
- Chỉ tiêu ghi nhận: các số liệu đo được dùng để đánh giá mối tương quan về hàm lượng Chlorophyll a và Chlorophyll b trong các nghiệm thức.
2.2.2 Thí nghiệm 2: Đo quang phổ tử ngoại.
- Bố trí thí nghiệm: Các lá đuợc lấy một cách ngẫu nhiên như sơ đồ lấy mẫu ở (hình 2.6).
- Mô tả thí nghiệm: Cân 1g lá, giã nhuyễn cho thêm 10ml nước cất, lọc và cho vào ống nghiệm, sau đó mang đi đo.
Về thí nghiệm này, các kết quả được đo bằng máy chuyên dụng, và được xử lí bằng một phần mềm chuyên dụng riêng.
Quá trình đo quang bằng máy chuyên dụng, sinh viên thực tập không được sử dụng máy, chỉ được đứng quan sát.
Quá trình xử lí số liệu của kết quả đo này thì vô cùng phức tạp và phải dùng phần mềm chuyên biệt, sinh viên thực tập không có được.
Sau khi có kết quả đo, số liệu sau đó được KS. HỨA QUYẾT CHIẾN (cán bộ hướng dẫn thực tập chính của chúng tôi) xử lí riêng sau đó đưa kết quả (ở phần 3) cho chúng tôi. Sau đó, ông (KS. HỨA QUYẾT CHIẾN) đã hướng dẫn chúng tôi đọc các kết quả và rút ra kết luận từ các số liệu này.
+ Protein = 1552*A280 – 757.3*A260 (àg/ml).
+ Axit Nucleic = -36*A280 + 62.9*A260 (àg/ml).
Trong đó: A280 và A260 là cường độ thu được ở bước sóng 280 nm và 260 nm.
- Chỉ tiêu ghi nhận: Ghi nhận sự thay đổi về hàm lượng Protein và Axit nucleic có trong các nghiệm thức.