Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. Kết quả tuyển chọn một chủng vi khuẩn có hoạt tính cố định nitơ và sinh tổng hợp IAA cao nhất trong số các chủng đã phân lập được
3.2.1. Kết quả đánh giá khả năng tổng hợp IAA của các chủng vi sinh vật được phân lập được
Để xác định khả năng sinh tổng hợp IAA của các chủng phân lập được theo phương pháp so màu với thuốc thử Salkowski (theo Glickmann và Dessaux năm 1995), trước tiên cần tiến hành xây dựng đường chuẩn (hàm số tương quan) giữa hàm lượng IAA có trong dung dịch chuẩn với độ hấp thụ tia UV ở mỗi nồng độ tương ứng.
Kết quả xây dựng đường chuẩn tương quan giữa hàm lượng IAA trong dung dịch chuẩn với độ hấp thụ tia UV tương ứng được thể hiện trong hình 3.1.
Hàm lượng
IAA (àg/ml)
Độ hấp thụ tia
UV
0 0,0
10 0,105 30 0,344 40 0,458 50 0,585 60 0,685 70 0,793 80 0,969 90 1,056
Hình 3.1. Đường chuẩn tương quan giữa hàm lượng IAA trong dung dịch và độ hấp thụ tia UV
Dựa trên đường chuẩn và hàm số tương quan giữa IAA trong dung dịch với độ hấp thụ tia UV. Khi tiến hành nuôi cấy các chủng vi khuẩn phân lập được trong môi trường Ashby có bổ sung 0,1% Tryptophan ở 30oC, tốc độ lắc là 150 vòng/phút và nuôi liên tục trong 7 ngày. Sau thời gian nuôi cấy tiến hành lấy mẫu, phối trộn với thuốc thử Salkowski rồi đo độ hấp thụ tia UV (OD) để xác định giá trị IAA có trong dung dịch.
Hàm lượng IAA (àg/ml)
Kết quả đánh giá hàm lượng IAA do các chủng vi sinh vật phân lập sinh ra được trình bày trong bảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả đánh giá khả năng sinh tổng hợp IAA của các chủng vi khuẩn đã phân lập
TT Ký hiệu chủng
Khả năng tổng
hợp IAA (àg/ml) TT Ký hiệu chủng
Khả năng tổng hợp IAA (àg/ml)
1 MN1 10,681 12 MN75 14,494
2 MN9 11,331 13 MN76 21,952
3 MN12 19,155 14 MN77 30,257
4 MN20 70,907 15 MN78 46,980
5 MN31 40,427 16 MN26 77,234
6 MN63 11,387 17 MN45 16,048
7 MN65 7,658 18 MN102 26,980
8 MN67 13,958 19 MN105 32,658
9 MN68 10,568 20 MN106 50,511
10 MN71 14,042 21 MN107 43,082
11 MN74 16,698 22 MN108 56,246
Kết quả bảng 3.3 cho thấy: Trong tất cả các chủng phân lập được khi nuôi trong môi trường Ashby lỏng có bổ sung 0,1% Tryptophan đều có khả năng sinh tổng hợp IAA với hàm lượng khác nhau. Chủng có khả năng sinh tổng hợp IAA thấp nhất là chủng MN68 đạt 10,5678 àg/ml, chủng cú khả năng tổng hợp cao nhất là chủng MN26 đạt 77,23446 àg/ml, Khả năng tổng hợp IAA trong mụi trường nuôi cấy của các chủng cho thầy chúng đều có tiềm năng ứng dụng trong sản xuất chế phẩm vi sinh, Tuy nhiên để đáp ứng yêu cầu của đầu bài về cả hoạt tính cố định nitơ và để có đủ cơ sở tuyển chọn chủng tốt nhất, chúng tôi tiến hành thí nghiệm đánh giá khả năng cố định nitơ của 22 chủng vi khuẩn, kết quả được thể hiện tại bảng 3.4.
3.2.2. Kết quả đánh giá khả năng cố định nitơ của các chủng đã phân lập được
22 chủng được phân lập trong đất được xác định là nhóm vi khuẩn cố định nitơ tự do hoặc hội sinh, Nhóm này sẽ được đánh giá khả năng cố định nitơ theo phương pháp Nessler. Để xác định khả năng cố định nitơ tự do của của 22 chủng vi khuẩn này thông qua việc xác định hàm lượng NH4+ trong dung dịch nuôi cấy, cần thiết phải xây dựng đường chuẩn - đồ thị của hàm số tuyến tính biểu thị cho độ hấp thụ tia UV tương với với nồng độ NH4+ chuẩn được pha sẵn trong dung dịch.
Kết quả xây dựng đường chuẩn được thể hiện tại hình 3.2.
Dựa trên đường chuẩn và hàm số tương quan giữa hàm lượng NH4+ trong dung dịch với độ hấp thụ tia UV, Khi tiến hành nuôi cấy các chủng vi khuẩn phân lập được trong môi trường Ashby lỏng ở 30oC, tốc độ lắc là 150 vòng/phút và nuôi liên tục trong 7 ngày, Sau thời gian nuôi cấy tiến hành lấy mẫu, phối trộn với thuốc thử Nessler để đo OD để xác định giá trị NH4+ có trong dung dịch.
Hàm lượng NH4+
(àg/ml)
Giá trị hập thu tia UV
0 0,0
1 0,085
2 0,144
3 0,251
4 0,355
5 0,414
6 0,478
7 0,554
8 0,643
9 0,718
10 0,843
Hình 3.2. Đường chuẩn tương quan giữa hàm lượng NH4+ trong dung dịch và độ hấp thụ tia UV
y = 0.0816x - 0.0001 R² = 0.9962
-0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
0 2 4 6 8 10 12
Độ hấp thụ tia UV
Hàm lượng NH4+ (àg/ml)
Kết hợp giữa đường chuẩn tương quan giữa giá trị OD và hàm lượng NH4+, từ giá trị OD đo được cho các mẫu được xử lý từ dịch nuôi 22 chủng vi khuẩn trên môi trường Ashby, chúng tôi tổng hợp đánh giá hàm lượng NH4+ sinh ra do các chủng vi sinh vật phân lập được trình bày trong bảng 3.4
Bảng 3.4. Kết quả đánh giá khả năng cố định nitơ của các chủng phân lập được
TT Ký hiệu chủng
Hàm lượng NH4+ tổng hợp được
(àg/ml) Nguồn mẫu
1 MN1 3,242
Đất trồng lúa
Thành phố Thái Nguyên
2 MN9 4,653 Trại Cau – Thái Nguyên
3 MN12 3,256 Trại Cau – Thái Nguyên
4 MN20 6,313 Đồng Hỷ - Thái Nguyên
5 MN31 10,223 Đại Từ - Thái Nguyên
6 MN63 7,263 Phú Lương – Thái Nguyên
7 MN65 5,264 Phú Bình – Thái Nguyên
8 MN67 12,985 Phú Bình – Thái Nguyên
9 MN68 11,881 Sông Công – Thái Nguyên
10 MN71 3,689 Sông Công – Thái Nguyên
11 MN74 5,648 Định Hóa – Thái Nguyên
12 MN75 6,895 Định Hóa – Thái Nguyên
13 MN76 7,865 Chợ Mới – Bắc Kạn
14 MN77 9,758 Hàm Yên – Tuyên Quang
15 MN78 4,624 Hàm Yên – Tuyên Quang
16 MN26 20,822
Đất trồng cà chua
Đại Từ - Thái Nguyên
17 MN45 8,689 Phú Lương – Thái Nguyên
18 MN102 16,123 Phú Lương – Thái Nguyên
19 MN105 12,365 Phú Bình – Thái Nguyên
20 MN106 17,526 Đồng Hỷ - Thái Nguyên
21 MN107 14,943 Hòa An - Cao Bằng
22 MN108 15,581 Vĩnh Tường – Vĩnh Phúc
Kết quả bảng 3.4 đã khẳng định lại một lần nữa, rằng 22 chủng vi khuẩn phân lập trên môi trường chọn lọc Ashby đều có khả năng cố định đạm, tuy nhiên hiệu lực là khác nhau. Chủng có khả năng cố định đạm mạnh nhất là MN26 (20,882 àg/ml), MN1 là chủng cú hoạt lực cố định đạm yếu nhất (3,242 àg/ml).
Kết hợp kết quả nghiên cứu bảng 3.3 và 3.4 cho phép tác giả lựa chọn chủng có hoạt lực cố định nitơ và sinh tổng hợp IAA tốt nhất trong số 22 chủng phân lập được là MN26.