CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. Kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học
3.2.2. Chiết xuất, phân lập các hợp chất saponin có trong thân rễ Rận trâu
3.2.2.1. Chiết xuất
- Thân rễ cây Rận trâu tươi có khối lượng m= 29,50 kg, rửa sạch, bỏ rễ con, thái lát mỏng, đem phơi sấy khô và xay thô còn M= 3,25 kg bột dược liệu thô khô.
- Đo độ ẩm được liệu (x%): lấy khoảng 2g bột dược liệu đo độ ẩm.
Thực hiện lặp lại 3 lần được kết quả độ ẩm dược liệu lần lượt là x1=11.5 %, x2= 10,8; x3=12,0%. Vậy độ ẩm trung bình của dược liệu là x= (x1+x2+x3) : 3= 11,43%.
- Chiết bằng phương pháp ngâm ở nhiệt độ phòng với dung môi cồn 700, thể tích cồn 700 là 10lít/1lần/ 2 ngày x 3 lần. Gộp các dịch chiết, cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm ở nhiệt độ 600C thu được cắn ethanol toàn phần có khối lượng mcắn ethanol =120,20g. Cắn được phân tán vào 2 lít nước cất nóng rồi chiết phân bố lần lượt với các dung môi có độ phân cực tăng dần lần lượt là: n-hexan (2lx 3 lần), cloroform (2l x 3 lần), ethylacetat (2l x 3 lần), n-butanol (2l x 3 lần) thu được 4 phân đoạn dịch chiết. Các dịch chiết được cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm đến khối lượng không đổi thu được cắn các phân đoạn tương ứng. Quá trình chiết xuất được tiến hành như trong hình 3.2.1.Hiệu suất của cắn 3 phân đoạn so với cắn toàn phần được trình bày trong bảng 3.2.
38
Bảng 3.2. Hàm lượng cắn các phân đoạn chiết xuất từ thân rễ Rận trâu STT Phân đoạn Khối lượng
cắn (g)
% so với cắn toàn phần (%)
% so với nguyên liệu thô (%)
1 n-hexan 30,24 26,82 1,05
2 Cloroform 12,26 10,20 0,43
3 Ethylacetat 22,45 18,68 0,78
4 n-buthanol 35,89 29,85 1,25
Hình 3.2.1. Sơ đồ chiết xuất các phân đoạn từ thân rễ Rận trâu 3.2.2.2. Phân lập các hợp chất saponin.
Phân lập các hợp chất từ cắn ethylacetat.
Cắn ethylacetat (22,45 g) được hòa tan với một lượng methanol tối tiểu, thêm lượng silicagel vừa đủ, trộn đều. Sau đó cất loại bỏ dung môi đến khi thu được bột khô tơi mịn. Bột này được đưa lên cột silicagel pha thường (cỡ
Dược liệu (3,25kg)
Cắn EtOH (120,20 g)
Cắn n-hexan (30,24 g)
Chiết với EtOH (10 lít x 3 lần) Cô thu hồi dung môi
Hòa tan trong 2 lít nước nóng Chiết phân đoạn với n-hexan, cloroform, ethyl acetat, n-butanol Cô thu hồi dung môi
Cắn cloroform (12,26 g)
Cắn ethylacetat (22,45 g)
Cắn n-butanol (35,89 g)
39
hạt 0,040-0,063 mm) đã được chuẩn bị bằng phương pháp nhồi cột ướt, ổn định cột bằng hệ dung môi rửa giải.
Quá trình rửa giải sử dụng hệ dung môi dicloromethane: methanol với độ phân cực tăng dần đến tỷ lệ DCM: MeOH: H2O (5:1:0.1, v/v). Hứng dịch rửa giải vào các bình tam giác và kiểm tra dịch rửa giải bằng sắc ký lớp mỏng.
Những bình có thành phần như nhau trên sắc ký lớp mỏng được gom chung cất thu hồi dung môi thu được 7 phân đoạn ký hiệu: E1-> E7.
Trên sắc ký pha thường với hệ dung môi DCM: MeOH: H2O (5:1:0.1) thấy phân đoạn E4 có số lượng vết ít nhất, trong đó có hai vết đậm lớn, màu tím hồng, dự kiến là vết saponin.
Triển khai sắc ký bản mỏng pha đảo phân đoạn E4 với hệ dung môi MeOH: H2O (5:1) thấy 2 vết tách rõ. Do đó phân đoạn E4 (1.7g) được hòa tan trong lượng tối thiểu MeOH và được đưa lên cột pha đảo với hệ dung môi rửa giải MeOH:H2O (5:1, v/v). Hứng dịch rửa giải vào các ống nghiệm. Kiểm tra dịch rửa giải bằng sắc ký lớp mỏng. Gom các ống nghiệm có thành phần như nhau trên sắc ký lớp mỏng. Thu được 4 phân đoạn ED1, ED2, ED3, ED4.
Phân đoạn ED2 phát hiện trên sắc ký lớp mỏng pha thường với hệ dung môi DCM:MeOH: H2O (5:1:0.1) và pha đảo với hệ dung môi MeOH:H2O (5:1) vết duy nhất đậm, màu tím hồng. Tinh chế bằng cách để kết tinh qua đêm phân đoạn ED2 thu được hợp chất RT01 (105,20 mg) dạng bột màu trắng.
Phân đoạn ED3 phát hiện trên sắc ký lớp mỏng pha thường với hệ dung môi DCM:MeOH: H2O (5:1:0.1) và pha đảo với hệ dung môi MeOH:H2O (3:1) vết duy nhất đậm, màu tím hồng. . Tinh chế bằng cách để kết tinh qua đêm phân đoan ED2 thu được hợp chất RTO2 (16,15 mg) dạng bột màu trắng.
Sơ đồ phân lập hai hợp chất RT01 và RT02 thể hiện trong hình 3.2.2.
40
Tinh chế Tinh chế RT01 RT02
(105.20 mg) (16.15 mg)
Hình 3.2.2. Sơ đồ phân lập hợp chất saponin từ thân rễ Rận trâu.