3.1 NỘI DUNG 1: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA HÓA CHẤT NUÔI CẤY TRONG GIAI ĐOẠN HÌNH THÀNH VI CỦ SÂM NGỌC
3.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của Myo-inositol lên khả năng hình thành vi củ sâm Ngọc Linh
Trong thí nghiệm này, mẫu phôi soma được nuôi cấy trong môi trường
có bổ sung myo-inositol. Sau tám tuần theo dõi, nhận thấy mẫu phôi sâm cấy vào các môi trường với các nồng độ myo-inositol khác nhau bắt đầu có sự thay đổi. Các chỉ tiêu theo dõi sau tám tuần nuôi cấy đƣợc quan sát và thể hiện qua bảng 3.1.
Bảng 3.1: Ảnh hưởng của myo-inositol lên sự hình thành vi củ từ mẫu phôi
soma sâm Ngọc Linh
Nồng
độ (g/l)
Số vi
củ
Đường kính
vi củ (cm)
Khối lƣợng tươi vi củ (g) Hình thái vi củ
0 0,27c 0,19a 0,03c Củ hình chóp nhọn, nhỏ,
xanh
0,5 0,93b 0,25a 0,04bc Củ hình chóp nhọn, nhỏ,
xanh
1 1,47a 0,28a 0,06a Củ hình chóp nhọn, to,
xanh, chắc
1,5 1,07b 0,26a 0,05ab Củ hình chóp nhọn, nhỏ,
hơi vàng
2 0,47c 0,21a 0,03c Củ hình chóp nhọn, nhỏ,
vàng
Ftính 51,80** 3,11ns 12,36**
CV (%) 13,75 14,98 15,29
Ghi chú: Những chữ cái khác nhau (a, b, …) trong cùng một cột biểu diễn sự khác biệt có ý nghĩa với α = 0,01 bằng phép thử Duncan’s test.
ns: không khác biệt; *: Sự khác biệt rất có ý nghĩa ở mức α = 0,05; **: Sự khác biệt rất có ý nghĩa ở mức α = 0,01.
Hình 3.1: Ảnh hưởng của myo-inositol lên sự hình thành vi củ sâm Ngọc Linh
a: 0 mg/l b: 0,5 mg/l c: 1 mg/l d: 1,5 mg/l e: 2 mg/l.
Theo kết quả thống kê ở tất cả các nghiệm thức ở tám tuần cho thấy đã
có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với α = 0,01. Về chỉ tiêu số vi củ, ở
nghiệm thức đối chứng bổ sung 0 g/l myo-inositol cho số vi củ thấp nhất (0,27 vi củ/mẫu) sau đó tăng lên khi môi trường nuôi cấy có bổ sung 0,5 g/l myo-inositol (0,93 vi củ/mẫu). Nghiệm thức bổ sung 1 g/l myo-inositol có số
vi củ hình thành cao nhất (1,47 vi củ/mẫu), khi tiếp tục tăng nồng độ myo-
a
e
b c
d
inositol lên thì số vi củ tạo thành bắt đầu giảm dần (1,5 g/l myo-inositol với 1,07 vi củ/mẫu và 2 g/l myo-inositol với 0,47 vi củ/mẫu). Điều này cho thấy rằng các môi trường bổ sung myo-inositol với nồng độ cao đã ức chế sự hình thành vi củ từ mẫu phôi soma sâm Ngọc Linh. Tuy nhiên, nghiệm thức ở nồng độ 1 g/l myo-inositol cho số vi củ có khác biệt về mặt thống kê nhƣng không quá sai khác so với nghiệm thức ở các nồng độ 0,5 g/l và 1,5 g/l.
Đường kính vi củ không có sự khác biệt về mặt thống kê ở các nghiệm thức có nồng độ myo-inositol khác nhau. Nghiệm thức cho đường kính vi củ cao nhất ở nghiệm thức bổ sung 1 g/l myo-inositol (0,28 cm) và đạt thấp nhất
ở nghiệm thức đối chứng (0,19 cm). Khi nồng độ myo-inositol tăng dần thì đường kính vi củ tăng dần và cao nhất ở nồng độ 1 g/l với đường kính vi củ là 0,28 cm, khi tiếp tục tăng nồng độ myo-inositol lên 1,5 g/l, 2 g/l thì đường kính vi củ giảm lần lƣợt là 0,26 cm, 0,21 cm. Nghiên cứu của Sepahvand và cộng sự (2012) cũng cho thấy trên đối tƣợng GF677 (gốc ghép đào và hạnh nhân) ở 10 mg/l myo-inositol tăng nhanh sự hình thành chồi và chiều dài chồi [56]. Nghiên cứu của Mazri và cộng sự (2016) cho thấy nồng độ tối ƣu của myo-inositol cho sự tăng sinh chồi cây chà là Mejhoul là 2 g/l [57]. Những kết quả này phù hợp với kết quả thu đƣợc cho thấy myo-inositol có ảnh hưởng đến sự hình thành vi củ.
Nồng độ myo-inositol khi bổ sung vào môi trường ảnh hưởng tương đối đến khối lượng tươi vi củ. Nghiệm thức ở nồng độ 1 g/l myo-inositol cho thấy kết quả khối lượng tươi vi củ cao nhất là 0,06 g, các nghiệm thức ở nồng
độ 0,5 g/l và 1,5 g/l myo-inositol cho kết quả khối lượng tươi vi củ lần lượt là 0,04 g và 0,05 g, nghiệm thức đối chứng và nghiệm thức bổ sung 2 g/l myo- inositol cho kết quả khối lượng tươi vi củ thấp nhất 0,03 g, giữa hai ngiệm thức này không có sự khác biệt về mặt thống kê. Điều này cho thấy myo- inositol không ảnh hưởng nhiều đến khối lượng tươi vi củ. Kết quả này tương
tự với kết quả của Đỗ Đăng Giáp và cộng sự (2012) nhận thấy ở nồng độ myo-inositol 100 mg/l làm gia tăng hệ số nhân chồi chuối Laba. Tuy nhiên, myo-inositol lại không có tác động đến sự gia tăng khối lượng tươi của chồi [36].
Kết quả thu nhận sau tám tuần nuôi cấy cho thấy số lƣợng hình thành cao nhất trong môi trường có bổ sung 1 g/l myo-inositol. Kết quả tương tự nhƣ nghiên cứu của Kaul và Sabharwal (1975) nhận thấy có sự gia tăng chồi
và rễ khi nuôi cấy cây Haworthia trong môi trường có bổ sung myo-inositol [45]. Khi tiếp tục tăng dần nồng độ myo-inositol lên thì kết quả cho thấy các chỉ tiêu theo d i có xu hướng giảm dần.
Từ kết quả trên, có thể đưa ra nhận định rằng môi trường nuôi cấy bổ sung myo-inositol thì sẽ kích thích tăng trưởng tế bào, đặc biệt ảnh hưởng rõ rệt lên sự hình thành vi củ. Khi tiếp tục tăng nồng độ myo-inositol lên cao thì
số vi củ mới hình thành giảm xuống. Nguyên nhân có thể là do myo-inositol liên quan đến sự lưu trữ và vận chuyển một nhóm các hormone thực vật [43],
mà khi nồng độ chất kích thích sinh trưởng quá cao, tác dụng quá mạnh sẽ xảy ra hiện tƣợng ức chế ngƣợc trở lại, lúc này nó sẽ trở thành chất gây ức chế, không những gây ức chế trong việc hình thành chồi mà còn ảnh hướng đến sự sinh trưởng và phát triển của mô cấy [58].