KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4 Phân tích và phân tách phần chiết etyl axetat (EG3) .1 Phân tích sắc ký lớp mỏng phần chiết etyl axetat (EG3)
Sắc ký lớp mỏng (TLC) được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn silica gel Merck Alufolien 60 F254 dày 0,2 mm trên nền nhôm (Merck, Darmstadt, CHLB Đức). Thuốc thử hiện màu là dung dịch FeCl3 5%.
Phần chiết etyl axetat (EG3) được phân tích TLC với các hệ dung môi n-hexan- etyl axetat-axit fomic với tỷ lệ 20:19:1 và 10:19:1,5.
Kết quả phân tích TLC được trình bày trên Bảng 4.2.
Bảng 4.2: Phân tích phần chiết etyl axetat (EG3) bằng TLC Hệ dung môi
(n-hexan-etyl axetat-axit fomic)
STT Rf Dạng vệt Hiện màu
20:19:1 1
2
0,35 0,22
Tròn Tròn
Nâu Nâu 10:19:1,5
1 2 3 4
0,45 0,22 0,15 0,10
Hình cung Tròn Tròn Tròn
Nâu Nâu Nâu Nâu 4.4.2 Phân tách phần chiết etyl axetat (EG3)
Phần chiết etyl axetat (EG3) (15 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC, 5 cm i. d. 40 cm) trên silica gel (Merck, cỡ hạt 63-200 μm) với các hệ dung môi n- hexan-etyl axetat-axit fomic 20:19:1 và 10:19:1,5.
STT Phần chiết Ký hiệu Khối lượng (g) Hiệu suất (%)*
1 n-hexan EG1 51,6 1,60
2 điclometan EG2 11,4 0,37
3 etyl axetat EG3 15,0 0,50
4 nước EG4 20,0 0,67
Các phân đoạn phân tách được thu theo 50 ml và được phân tích bằng TLC. Các phân đoạn có sắc ký đồ giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được các nhóm phân đoạn từ EG3.1 đến EG3.5 (n-hexan-etyl axetat-axit fomic 20:19:1và từ EG3.6 đến EG3.9 (n-hexan-etyl axetat-axit fomic10:19:1,5).
Tinh chế phân đoạn EG 3.9
Phân đoạn EG 3.9 (52mg) được phân tách sắc kí cột Mini-C trên silica gel (40-63 μm), hệ dung môi CH2Cl2-CH3OH với các tỉ lệ 11:1 (100 ml), 10:1 (50 ml) và 9:1 (25 ml), thu 5 ml/ phân đoạn cho các chất EG3.9.1 (chất III) và EG3.9.2 (chất IV).
Quá trình phân tách phần chiết EG3 được nêu trên Sơ đồ 3.2, Mục 3.3, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
4.5 Phân tách sắc kí cột phần chiết nước (EG4) 4.5.1 Phân tích sắc ký lớp mỏng phần chiết nước (EG4)
Sắc ký lớp mỏng (TLC) được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn silica gel Merck Alufolien 60 F254 dày 0,2 mm trên nền nhôm (Merck, Darmstadt, CHLB Đức). Thuốc thử hiện màu là dung dịch FeCl3 5%.
Phần chiết nước (EG4) được phân tích TLC với các hệ dung môi diclometan- metanol với các tỷ lệ 7:1 và 5:1.
Kết quả phân tích TLC được trình bày trên Bảng 4.3.
Bảng 4.3: Phân tích phần chiết nước (EG4) bằng TLC Hệ dung môi
(diclometan-metanol)
STT Rf Dạng vệt Hiện màu
7:1 1
2
0,4 0,62
Tròn Hình cung
Nâu Xanh
5:1 1
2 3
0,48 0,75 0,72
Tròn Tròn Tròn
Nâu Nâu Tím
4.5.2 Phân tách phần chiết nước (EG4)
Phần chiết nước (EG4) được hòa tan trong MeOH, lọc hút chân không bằng phễu lọc Buchner và đưa trực tiếp lên cột.
Phần chiết nước được phân tách bằng sắc kí cột (CC) pha đảo trên chất hấp phụ polyme Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemicals), kích thước cột tách 5 cm i.d. 50 cm, rửa giải bằng hệ dung môi H2O, MeOH-H2O gradient với các tỉ lệ 20% MeOH, 40%
MeOH, 60% MeOH và MeOH.
Các phân đoạn phân tách được thu theo 250 ml cho đến khi hết chất rửa giải (phân tích TLC). Các phân đoạn rửa giải cùng với hệ dung môi được gộp lại, sau đó được cất loại kiệt dung môi dưới áp suất giảm cho 4 nhóm phân đoạn: EG4.1 (20%MeOH), EG 4.2 (40% MeOH) (5,3 g), EG4.3 (60% MeOH) (5 g) và EG4.4 (MeOH) (9,7 g).
Quá trình phân tách phần chiết EG4 được nêu trên Sơ đồ 3.3, Mục 3.4, Chương 3: Kết quả và Thảo luận.
Phân tách phân đoạn EG4.3
Phân đoạn EG4.3 được phân tích bằng sắc kí lớp mỏng (TLC, silica gel, Merck) với các hệ dung môi triển khai CH2Cl2-CH3OH với các tỉ lệ 9:1, 7:1 và 5:1.
Phân đoạn EG4.3 được phân tách bằng sắc kí cột CC trên silica gel (63-200 μm), kích thước cột tách 20 1,5 cm i.d, hệ dung môi gradient CH2Cl2-CH3OH với các tỉ lệ 15:1 (100 ml ), 9:1 (500 ml), 5:1 (200 ml) và n-hexan-EtOAc-axit fomic với tỉ lệ 10:20:1 (200 ml). Các phân đoạn phân tách được thu theo 20 ml và phân tích sắc kí lớp mỏng, các phân đoạn có TLC giống nhau được gộp lại, cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 5 nhóm phân đoạn.
Tinh chế phân đoạn EG 4.3.1 (73 mg) bằng sắc kí cột Mini-C trên silica gel (40- 63 μm), hệ dung môi CH2Cl2-CH3OH với các tỉ lệ 40:1 (100 ml), 20:1 (25 ml) và 12:1 (25 ml), thu 5 ml/phân đoạn cho chất EG4.3.1.1 (chất I) và chất EG4.3.1.2 (chất II).
Tinh chế phân đoạn EG 4.3.2 (0,6 g) bằng sắc kí cột Mini-C trên silica gel (40-63 μm), hệ dung môi CH2Cl2-CH3OH với các tỉ lệ 12:1 (200 ml), 10:1 (25ml) và 9:1 (25 ml), thu 5 ml/phân đoạn cho chất EG4.3.2 (chất III).
Tinh chế phân đoạn EG 4.3.4 (0,3 g) bằng Mini-C trên silica gel (40-63 μm), hệ dung môi CH2Cl2-CH3OH với các tỉ lệ 12:1 (50 ml), 11:1 (100 ml) và 10:1 (25 ml) thu 5 ml/phân đoạn cho chất EG4.3.4 (chất IV).
4.6 Hằng số vật lý và dữ kiện phổ của các hợp chất đƣợc phân lập