Nguyên tắc: Mẫu thử được đặt trên lớp thạch dinh dưỡng đã cấy vi sinh
vật kiểm định. Kháng sinh từ mẫu thử khuếch tán vào môi trường thạch sẽ ức chế sự phát triển của vi sinh vật kiểm định tạo thành vịng vơ khuẩn.
Tiến hành:
+ Chuẩn bị môi trường cấy vi sinh vật kiểm định:
Vi sinh vật kiểm định được cấy vào môi trường canh thang ủ ở 370C trong 18-24h. Chuẩn bị nhũ dịch VSV kiểm định có nồng độ 107-108 tế bào /ml, đưa nhũ dịch này vào môi trường thạch thường vô trùng ở 450C-500C. Lắc đều đổ vào đĩa petri vơ trùng với thể tích 20ml/đĩa.
+ Đưa mẫu thử vào đĩa petri có chứa mơi trường đã cấy VSV kiểm định. Có 3 cách đưa mẫu thử vào mơi trường chứa VSV kiểm định:
- Khối thạch: Đặt khối thạch D = 6,0mm có chứa VSV sinh kháng sinh lên bề mặt môi trường đã cấy VSV kiểm định
- Giếng thạch: Đục các giếng trên môi trường đã cấy VSV kiểm định (D = 6,0mm) sau đó nhỏ mẫu thử vào, mỗi miếng nhỏ 0,05ml.
- Khoanh giấy lọc: Khoanh giấy lọc (D = 6,0mm) đã được tẩm ba lần dịch chiết dung môi hữu cơ của mẫu thử, sấy khô ở t0C ≤ 500C, sau đó đặt lên bề mặt mơi trường đã cấy VSV kiểm định.
+ Ni cấy: Các đĩa petri có mẫu thử được ủ trong tủ ấm ở t0C = 370C, trong 18-24h.
+ Đánh giá kết quả: Đo đường kính vịng vơ khuẩn bằng thước kẹp Panmer có độ chính xác 0,02mm. Kết quả đo được đánh giá dựa trên đường kính vịng vơ khuẩn, xử lý theo cơng thức:
D = n n D n i i ∑ =1 s = 1 ) ( 1 2 − − ∑ = n D D n i i
D: Đường kính trung bình vịng vơ khuẩn (vơ nấm),
Di: Đường kính vịng vơ khuẩn (vơ nấm) thứ i,
s: Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh,
n: Số thí nghiệm làm song song (nếu khơng xác định khác đi, thì số thí nghiệm song song ở đây là 3).