Chủng
Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC: μg/ml)
E. coli P. aeruginosa S. aureus B. subtilis C. albicans S. cerevisiae A. niger F. oxysporum XTĐ 18 50 - 50 50 - - 100 100
Mẫu XTĐ 18 là chủng có biểu hiện hoạt tính cao kháng 5/8 VSVKĐ và phù hợp với các kết quả nghiên cứu định tính.
3.6. Hình ảnh tế bào chủng XTĐ 18
Nhuộm gram, quan sát các tế bào dưới kính hiển vi với độ phóng đại 100X, so sánh tế bào với tế bào vi khuẩn E. coli (Gram âm), B. subtillis (Gram dương) và kết quả thể hiện ở hình 3.13, 3.14, 3.15.
Hình 3.14. Ảnh tế bào XTĐ18
Qua hình ảnh tiêu bản tế bào XTĐ18 và 2 tiêu bản đối chứng là tiêu bản vi khuẩn Gram âm E.coli và Gram dương B.subtilis cho thấy vi khuẩn cộng
sinh thu nhận được có dạng que, kích thước khoảng 2,4- 3,2 x 0,6 -,08 μm, thành tế bào dày, bắt màu tím tương tự như E.coli, còn B.subtilis thành tế bào mỏng hơn, bắt màu tím hồng.
3.7. Định loại VKCS và quan hệ di truyền của chúng dựa trên phân tích trình tự gen 16S rDNA
3.7.1. Kết quả khuếch đại gen của chủng XTĐ18
Tách chiết DNA tổng số từ khuẩn lạc của chủng XTĐ18. Sau đó, thực hiện phản ứng PCR với cặp mồi có trình tự sau:
Mồi xuôi: 5’- AGAGTTTGACCTGGCTCAC-3’ Mồi ngược: 5’- CGGCTACCTTGTTACGACTT-3’
Hình 3.15. Ảnh tế bào B. subtillis
Hình 3.16. Ảnh tế bào E.coli
Sản phẩm của phản ứng PCR được kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1%, chúng tơi thu được hình ảnh thể hiện ở hình 3.17.
Hình 3.17. Sản phẩm PCR của gen 16S rDNA của XTĐ18
3.7.2. Kết quả giải trình tự gen 16S rDNA của chủng XTĐ18
Sản phẩm PCR sau khi tinh sạch và chạy trình tự đươc gửi tới phịng Kỹ thuật gen- Viện Cơng nghệ Sinh học để giải trình tự trình tự trên máy tự động ABI 3100 Avant Genetic Analyzer.
Sau khi ghép nối và cắt bỏ đoạn mồi thu được trình tự gen 16S rDNA của chủng XTĐ18 có độ dài là 1118bp
3.7.3. So sánh trình tự gen 16S rDNA của chủng XTĐ18
Kết quả giải mã và so sánh trình tự đoạn gen 16S rDNA chủng XTĐ18 và những lồi có quan hệ gần gũi được chỉ ra ở bảng 3.7.
1150bp Lader
(100bp)