Hoạt tính riêng của enzym thơ là 10,185 (U/protein) Hoạt tính riêng của enzym tinh chế là 15,85 (U/protein) Mức tinh chế là 1,56 lần
Như vậy, sau tinh chế thì hoạt tính của enzym amylase trong 1 mg protein tăng so
với trước tinh chế
Quá trình tinh chế amylase bằng alginate đạt hiệu suất khá cao 21,92%,
Sau tinh chế lượng enzym giảm nhiều nhưng hoạt tính chuyên biệt tăng 1,56 lần
Cố định enzym là định vị enzym trên một vùng không gian xác định của chất mang nhưng vẫn giữ hoạt tính của nó, nhằm sử dụng enzym nhiều lần, làm enzym bền hơn nên bảo quản tốt hơn và dễ dàng tinh chế sản phẩm, hơn nữa là các ứng dụng trong y học, kỹ thuật sinh hóa, cơng nghiệp và mơi trường. Tuy nhiên, nó có thể làm giảm hoạt tính enzym so với ban đầu do cản trở về mặt không gian giữa enzym và cơ chất. Gồm các phương pháp cố định:
- Các phương pháp cố định enzym thuận nghịch: hấp phụ, liên kết ion, liên kết ái lực, liên kết disulfide.
- Các phương pháp cố định enzym không thuận nghịch: gắn enzym bằng liên kết đồnghóa trị với chất mang, bắt giữ enzym vào khuôn gel, tạo vi nang bao, giữ enzym bằng màng siêu lọc.
Thực hiện cố định enzym Cyclodextrin glucanotranferase (CGTase) lên alginat bằng phương pháp hấp phụ và bắt giữ vào khuôn gel (enzym không khuyếch tán ra khỏi mạng lưới khuôn gel được nhưng cơ chất và sản phẩm có thể đi qua). CGTase là enzym xúc tác phản ứng chuyển hóa tinh bột (và các chất tương tự) thành α-, β- hay γ- cyclodextrin (gồm 6, 7 và 8 đơn vị glucose).
Tính hàm lượng và hiệu suất protein cố định bằng phương pháp tạo phức màu giữa protein và thuốc thử Bradford, sau đó đo độ hấp thu ở λ = 595 nm. Dựng đường chuẩn sự thay đổi độ hấp thu của các mẫu thử protein chuẩn theo nồng độ. Từ đó, tính được lượng protein ban đầu, lượng protein không cố định và lượng protein cố định dựa vào độ hấp thu của chúng và đường chuẩn.
Hoạt tính CGTase cố định được xác định bằng cách tính số µmol β-cyclodextrin do CGTase tạo ra trong 1 phút từ maltosedextrin ở điều kiện xác định. Lượng cyclodextrin tính trên sự hấp thu và làm mất màu của nó đối với phenolphtalein. Dùng phương pháp đo độ hấp thu để dựng đường chuẩn độ hấp thu theo nồng độ cyclodextrin, và từ đường chuẩn có thể xác định lượng cyclodextrin tạo thành trong mẫu thử xác định hoạt tính enzym.
a.
3.2. Kết quả