Đường chuẩn BSA
Bảng 3.1. Thông số đường chuân BSA
Ống nghiệm Nồng độ BSA (mg/ml) OD OD (hiệu chỉnh đường nền bằng ống 0) Hình 3.1.
Hàm lượng protein
Bảng 3.2. Hàm lương protein cua enzym thô và tinh chế
Mẫu
Enzym ban đầu Enzym CĐ theo bắt giữ Enzym CĐ theo bắt giữ Enzym CĐ theo phụ Enzym CĐ theo hấp phụ
OD595 nm của enzym ban đầu được đo 2 lần và có giá trị lần lượt là 0,5950 và 0,6088 => OD 595 nm tb/enzyme ban đầu =
=> Từ phương trình bậc 2 của đồ thị đường chuẩn BSA ta có được hai nghiệm ứng với nồng độ protein lần lượt là 1,9385 mg/ml và 0,4854 mg/ml
=> Chọn nồng độ 0,4854 mg/ml vì giá trị này nằm trong khoảng tuyến tính của đồ thị Lượng protein có trong 1 ml enzym :
Promg protein/ml = n* x = 100 * 0,4854 = 48,54 (mg/ml)
Lượng protein trong mẫu:
mprotein ban đầu = m = Promg protein/ml x Vcố định = 48,54 x 1 = 48,54 (mg)
OD595 nm của enzym cố định không theo bắt giữ được đo 2 lần và có giá trị lần lượt là 0,5971 và 0,5959
=> Từ phương trình bậc 2 của đồ thị đường chuẩn BSA ta có được hai nghiệm ứng với nồng độ protein lần lượt là 1,9443 mg/ml và 0,4796 mg/ml
=> Chọn nồng độ 0,4796 mg/ml vì giá trị này nằm trong khoảng tuyến tính của đồ thị
Tuy nhiên vì lượng mẫu hút từ dịch gộp theo phương pháp bắt giữ ban đầu trong bài thực tập là 800 µl nhiều hơn gấp 16 lần lượng mẫu hút từ enzym ban đầu (50 µl) => nồng độ enzym khơng cố định theo bắt giữ là 0 , 4796 16 = 0,0299 (mg/ml)
Lượng protein có trong 1 ml enzym :
Promg protein/ml bắt giữ = n* x = 5 * 0,0299 = 0,1499 (mg/ml)
Lượng protein trong mẫu dịch gộp theo phương pháp bắt giữ
mprotein không cố định bắt giữ= m1 = Promg protein/ml bắt giữ x Vgộp = 0,1499 x 42 = 6,2948 (mg)
Lượng protein cố định : mpr cố định bắt giữ = m – m1 = 42,2452 (mg)
Hiệu suất cố định protein: H% = mpr cố định / mpr ban đầu =42,2452 / 48,54 = 87,03% OD595 nm của enzym cố định không theo hấp phụ được đo 2 lần và có giá trị lần lượt là 0,6581 và 0,6525
=> OD 595 nm tb/enzyme ban đầu =
=> Từ phương trình bậc 2 của đồ thị đường chuẩn BSA ta có được hai nghiệm ứng với nồng độ protein lần lượt là 1,8789 mg/ml và 0,5449 mg/ml
=> Chọn nồng độ 0,5449 mg/ml vì giá trị này nằm trong khoảng tuyến tính của đồ thị
Tuy nhiên vì lượng mẫu hút từ dịch gộp theo phương pháp bắt giữ ban đầu trong bài thực tập là 800 µl nhiều hơn gấp 16 lần lượng mẫu hút từ enzym ban đầu (50 µl) => nồng độ enzym không cố định theo bắt giữ là 0 ,5449 16 = 0,0341 (mg/ml)
Lượng protein có trong 1 ml enzym :
Promg protein/ml hấp phụ = n* x = 10 * 0,0341 = 0,3406 (mg/ml)
Lượng protein trong mẫu dịch gộp theo phương pháp hấp phụ
mprotein không cố định hấp phụ= m2= Promg protein/ml hấp phụ x Vgộp = 0,3406 x 39 = 13,2819 (mg)
Lượng protein cố định : mpr cố định hấp phụ = m – m2 = 35,2581 (mg)