3.3.1 Quá trình nuôi vỗ cá bố mẹ
Cá bố mẹ sau khi được lựa chọn sẽ được thả vào 4 ao (diện tích mỗi ao từ 1000-1500m2) với mật độ thả là 45-50kg/100m2, tỉ lệ đực cái là 2 cá đực và 1cái.
Thức ăn sử dụng cho quá trình nuôi vỗ có hàm lượng protein từ 32-36% và cho ăn lượng thức ăn mỗi ngày bằng 1,5 % trọng lượng cơ thể, ngoài ra còn phải bổ sung thêm các vitamin. Đặc biệt giai đoạn cuối của quá trình nuôi vỗ
thì lượng thức giảm còn 1% cơ thể cá một ngày nhưng lượng protein phải tăng lên, trong giai đoạn này cần bổ sung thêm chất béo cần thiết cho quá trình tạo trứng.
Cá bố mẹ khi được nuôi vỗ cần được tiến hành kiểm tra để chọn thời điểm cho cá đẻ chính xác. Công việc kiểm tra cần làm:
Cân do vòng bụng hoặc chiều dài cá bằng thước dây để theo dõi sự phát triển của buồng trứng và đo chỗ lớn nhất trên thân cá.
Dùng que thăm trứng (khoảng 100 trứng) để lấy trứng ra và quan sát về màu sắc trứng, đánh giá mức độ rời và xác định độ đồng đều của trứng.
Quan sát độ béo của cá để điều chỉnh lượng thức ăn.
Đánh số cá (dùng vật cứng đánh số trên đầu), dùng số chẵn cho cá cái và số lẻ cho cá đực, hoặc có thể cắt vi mỡ để để đánh dấu cá cái.
3.3.2 Chọn cá bố mẹ để tiến hành cho sinh sản nhân tạo
Chọn cá cái: Chọn cá khỏe mạnh không dị hình, dị tật, bụng to, mềm lỗ sinh dục có màu hồng, hơi lồi.
Chọn cá đực: Chọn cá khỏe mạnh không dị hình, dị tật, vuốt nhẹ thấy có có tinh màu trắng sữa chảy ra.
Cá bố mẹ được chọn có khối lượng từ 3,5-10kg/con.
3.3.3 Kỹ thuật kích thích cá tra sinh sản
Sử dụng 2 hai loại kích dục tố là HCG (Việt Nam) và HCG (Trung Quốc) với tổng liều từ 5000, 5500 và 6000UI thông qua 3-4 lần tiêm.
Vị trí tiêm: có thể tiêm vào dưới vây ngực hoặc dọc hai bên cơ lưng.
a. Thí nghiệm sử dụng kích dục tố HCG (Việt Nam):
Thí nghiệm được chia ra làm 3 nghiệm thức với nghiệm thức 1 là sử dụng HCG với tổng liều là 5000UI/kg cá cái, nghiệm thức 2 là sử dụng HCG với tổng liều là 5500UI/kg cá cái và nghiệm thức 3 là sử dụng HCG với tổng liều là 6000UI/kg cá cái. Mỗi nghiệm thức được lập lại 5 lần.
b. Thí nghiệm sử dụng kích dục tố HCG (Trung Quốc)
Thí nghiệm được chia ra làm 3 nghiệm thức với nghiệm thức 1 là sử dụng HCG với tổng liều là 5000UI/kg cá cái, nghiệm thức 2 là sử dụng HCG với tổng liều là 5500UI/kg cá cái và nghiệm thúc 3 là sử dụng HCG với tổng liều là 6000UI/kg cá cái. Mỗi nghiệm thức được lập lại 5 lần.
3.3.4 Xác định thời điểm vuốt trứng và kỹ thuật thụ tinh trứng
a. Xác định thời điểm vuốt trứng
Sau khi cá được tiêm xong sẽ được thả vào bồn composide, cung cấp nước mới và oxy đầy đủ.
Sau lần tiêm cuối cùng 8-9 tiếng có thể kiểm tra thời điểm rụng trứng của cá để chuẩn bị vuốt trứng cá.
Trước khi vuốt trứng cá cần kiểm tra tinh trùng cá đục và bảo quản trong dung dịch immobilizing (NaCl 9g + TRISbase 2g pH=7 + 0,5ml HCl + 1000ml nước cất) và giữ lạnh ở 4-60C, nhưng thời gian bảo quản không quá 24 giờ. Bắt cá cái vào băng ca, lau khô nước và tiến hành vuốt dọc theo hai bên lườn bụng cá. Trong quá trình vuốt trứng nếu thấy trứng có các hiên tượng sau đây thì nên dừng việc vuốt trứng lại để có biện pháp xử lý:
Trứng chảy ra không đều dính thành từng cục thì ngưng lại chờ thêm 15-20 phút mới vuốt.
Trứng rụng nhưng không vuốt ra được do ống dẫn trứng bị tắc (do quá trình thăm trứng mạch máu bị vỡ). Để khắc phục tình trạng này có thể dùng tay vuốt ngược trở lên phía đầu cá khoảng 15-20 lần sau đó vuốt xuôi trở lại thì trứng có thể ra.
b. Kỹ thuật thụ tinh
Trứng được vuốt vào dụng cụ khô và sạch, sau đó bắt cá đực vuốt tinh trực tiếp vào (cứ 1ml tinh dịch đậm dặc có thể thụ tinh cho 100-150g trứng tức là tương đương với 120.000-200.000 trứng) và dùng lông gà khuấy đều khoảng 1-2 phút. Trộn trứng với dung dịch thụ tinh ( 3 g ure + 4g muối NaCl)/lít nước đã chuẩn bị trước. Tiếp tục khuấy đều trứng với dung dịch thụ tinh trong thời gian khoảng 5-10 phút. Sau đó khử dính với dung dịch Tamin 0.5 %o theo tỷ lệ
1:1 trong thời gian 2-3 phút, chắt bỏ dịch, sau đó rửa bằng nước thường. Làm như vậy 2-3 lần cho tới khi hết dính cho trứng vào hệ thống bình Jar ấp.
3.3.5 Kỹ thuật ấp trứng
Trứng sau khi được thụ tinh và khử dính sẽ được cho vào hệ thống ấp bình Jar với mật độ ấp là 300g-400g trứng/8lit nước (350.000-450.000 trứng/8lit nước). Cung cấp oxy trong suốt quá trình ấp để cho phôi phát triển, tạo điều kiện cho trứng nổi lơ lửng trong nước như dùng dòng nước chảy liên tục.
Chế độ thay nước: lưu lượng nước chảy qua bình ấp trung bình 1-1,5lit/phút. Như vậy sau khoảng 5-6 phút nước sẽ được thay thế hoàn toàn.
3.3.5 Một số chỉ tiêu theo dõi trong kỹ thuật cho cá tra sinh sản nhân tạo
Số trứng thụ tinh - Tỷ lệ trứng thụ tinh (%) = Số trứng quan sát - Thời gian nở: từ lúc cá đẻ đến lúc trứng nở. Số trứng nở - Tỷ lệ nở (%) = Số trứng thụ tinh
- Sức sinh sản tuyệt đối = Số trứng có trong buồng trứng cá cái.
Số lượng trứng sinh sản - Sức sinh sản thực tế (hạt/kg cá cái) =
Khối lượng cá cái
- Thời gian hiệu ứng thuốc: là thời gian từ lúc tiêm liều quyết định đến lúc cá đẻ (cá tiêm nhiều liều), là thời gian từ lúc tiêm kích dục tố đến lúc cá đẻ (cá tiêm 1 lần).
- Thời gian hết noãn hoàn: từ lúc trứng nở đến khi cá hết noãn hoàng. - Thời gian phát triển phôi: từ lúc trứng thụ tinh đến khi cá hết noãn hoàn.
CHƯƠNG IV
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Kết quả của quá trình nuôi vỗ
Qua các lần kiểm tra trong khoảng thời gian nuôi vỗ từ tháng 1 – 6/2009 đã bắt gặp tuyến sinh dục của cá tra ở nhiều giai đoạn thành thục khác nhau. Về đặc điểm hình thái tuyến sinh dục của cá tra cũng tương tự như các giai đoạn thành thục của các loài cá nói chung mà O.F.Xakun và N.A.Buskaia đã mô tả năm 1968.
Trong thời gian đầu của quá trình nuôi vỗ, cá chủ yếu là tích lũy vật chất để tăng trọng và tích lũy lipid để đảm bảo cho việc tổng hợp năng lượng của mô sinh sản và tuyến sinh dục. Do đó ở thời kì này tuyến sinh dục thường chưa phát triển và buồng trứng chủ yếu là ở giai đoạn I. Càng về sau của quá trình nuôi vỗ tuyến sinh dục càng phát triển và các sản phẩm của tuyến sinh
dụcngày càng hoàn thiện hơn. Trong quá trình nuôi vỗ, khoảng 15 ngày thì thì kéo cá lên kiểm tra một lần. Cá cái thì dùng que thăm trứng để lấy trứng ra và quan sát giai đoạn phát triển của buồng trứng còn cá đực thì phải mổ ra để xác định sự phát triển của buồng tinh. Quá trình thành thục của buồng trứng cá tra trong khoảng thời gian nuôi vỗ từ 1-5/2009 được thể hiện một cách cụ thể qua bảng sau:
Bảng 4.1: Tỉ lệ các giai đoạn thành thục của cá tra từ tháng 1- 6/2009
Kết quả bảng 4.1 cho thấy, tuyến sinh dục của cá cái phát triển từ tháng 1 đến tháng 5. Ở tháng 1 tuyến sinh dục chủ yếu là ở giai đoạn I-II (chiếm tỉ lệ 100%). Giai đoạn thành thục Tháng 1/2009 (%)
Vào tháng 2, tuyến sinh dục đã có sự phát triển, thể hiện là tuyến sinh dục đã có chuyển sang giai đoạn III, tuy nhiên tỉ lệ cá có tuyến sinh dục ở giai đoạn III là rất thấp chỉ là 7%.
Riêng tháng 3, cá có thể bắt đầu sinh sản nhưng với tỉ lệ thấp, điều này được thể hiện khi cá có tuyến sinh dục ở giai đoạn IV nhưng chiếm tỉ lệ thấp chỉ là 8%.
Đến tháng 4, tuyến sinh dục đã phát triển mạnh, vì tuyến sinh dục của cá đã chuyển khá mạnh sang giai đoạn IV và V. Tới tháng 5, đã có sự thay đổi đáng kể giữa các giai đoạn trong quá trình thành thục ( giai đoạn I-II chỉ còn 21%, trong khi đó giai đoạn III là 43% và giai đoạn IV là 36%). Tới tháng thứ 6 thì tuyến sinh dục cá chủ yếu nằm ở giai đoạn III và IV, điều này cho thấy đã vào mùa vụ cá sinh sản. Từ những nhận định trên ta thấy vào tháng 4, tháng 5 là đã bắt đầu vào mùa vụ sinh sản của cá tra.
4.2. Kết quả kích thích sinh sản
Sau 5 tháng tiến hành nuôi vỗ thì đàn cá tra đã thành thục và được tiến hành cho sinh sản bằng biện pháp dùng hai loại kích dục tố HCG (HCG (Việt Nam) và HCG (Trung Quốc)) để kích thích gây rụng trứng.
Đã sử dụng phép tiêm với 4 lần tiêm (gồm 2 liều dẫn (mỗi lần 500UI/kg cá cái), 1 liều sơ bộ 1500UI/kg cá cái và 1 liều quyết định từ 2500UI –
3500UI/kg cá cái) ứng với từng nghiệm thức. Với phép tiêm nhiều lần nhằm thúc đẩy mức độ thành thục của buồng trứng cá cái và tiến tới rụng trứng. Kết quả sử dụng kích dục tố được thể hiện là qua mỗi lần tiêm thì đường kính tế bào trứng tăng lên.
Bảng 4.2: Đường kính trứng cá tra qua các lần tiêm kích dục tố
Thời điểm tiêm kích dục tố HCG Đường kính trứng (mm)
Trước khi tiêm 0,65 ± 0,017 Tiêm liều dẫn 1
Qua bảng 4.2 ta thấy qua mỗi lần tiêm thì đường kính trứng tăng dần và đạt giá trị cực đại là 1,02 mm (đây là đường kính trứng chưa trương nước).
4.2.1 Kết quả kích thích sinh sản bằng kích dục tố HCG (Việt Nam)
Thí nghiệm kích thích sinh sản cá tra bằng kích dục tố HCG (Việt Nam) được chia làm 3 nghiệm thức với các tổng liều là 5000UI, 5500UI và 6000UI. mỗi nghiệm thức được lập lại 5 lần.
Bảng 4.3: Kết quả kích thích HCG (Việt Nam)
Kết quả ở bảng 4.3 cho thấy khối lượng trứng thụ ở nghiệm thức 6000UI/kg cá cái là cao nhất (84,8g), ở 5500UI/kg cá cái cao thứ 2 (81,5) và thấp nhất là 5000UI/kg cá cái (39,6), điều này được giải thích như sau: liều 5000UI chưa đủ gây rụng trứng hoàn toàn hoặc là vào thời điểm tiêm buồng trứng của cá có tỉ lệ thành thục chưa cao. Từ khối lượng trứng thu đã cho ta thấy được sức sinh sản của nghiệm thức 6000UI là cao nhất (142554 hạt/kg), và thấp nhất là nghiệm thức 5000UI (65787 hạt/kg).
Khi so sánh về thời gian hiệu ứng thuốc ta thấy được khi liều lượng HCG tăng lên thì thời gian hiệu ứng thuốc cũng được rút ngắn.
Các chỉ tiêu
Liều lượng HCG (UI/kg cá cái) Các chỉ tiêu
5000UI 5500UI 6000UI Số lượng (con)
SSS (Hạt/kg cá cái) 180000 160000 140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 0
5000UI 5500UI 6000UI Nghiệ m thức
Biểu đồ 4.1: So sánh SSS ở các nghiệm thức ứng với liều lượng 5000UI, 5500UI và 6000UI
Qua biểu đồ 4.1 ta thấy sức sinh sản ở nghiệm thức 5000UI là thấp nhất và có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức 5500UI và nghiệm thức 6000UI. Ở nghiệm thức 5500UI và nghiệm thức 6000UI tuy sức sinh sản của nghiệm thức 5500UI co thấp hơn sức sinh sản của nghiệm thức 6000UI nhưng sự khác biệt đó không có ý nghía thống kê.
Biểu đồ 4.2 cho ta thấy tỉ lệ thụ tinh của nghiệm thức 5000UI là thấp nhất (76,8%) và tỉ lệ thụ tinh của nghiệm thức 5500UI là cao nhất (84,7), còn tỉ lệ thụ tinh của nghiệm thức 6000UI có tỉ lệ thụ tinh cao thứ hai (80,7). Tuy nhiên sự khác biệt trên không có ý nghĩa về mặt thống kê. Tỉ lệ nở ở nghiệm thức 5000UI là thấp nhất (67,7) và có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức 5500UI và 6000UI. Tỉ lệ nở ở nghiệm thức 5500UI (81,64) thấp hơn so với nghiệm thức 6000UI (83,44), tuy nhiên sự khác biệt này không có ý nghĩa thống kê.
Tỉ lệ TT & nở (%) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 TL thụ tinh TL nở 0
5000UI 5500UI 6000UI Nghiệm thức
Bi ểu đồ 4.2: So sánh tỉ l ệ thụ tinh và tỉ l ệ nở ở các nghi ệm thức ứng với li ều l ượng
5000UI, 5500UI và 6000UI
2.2.2 Kết quả kích thích sinh sản bằng kích dục tố HCG (Trung Quốc)
Thí nghiệm kích thích sinh sản cá tra bằng kích dục tố HCG (Trung Quốc) cũng được chia làm 3 thí nghiệm với các tổng liều là 5000UI, 5500UI và 6000UI. mỗi nghiệm thức được lập lại 5 lần.
Kết quả ở bảng 4.4 cho thấy khối lượng trứng thu của nghiệm thức với tổng liều là 5000UI là thấp nhất (39,6g) so với hai nghiệm thức với tổng liều là 5500UI và 6000UI. Điều này được giải thích là vì ở liều lượng 5000UI chưa gây sự rụng trứng hoàn toàn.
Khi so sánh về thời gian hiệu ứng cho thấy không có sự khác biệt ro ràng nhưng có thể nhận thấy rằng khi liều lượng HCG tăng lên thì thời gian hiệu ứng thuốc cũng cũng được rút ngắn lại. Các chỉ tiêu về tỉ lệ nở không có sự khác biệt giữa ba thí nghiệm với lần lượt các giá trị là 78,52%, 80,08%, 80,1% và về tỉ lệ thụ tinh thụ tinh của nghiệm thức 5500UI và 6000UI là tương đương nhau với các giá trị lần là 78,88%, 80,94%. Từ những kết quả nhận định trên cho ta thấy khi dùng HCG kích thích cá sinh sản thì tổng liều từ 5500UI – 6000UI là có hiệu quả hơn cả.
Bảng 4.4: Kết quả kích thích HCG (Trung Quốc) SSS (hạt/kg cá cái) 250000 200000 150000 100000 50000
0 5000UI 5500UI 6000UI Nghiệm thức
Bi ểu đồ 4.3: So sánh SSS ở các nghi ệm thức ứng với li ều l ượng 5000UI, 5500UI và 6000UI
Các chỉ tiêu
Liều lượng HCG (UI/kg cá cái) Các chỉ tiêu
5000UI 5500UI 6000UI Số lượng (con)
Qua biểu đồ 4.3 ta thấy sức sinh sản ở nghiệm thức 5000UI là thấp nhất và có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức 5500UI và nghiệm thức 6000UI. Ở nghiệm thức 5500UI và nghiệm thức 6000UI tuy sức sinh sản của nghiệm thức 5500UI co thấp hơn sức sinh sản của nghiệm thức 6000UI nhưng sự khác biệt đó không có ý nghía thống kê.
Tỉ lệ TT & nở (%) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 TL thụ tinh TL nở
5000UI 5500UI 6000UI Nghiệm thức
Biểu đồ 4.4: So sánh tỉ lệ thụ tinh và tỉ lệ nở ở các nghiệm thức ứng với liều lượng
5000UI, 5500UI và 6000UI
Kết quả ở biểu đồ 4.4 cho thấy tỉ lệ nở ở cả ba nghiệm thức tuy có sự khác biệt không đáng kể, cụ thể là ở thí nghiệm 5000UI (78,52%), 5500UI (80,08%) và 6000UI (80,1%) nhưng sự khác biệt này không có ý nghĩa trong thống kê. Ở tỉ lệ thụ tinh có sự khác biệt giữa ba nghiệm thức. Nghiệm thức 5000UI (67,34) và nghiệm thức 5500UI (72,88) tuy là có sự khác biệt nhưng không có ý nghĩa trong thống kê. Nghiệm thức 5500UI (72,88) và nghiệm thức 6000UI (80,94) có sự khác biệt nhưng không có ý nghĩa trong thống kê. Riêng nghiệm thức 5000UI (67,34) và thí nghiệm 6000UI (80,94) có sự khác biệt rõ rệt và ý nghĩa trong thống kê.
4.2.3 So sánh kết quả kích thích sinh sản giữa HCG (Việt Nam) và HCG (Trung Quốc) Trung Quốc) SSS (Hạt/kg cá cái) 250000 200000 150000 HCG (Việt nam) 100000 50000 0 HCG (Trung Quốc)
5000UI 5500UI 6000UI Nghiệm thức
Biể u đồ 4.5: So sánh SSS khi dùng HCG (Việt Nam) với HCG (Trung Quốc)
Qua biểu đồ 4.5 cho thấy sức sinh sản của khi sử dụng HCG (Trung Quốc) ở nghiệm thức 5000UI, 5500UI và 6000UI đều cao hơn khi sử dụng HCG (Việt Nam). Cụ thể là ở nghiệm thức 5000UI, sức sinh sản khi sử dụng HCG (Việt Nam) là 65787 hạt/kg còn khi sử dung HCG (Trung Quốc) là 83987 hạt/kg. Ở nghiệm thức 5500UI và 6000UI khi sử dụng HGC (Việt Nam) thì sức sinh sản lần lượt là 121860 hạt/kg và 142253 hạt/kg, còn ở nghiệm thức 5500UI và 6000UI khi sử dụng HGC (Trung Quốc) thì sức sinh sản lần lượt là 153380 hạt/kg và 166476 hạt/kg. Từ những nhận định trên ta có thể kết luận là hiệu quả kích thích sinh sản trên cá tra của HCG (Trung Quốc) là cao hơn HCG