Số lượng tế bào trong 1 mL mẫu nghiên cứu: N = [(a/b) x 400/0,1] x 103 x 10n
a: số lượng tế bào nấm men trong 5 ô vuông lớn (80 ô vuông nhỏ). b: số ô vuông nhỏ trong 5 ô vuông lớn.
400: tổng số ô vuông nhỏ trong ô trung tâm.
0,1: thể tích dịch tế bào (tính bằng mm3) chứa trên ô trung tâm. 103: số chuyển mm3 thành mL.
10n: độ pha loãng mẫu.
12.Xác định hàm lượng puerarin
Hàm lượng puerarin được xác định theo phương pháp của Zhao et al., 2014) nhưng có điều chỉnh.
Hàm lượng puerarin trong nguyên liệu: Sử dụng sóng siêu âm để trích ly puerarin trong ngun liệu (bột sắn dây) theo phương pháp của Wu et al. (2011) dưới điều kiện tối ưu: nồng độ ethanol 71,35%, thời gian trích ly 49,08 phút, tỷ lệ ngun liệu:dung mơi: 21,72 (mL/g), ở tần số 40 kHz. Mẫu sau khi trích ly được pha lỗng và xác định hàm lượng puerarin.
Hàm lượng puerarin trong dịch thủy phân: dịch đường thu được sau quá trình thủy phân sẽ được lọc qua giấy lọc membrane (0,45 μm), pha loãng và xác định hàm lượng puerarin.
Sử dụng thiết bị HPLC để phân tích hàm lượng puerarin có trong mẫu. Mẫu trước khi bơm vào thiết bị HPLC sẽ được lọc qua đầu lọc Syringe Filter (đường kính 13 mm, kích thước lỗ lọc 0,45 μm). 10 μL dịch được bơm vào thiết bị HPLC (Hitachi, Nhật Bản) với hệ thống bơm tự động. Sử dụng cột sắc ký C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm), pha động gồm hỗn hợp methanol:nước (55:45) với tốc độ dịng chảy 0,8 mL/phút và đo ở bước sóng 250 nm để xác định hàm lượng puerarin. ( �������� ��) = � � � � � � � � 1000 A: Nồng độ puerarin suy ra từ đường chuẩn (μg/mL) V: Thể tích dịch lọc (mL)
n: Độ pha loãng
g: Khối lượng mẫu (g)
Bảng PL 4: Xây dựng đường chuẩn puerarinỐng nghiệm Puerarin 10 µg/mL Ống nghiệm Puerarin 10 µg/mL (mL) Ethanol 70 (mL) Nồng độ puerarin(µg/mL) 0 0 5 0 1 1 4 2 2 2 3 4 3 3 2 6 4 4 1 8 5 5 0 10
13. Phương pháp đánh giá cảm quan theo TCVN 3215-79
Phương pháp cảm quan cho điểm theo mức độ yêu thích
Các mẫu được thực hiện theo trật tự ngẫu nhiên và được mã hóa bằng 3 chữ số, người thử thử nếm từng mẫu theo thứ tự từ trái sang phải và cho biết mức độ yêu thích của họ đối với từng mẫu theo thang điểm Hedonic từ 1 đến 5 vào phiếu đánh giá cảm quan. Các mức độ yêu thích sẽ tăng dần từ 1 đến 5 (1 – khơng thích nhiều, 2 – khơng thích, 3 – thích, 4 – thích nhiều, 5 – thích rất nhiều). Số lượng cảm quan viên là 10 người. Mỗi mẫu sẽ ứng với một phiếu đánh giá (phụ lục 2.1).
Phương pháp cho điểm theo tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 3215 – 79
Các mẫu được thực hiện theo trật tự ngẫu nhiên và được mã hóa bằng 3 chữ số, người thử thử nếm từng mẫu theo thứ tự từ trái sang phải và cho biết mức độ yêu thích của họ đối với từng mẫu với các chỉ tiêu màu sắc, mùi, vị, trạng thái đã được quy định trong bảng hướng dẫn đánh giá chất lượng sản phẩm (phụ lục PL 5) theo thang điểm từ 0 đến 5 vào phiếu đánh giá cảm quan. Các mức độ chất lượng sẽ tăng dần từ 0 đến 5. Số lượng cảm quan viên là 10 người. Mỗi mẫu sẽ ứng với một phiếu đánh giá (phụ lục PL 5).
Bảng PL 5: Bảng điểm đánh giá cảm quan theo TCVN 3215 – 79
Chỉ
tiêu Trọngsô Điểm Yêu cầu
5 Sản phẩm trong, không đục, màu vàng rơm đẹp
Độ trong, màu sắc
4 Sản phẩm trong, không đục, màu vàng nhạt
0,8 32 Sản phẩm trong, nhưng hơi đục, màu vàng nhạtSản phẩm hơi đục, màu vàng rơm nhạt.
1 Sản phẩm đục, màu vàng không đặc trưng. 0 Sản phẩm đục, màu bẩn, sản phẩm bị hỏng.
5 Sản phẩm thơm dịu, hài hồ, có mùi thơm đặc trưng của sắndây – dứa, thoáng mùi rượu. 4 Sản phẩm có mùi thơm nhẹ, đặc trưng của sắn dây – dứa,thơm mùi rượu tương đối hài hoà.
Mùi 1,2 3 Sản phẩm có mùi thơm của sắn dây - dứa, hơi nồng, khơngđược hài hồ, khó nhận ra mùi. 2 Sản phẩm còn mùi thơm của sắn dây – dứa, mùi nồng, khơnghài hồ. 1 Sản phẩm ít thơm mùi sắn dây – dứa, mùi rượu nồng và hăng. 0 Sản phẩm có mùi lạ, khó chịu của sản phẩm bị hỏng
5 Sản phẩm có vị chua - ngọt, hài hồ, đậm đà, hậu vị kéo dài. 4 Sản phẩm có vị tương đối hài hồ, dễ chịu, hậu vị vừa phải.
Vị 2,0 3 Sản phẩm thiếu vị đậm đà, hơi chua, hậu vị yếu. 2 Sản phẩm có vị chua ít ngọt, hậu đắng.
1 Sản phẩm có vị chua gắt, đắng, khơng ngọt. 0 Sản phẩm có vị chua gắt, đắng gất, vị chát.
Phụ lục 2: CÁC BẢNG SỐ LIỆU THỐNG KÊ 1. Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất
ANOVA Table for Duong khu by Nong do co chat
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Between groups 3557.27 4 889.316 27.40 0.0000
Within groups 324.51 10 32.451
Total (Corr.) 3881.78 14
Multiple Range Tests for Duong khu by Nong do co chat
Method: 95.0 percent LSD
Nong do co chat Count Mean Homogeneous Groups
16 3 94.79 X
14 3 108.04 X
12 3 116.99 XX
8 3 119.557 X
10 3 141.673 X
2. Ảnh hưởng của pH đến hàm lượng đường khử tạo thành
ANOVA Table for Duong khu by pH
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Between groups 5252.47 4 1313.12 34.21 0.0000
Within groups 383.889 10 38.3889
Total (Corr.) 5636.36 14
Multiple Range Tests for Duong khu by pH
Method: 95.0 percent LSD
pH Count Mean Homogeneous Groups
7 3 104.757 X
5 3 131.327 X
6.5 3 137.737 X
5.5 3 149.243 X
6 3 160.007 X
3. Tối ưu hóa q trình thủy phân dưới tác dụng của β-amylase
Analysis of Variance
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Model 8482.19 9 942.465 288.72 0.0000
Residual 114.25 35 3.26429
Total (Corr.) 8596.44 44
Analysis of Variance for Duong khu
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
A:Nhiet do 214.421 1 214.421 82.96 0.0001 B:Thoi gian 78.1974 1 78.1974 30.25 0.0015 C:Nong do 226.544 1 226.544 87.65 0.0001 AA 4685.43 1 4685.43 1812.79 0.0000 AB 0.00811133 1 0.00811133 0.00 0.9571 AC 168.089 1 168.089 65.03 0.0002 BB 541.46 1 541.46 209.49 0.0000 BC 53.2249 1 53.2249 20.59 0.0039 CC 3423.98 1 3423.98 1324.74 0.0000 blocks 12.4515 2 6.22573 2.41 0.1706 Lack-of-fit 86.2908 27 3.19596 1.24 0.4278 Pure error 15.5079 6 2.58465 Total (corr.) 8596.44 44 R-squared = 98.8158 percent
R-squared (adjusted for d.f.) = 98.5113 percent Standard Error of Est. = 1.60768
Mean absolute error = 1.2153
Durbin-Watson statistic = 2.0407 (P=0.3997) Lag 1 residual autocorrelation = -0.0252818
The StatAdvisor
Duong khu = -520.813 + 21.5708*Nhiet do + 16.9202*Thoi gian + 2.8513*Nong do - 0.205667*Nhiet do^2 +
0.00129995*Nhiet do*Thoi gian + 0.0187132*Nhiet do*Nong do - 1.74789*Thoi gian^2 - 0.052651*Thoi gian*Nong do - 0.0439538*Nong do^2
Optimize Response
Goal: maximize Duong khu Optimum value = 160.225
Factor Low High Optimum
Nhiet do 45.0 65.0 54.3402
Thoi gian 2.0 6.0 4.23627
Nong do 20.0 60.0 41.4627
Mơ hình khi lược bỏ tương tác của nhiệt độ-thời gian
Multiple Regression - Ham luong duong khu
Dependent variable: Ham luong duong khu Independent variables: Nhiet do Nong do Thoi gian Nhiet do*Nhiet do Nong do*Nong do Thoi gian*Thoi gian Nhiet do*Nong do Nong do*Thoi gian
Standard T
Parameter Estimate Error Statistic P-Value
CONSTANT -521.099 17.632 -29.5541 0.0000 Nhiet do 21.576 0.598832 36.0301 0.0000 Nong do 2.8513 0.185576 15.3646 0.0000 Thoi gian 16.9917 1.20152 14.1418 0.0000 Nhiet do*Nhiet do -0.205667 0.00535282 -38.4222 0.0000 Nong do*Nong do -0.0439538 0.00133821 -32.8453 0.0000
Thoi gian*Thoi gian -1.74789 0.133821 -13.0614 0.0000
Nhiet do*Nong do 0.0187132 0.00257141 7.2774 0.0000
Nong do*Thoi gian -0.052651 0.0128571 -4.09511 0.0002
Analysis of Variance
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Model 8482.18 8 1060.27 334.07 0.0000
Residual 114.258 36 3.17384
Total (Corr.) 8596.44 44
R-squared = 98.6709 percent
R-squared (adjusted for d.f.) = 98.3755 percent Standard Error of Est. = 1.78153
Mean absolute error = 1.26565
Durbin-Watson statistic = 1.79296 (P=0.2245) Lag 1 residual autocorrelation = 0.0912349
The StatAdvisor
The output shows the results of fitting a multiple linear regression model to describe the relationship between Ham luong duong khu and 8 independent variables. The equation of the fitted model is
Ham luong duong khu = -521.099 + 21.576*Nhiet do + 2.8513*Nong do + 16.9917*Thoi gian - 0.205667*Nhiet do*Nhiet do - 0.0439538*Nong do*Nong do - 1.74789*Thoi gian*Thoi gian + 0.0187132*Nhiet do*Nong do - 0.052651*Nong do*Thoi gian
4. Ảnh hưởng của pH đến hàm lượng puerarin tổng hợp được
ANOVA Table for puerarin by pH
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Between groups 4.37591 4 1.09398 19.54 0.0001
Within groups 0.559733 10 0.0559733
Total (Corr.) 4.93564 14
Multiple Range Tests for puerarin by pH
Method: 95.0 percent LSD
pH Count Mean Homogeneous Groups
6 3 6.31 X
4.5 3 6.84333 X
5.5 3 7.1 X
5 3 7.75 X
5. Tối ưu hóa q trình tổng hợp puerarin dưới tác dụng của BSMA
Analysis of Variance
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Model 1.01646 9 0.11294 90.54 0.0000
Residual 0.0436594 35 0.00124741
Total (Corr.) 1.06012 44
Analysis of Variance for Puerarin
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
A:Nhiet do 0.075208 1 0.075208 82.90 0.0001 B:Thoi gian 0.00102704 1 0.00102704 1.13 0.3283 C:Nong do 0.0213786 1 0.0213786 23.56 0.0028 AA 0.149055 1 0.149055 164.29 0.0000 AB 0.000873813 1 0.000873813 0.96 0.3643 AC 0.00382704 1 0.00382704 4.22 0.0858 BB 0.413573 1 0.413573 455.85 0.0000 BC 0.0452395 1 0.0452395 49.86 0.0004 CC 0.428437 1 0.428437 472.23 0.0000 blocks 0.00147624 2 0.000738121 0.81 0.4868 Lack-of-fit 0.0367397 27 0.00136073 1.50 0.3230 Pure error 0.00544353 6 0.000907254 Total (corr.) 1.06012 44 R-squared = 96.0209 percent
R-squared (adjusted for d.f.) = 94.9977 percent Standard Error of Est. = 0.0301207
Mean absolute error = 0.0246634
Durbin-Watson statistic = 2.17873 (P=0.5727) Lag 1 residual autocorrelation = -0.0901671
The StatAdvisor
This pane displays the regression equation which has been fitted to the data. The equation of the fitted model is Puerarin = 1.59074 + 0.129549*Nhiet do + 0.32109*Thoi gian + 0.197767*Nong do - 0.00116001*Nhiet do^2 -
0.000426667*Nhiet do*Thoi gian + 0.000357167*Nhiet do*Nong do - 0.0483066*Thoi gian^2 + 0.00614*Thoi gian*Nong do - 0.00786672*Nong do^2
Optimize Response
Goal: maximize Puerarin Optimum value = 7.49238
Factor Low High Optimum
Nhiet do 45.0 65.0 57.4755
Thoi gian 2.0 6.0 4.05185
Nong do 10.0 20.0 15.4575
Mơ hình khi lược bỏ tương tác của nhiệt độ-thời gian, nhiệt độ-nồng độ
Multiple Regression - Puerarin
Dependent variable: Puerarin Independent variables: Nhiet do Nong do Thoi gian Nhiet do*Nhiet do Nong do*Nong do Thoi gian*Thoi gian Nong do*Thoi gian
Standard T
Parameter Estimate Error Statistic P-Value
CONSTANT 1.38994 0.356865 3.89488 0.0004
Nhiet do 0.133199 0.0119716 11.1263 0.0000
Nong do 0.217411 0.0137666 15.7926 0.0000
Thoi gian 0.297624 0.0270309 11.0105 0.0000
Nong do*Nong do -0.00786672 0.000434504 -18.1051 0.0000
Thoi gian*Thoi gian -0.0483066 0.00271565 -17.7882 0.0000
Nong do*Thoi gian 0.00614 0.00104365 5.88322 0.0000
Analysis of Variance
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Model 1.01176 7 0.144537 110.58 0.0000
Residual 0.0483603 37 0.00130703
Total (Corr.) 1.06012 44
R-squared = 95.4382 percent
R-squared (adjusted for d.f.) = 94.5752 percent Standard Error of Est. = 0.0361529
Mean absolute error = 0.0259845
Durbin-Watson statistic = 2.28017 (P=0.7633) Lag 1 residual autocorrelation = -0.140872
The StatAdvisor
The output shows the results of fitting a multiple linear regression model to describe the relationship between Puerarin and 7 independent variables. The equation of the fitted model is
Puerarin = 1.38994 + 0.133199*Nhiet do + 0.217411*Nong do + 0.297624*Thoi gian - 0.00116001*Nhiet do*Nhiet do - 0.00786672*Nong do*Nong do - 0.0483066*Thoi gian*Thoi gian + 0.00614*Nong do*Thoi gian