5. ứng dụng của ph−ơng pháp sắc ký lỏng-khối phổ
5.3 Phân tích các aflatoxin bằng ph−ơng pháp LC-MS
Các aflatoxin là các chất độ đ−ợc sinh ra bởi các chất mốc. Chúng trở nên nổi tiếng qua sự lây nhiễm dẫn đến kết quả chết một khối l−ợng lớn cây trồng ở n−ớc Anh vào năm 1960. Chất mốc (Aspergillus) sinh ra các aflatoxin trên các nhóm cây trồng nh− lạc và ngô sẽ gây hại cho sức khoẻ con ng−ời. Các aflatoxin cũng là nguyên nhân gây ung th− ở con ng−ời, vì thế việc phân tích các aflatoxin rất quan trọng đối với vệ sinh an tồn thực phẩm.
Hình 5.7. Cấu trúc của các aflatoxin
Từ cấu trúc và sự phân cực của các aflatoxin việc phân tích thơng th−ờng sử dụng sắc ký lỏng tốc độ cao với cột pha th−ờng và detectơ quang. Tuy nhiên, ví dụ d−ới đây mơ tả việc phân tích các aflatoxin sử dụng ph−ơng pháp LC-MS với cột pha đảo (điều kiện phân tích ở bảng 5.3). Ph−ơng pháp ACPI (Atmospheric-Pressure Chemical Ionization, ion hoá hoá học ở áp suất khí quyển) đ−ợc sử dụng cho phép phân tích bởi các aflatoxin t−ơng đối ít phân cực mặc dù chúng chứa nhiều phân tử oxy. Hình 5.8 chỉ ra các sắc đồ khối l−ợng của các aflatoxin điển hình B1, B2, G1 và G2, cịn hình 5.9 cho thấy phổ khối của mỗi thành phần.
Bảng 5.3. Điều kiện phân tích LC-MS của các aflatoxin G2, G1, B2 và B1
Cột : Shimazu Shim-pack VP-ODS (2,0 mml.Dx150mm)
Pha động A : n−ớc Pha động B : metanol
Ch−ơng trình gradient : 20%B (0 phút) -> 80%B (16 phút) oC Tốc độ dòng : 0,2 mL/phút Nhiệt độ cột : 40 Thể tích bơm mẫu :10 uL oC Nhiệt độ cực dò : 400 Điện áp cực dò : +4.5 kV (chế độ APCI-positive) Dịng khí s−ơng mù : 2,5 L/phút Điện áp DEFs : +50 V Điện áp CDL : -20 V : m/z 100-500 (1.0 sec/scan) Vùng quét
Hình 5.8. Các sắc đồ khối l−ợng của các aflatoxin điển hình
APCI là ph−ơng pháp ion hố mềm, mỗi aflatoxin nhận phân tử thêm một proton (protonated molecular) vào nh− ở pic cơ bản. Phổ khối l−ợng của dãy các aflatoxin G cũng chỉ ra mảnh ion decacboxyl hóa từ phân tử thêm một proton. Khi mảnh ion này phản xạ dù vòng E là một lacton hoặc một xeton, vẫn có thể nhận dạng đ−ợc các thành phần của họ aflatoxin.
Ph−ơng pháp LC-MS là một ph−ơng pháp phân tích nhanh, phát hiện nhạy và định l−ợng đ−ợc. Ph−ơng pháp này đ−ợc sử dụng cho mục tiêu nhận dạng các pic thành phần cũng nh− các pic khác của các aflatoxin (đ−ợc mô tả trong LC-MS Application Data Sheet No 023).
Hình 5.9. Phổ khối l−ợng của các aflatoxin G2, G1, B2 và B1