Mẫu cá tra nguyên liệu (Cá tra fillet) được mua từ siêu thị Metro Cần Thơ (Địa chỉ: Lộ 91B nối dài – Phường Hưng Lợi – Quận Ninh Kiều – TP. Cần Thơ) được xay nhuyễn và bảo quản ở nhiệt độ -200C.
Cá nguyên liệu
Chuẩn bị mẫu
Lây nhiễm
Q1 Q2
20
Tiến hành thí nghiệm
Mẫu sau khi chuẩn bị xong sẽ được gây nhiễm với Doxycycline ở nồng độ biết trước (250ppb), để yên trong 5 phút và sau đó sẽ được tiến hành khảo sát 2 qui trình để xác định hiệu suất thu hồi.
Qui trình chiết tách
Chuẩn bị hóa chất
Chuẩn bị dung dịch đệm McIlvaine (pH = 4.0 ± 0.05)
Dung dịch A: hòa tan 28,4 g Na2HPO4 khan bằng nước cất trong bình định mức có dung tích la 1000 mL. Định mức tới vạch.
Dung dịch B: hòa tan 21,0 g acid xitric bằng nước cất trong bình định mức. Định mức tới vạch
Cho từ từ 625 mL dung dịch A vào 1000 mL B. Điều chỉnh pH = 4.0 (± 0.05) bằng cách cho từng giọt NaOH 0,1 M (Sử dụng pH kế để xác định pH).
Chú ý: Dung dịch bền trong vòng 1 tuần ở nhiệt độ phòng.
Chuẩn bị dung dịch McIlvaine – EDTA buffer
Hòa tan 60,5 g EDTA vào 1625 mL dung dịch McIlvaine.
Chú ý: Dung dịch bền trong vòng 1 tuần ở nhiệt độ phịng.
Chuẩn bị dung mơi rửa giải trong chiết tách pha rắn SPE
Hòa tan 1,26 g acid oxalic bằng methanol trong bình định mức 1000 mL. Định mức tới vạch
Tách chiết mẫu
Qui trình chiết tách
1. Cân 2,00 g (±0,05) mẫu cá đã được xay nhuyễn cho vào ống ly tâm
15mL thứ 1. Thêm 7 mL dung dịch đệm McIlvaine – EDTA vào ống ly tâm. Sau đó ta đem mẫu đi vortex trong 1 phút; lắc ngang trong 15 phút, tốc độ 300 vòng/phút; ly tâm 15 phút ở tốc độ 4000 vòng/phút, nhiệt độ 250C.
2. Gạn dịch trong ống thứ 1 cho vào ống ly tâm thứ 2. Cho thêm 7 mL
dung dịch đệm McIlvaine – EDTA ống thứ 1. Tiếp tục đem mẫu đi vortex trong 1 phút; lắc ngang trong 15 phút, tốc độ 300 vòng/phút; ly tâm 15 phút ở tốc độ 4000 vòng/phút, nhiệt độ 250C rồi lại gạn dịch chiết cho vào ống ly tâm thứ 2.
3. Đem ống ly tâm thứ 2 (Chứa dịch chiết 2 lần) đi ly tâm 15 phút ở tốc
21
Làm sạch mẫu
4. Hoạt hóa cột Sep – Pak C18 bằng 6 mL methanol và 6 mL nước cất.
loại bỏ dung dịch chảy qua cột.
5. Cho dịch chiết trong ống ly tâm thứ 2 vào cột, loại bỏ dịch chiết chảy
qua cột.
Chú ý: Không được để cho cột bị khô giữa 2 giai đoạn chuẩn bị cột và làm sạch dịch chiết, điều chỉnh cho dịch ra khỏi cột thành từng giọt.
6. Cho 5 mL nước cất chảy qua cột, loại bỏ dung dịch chảy qua cột. Làm khô cột bằng khơng khí sạch trong vịng 2 phút.
7. Rửa giải các chất kháng sinh nhóm Tetracyclin bằng cách cho 5mL
Acid oxalic – Methanol chảy qua cột, thu dịch ra khỏi cột vào ống nghiệm thủy tinh 10 mL.
22 Sơ đồ tóm tắt qui trình chiết tách