CHƯƠNG 3: PCR XÁC ĐỊNH GEN KHÁNG KHÁNG SINH ĐỐI VỚI LOÀI Streptococcus pneumoniea
34 SVTH: Thị Nhi, Thị Nhung, Khánh Phương, Ngọc Sinh lớp 10SH
- Lấy mẫu: trong tường hợp bệnh nhân có sốt cao, nghi viêm màng não, viêm phổi cấp, dùng bơm kim tiêm vơ khuẩn lấy ít nhất 3ml máu tĩnh mạch cho ngay vào bình canh thang não-tim (brainheart infusion) hay thioglycolate theo tỷ lệ 1 phần máu 10 phần canh thang, hoặc sử dụng chai cấy máu do các hãng thương mại pha chế sẵn.
Chú ý: Động tác và quá trình lấy máu, cấy máu phải đảm bảo thật vô khuẩn trong một quy trình kín. Tốt nhất kim lấy máu được nối trực tiếp vào bình mơi trường qua một ống cao su hay plastic vơ khuẩn. sát trùng vị trí lấy máu bằng cồn iot.
- Nuôi cấy và phân lập [5, 6]:
+Phế cầu khuẩn cũng là một vi khuẩn rất nhạy cảm và dễ chết, vì vậy tốt nhất các bệnh phẩm nên được chuyển về phịng thí nghiệm trong vịng 2h, hoặc khơng q 6h, và có thể giữ ở nhiệt độ 4-80C trong vịng 24h. nếu q trình ln chuyển bệnh phẩm từ 2-4h thì bệnh phẩm có thể được cấy ngay hoặc tăng sinh trước trong canh thang (tryptocasein soya hoặc canh thang não- tim) 2h ở 370C. Nếu thời gian chuyển bệnh phẩm từ 4-8h, bệnh phẩm nên được ủ trong canh thang ít nhất là 2h rồi mới sang thạch máu 5%.
+ Một số môi trường nuôi cấy phát hiện phế cầu khuẩn:
Thạch máu 5% có Gentamycin [5µg/ml]: mơi trường này chỉ cho phế cầu khuẩn phát triển.
Thạch máu 5% % khơng có Gentamycin: tìm phế cầu, liên cầu, tụ cầu và một số trực khuẩn gram âm.
Thạch máu thỏ 7% phát hiện cả phế cầu và H.influenzae.
Môi trường đặc hiệu để phát hiện Streptococcus pneumoniea đó là: mơi trường thạch máu 5% Gentamycin [5µg/ml]
Ủ trong điều kiện mơi trường 370C, có 5%CO2 từ 18-24h. Nếu khơng có tủ ấm CO2, đặt các hộp lồng vào chng thủy tinh kín và đốt 1 ngọn nến, khi nến tắt cũng tạo được khí trường có CO2, sau đó đặt chng vào tủ ấm 370C Sau 18-24h, quan sát trên môi trường thạch máu thấy các khuẩn lạc của phế cầu khuẩn nhỏ 0.5-1.5 mm, có vỏ nhày ướt, có xu hướng lõm giữa, có quầng tan huyết màu xanh (kiểu tan huyết α) cấy thuần lại trên một đĩa thạch máu khác, ủ ấm ở 370C/ 5% CO2 trong 18h. Ngày tiếp theo, làm thêm các thử nghiệm sau để khẳng định (nếu chỉ thấy một loại khuẩn lạc thì khơng cần cấy thuần mà có thể làm ln các bước khẳng định).