CHƯƠNG 3: PCR XÁC ĐỊNH GEN KHÁNG KHÁNG SINH ĐỐI VỚI LOÀI Streptococcus pneumoniea
35 SVTH: Thị Nhi, Thị Nhung, Khánh Phương, Ngọc Sinh lớp 10SH
Các thử nghiệm xác định:
Thử nghiệm Optochin (nhạy cảm với optochin)
Thử nghiệm tan trong muối mật (Bile solubility)
Thử nghiệm ngưng kết trên phiến kính
- Tiêu chuẩn chẩn đốn xác định vi khuẩn Streptococcus pneumoniae [4]:
+ Hình thể khuẩn lạc trên mơi trường thạch máu 5% (có hay khơng có gentamycin):trịn, nhỏ, dẹt, khơng màu, và có xu hướng lõm ở giữa (nhưng có ‘đỉnh’ khi quan sát sớm hơn 14 gi ờ nuôi cấy),mơi trường ni cấy xung quanh khuẩn lạc có quầng tan huyết α.
+ Hình thể vi khuẩn: hình lưỡi mác hay ngọn nến, nối đơi giống hình cặp kính, cũng có thể đứ ng đơn hay tạo chuỗi ngắn, bắt màu Gram dương (xanh tím) nhưng phải.
+ Nhạy cảm optochin: đường kính vịng vơ khuẩn ≥ 14mm.
Hoặc: ít nhạy cảm với optochin (đường kính vịng vơ khuẩn 9-13mm) nhưng tan trong muối mật cũng kết luận là phế cầu khuẩn.
Nuôi tăng sinh để xác định khả năng kháng kháng sinh của Streptococcus
pneumoniea: ta tiến hành nuôi trong môi trường thạch máu 5% có chứa
Gentamycin và đồng thời bổ sung thêm kháng sinh đo vịng vơ khuẩn sàng lọc được các loại kháng sinh kháng Streptococcus pneumoniae ( đó là: penicillin và
Macrolide).
Chú ý: chủng vi khuẩn Streptococcus pneumoniae sẽ không phát triển được trong điều kiện: + Môi trường thạch máu không đảm bảo chất lượng (máu lỗng ít hồng cầu, để lâu, lở mỏng). + Bảo quản bệnh phẩm không đúng cách. Bệnh phẩm để lâu mới xử lý.
III. Cách xác định kiểu hình kháng kháng sinh của chủng Streptococcus pneumoniae:
Sau khi đã sàng lọc được loại kháng sinh kháng Streptococcus pneumoniae (penicillin và
Macrolide) thì ta tiến hành xác định kiểu hình kháng sinh.
Ở đây ta thí nghiệm với kháng sinh Erythromycin và Clindamycin Có 2 cách để xác định kiểu hình kháng kháng sinh đó là: