- Erlen 500ml - Máy khuấy từ - Ống sinh hàn
- Máy lọc chân không - Tủ sấy
Phương pháp
Biến tính bằng kiềm: cho 50 g bentonite tinh chế vào 150 ml dung dịch NaOH 5% trong erlen 500 ml, đặt trên máy khuấy từ điều chỉnh nhiệt độ 600C, lắp hệ thống sinh hàn, nhiệt kế, khuấy liên tục trong khoảng thời gian 4 giờ. Sau đó lọc
hỗn hợp bằng máy lọc chân không thu được phần sét, rửa sét bằng nước cất. Sấy
khô sét thu được ở 1200C trong 2 giờ, nghiền sản phẩm và rây trên rây cỡ 100 µm. Bột thu được là bentonite-NaOH 5%.
Biến tính bằng nhiệt: cân 50g bentonite tinh chế, sấy ở 1500C trong 4 giờ, thu
được bentonite-nhiệt.
Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình biến tính: nồng độ axit, loại axit được đánh giá sơ bộ bởi phân tích nhiễu xạ tia X và khả năng hấp phụ vi khuẩn E.coli.
3.4. Phương pháp định lượng vi sinh vật [4] Dụng cụ và hóa chất Dụng cụ và hóa chất - Erlen 500ml - Đĩa petri - Ống nghiệm - Pipet Pastuer - Nồi hấp tiệt trùng
- Tủ lạnh, tủ sấy, tủ cấy tiệt trùng - Nutrient Broth:
+ Môi trường lỏng dinh dưỡng Nutrient Broth (NB) tiệt trùng, dùng để hoạt
hóa giống.
+ Mơi trường rắn dinh dưỡng Nutrient Agar (NA): bổ sung 1,5% agar vào môi trường NB, tiệt trùng, làm thạch nghiêng giữ giống.
- E.Coli được mua từ phòng gốc giống viện Pastuer, thành phố Hồ Chí Minh. - E.coli được giữ trên thạch nghiêng dinh dưỡng NA, trữ ở 50C. Sau đó vi sinh vật sử dụng sẽ được cấy truyền hàng ngày trong môi trường dinh dưỡng NB, lắc
trong khoảng 10 ÷ 16 giờ.
3.4.1. Xác định trực tiếp số lượng tế bào bằng buồng đếm hồng cầu 3.4.1.1. Cấu tạo buồng đếm hồng cầu 3.4.1.1. Cấu tạo buồng đếm hồng cầu
Buồng đếm hồng cầu là một phiến kính dày hình chữ nhật, giữa là phần lõm phẳng, tại đây có kẻ một lưới gồm 400 hình vng nhỏ có diện tích tổng cộng là
1mm2. Ơ trung tâm được khoanh trịn và có 25 ơ vng lớn; mỗi ô vuông lớn gồm
16 ơ vng nhỏ. Vì thế diện tích một hình vng nhỏ là 1/400mm2
và hình vng lớn hơn là 1/25mm2
.
3.4.1.2. Cách tiến hành
- Đặt lá kính (lamelle) lên khu cực buồng đếm.
- Lắc mạnh dịch huyền phù tế bào, nhỏ một giọt lên bề mặt buồng đếm bằng
pipet Pasteur, tránh tạo bọt khí.
- Đặt buồng đếm vào bàn kính hiển vi và để yên vài phút.
- Chỉnh kính hiển vi, với vật kính x40, tìm mạng ơ đếm ở khu vực buồng đếm. Chỉnh thị trường sao cho một thị trường chứa trọn một ô lớn (4 x 4=16 ô nhỏ).
- Đếm số tế bào hiện diện trong một ô lớn và đếm ít nhất là 5 ơ lớn. Lấy trị số
trung bình và tính tốn kết quả.
3.4.1.3. Cách tính mật độ tế bào.