2.3 PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
2.3.3.3 Phương pháp xác định hàm lượng amylose
và Rodriquez, 1980)
Qui trình phân tích hàm lượng amylose theo 4 bước :
Bước 1: Chuẩn bị hóa chất
- Ethanol 95%
- HCl 30%
- NaOH 1N
- Dung dịch Iode (Iode 20% + KI 2%)
Bước 2: Ly trích mẫu
- Lấy 50mg nội nhũ đã nghiền mịn cho vào ống nhựa 50ml.
- Thêm 0,5ml Ethanol 95%, lắc nhẹ cho tan đều.
- Thêm 9,5ml NaOH 1N, đun sôi trong 10 phút.
- Lắc đều và để qua đêm ở nhiệt độ phòng. Wortex mẫu trước khi hút trích.
Bước 3: Pha lỗng mẫu và đo
- Hút 100ldịch trích cho vào bình định mức 25ml (đối với mẫu thử - mẫu blank, thay dịch trích bằng 100l NaOH 1N).
- Thêm nước cất đến ½ bình và lắc đều. - Thêm 250l HCl 30%, lắc đều.
- Thêm 250ldung dịch KI, lắc đều.
- Thêm nước cất đến vạch định mức, chuyển sang ống nhựa 50ml và lắc đều trước khi cho vào cuvette, đo độ hấp thụ ở bước sóng 580nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả
Đường chuẩn có dạng Y = aX + b Trong đó: Y: Độ hấp thụ OD
X: Lượng amylose có trong mẫu đem đo (mg/ml)
Tính hàm lượng amylose theo cơng thức:
% amylose = 2
X
x100
Tùy theo hàm lượng amylose các giống có thể phân nhóm theo thang đánh giá của IRRI năm 1988 như Bảng 2.3
Bảng 2.3 Hệ thống đánh giá chuẩn hàm lượng amylose cho lúa (IRRI, 1988)
Nhóm Hàm lượng amylose (%) Đặc tính Gạo nếp 0-2 Dẻo Gạo tẻ : Rất thấp 2-9 Dẻo trung bình Thấp 10-20 Dẻo trung bình Trung bình 20-25 Cứng cơm Cao >25 Rất cứng