Kĩ thuật ELISA sandwich có khá nhiều ưu điểm vượt trội: thứ nhất là giảm được nhuộm màu nền và các phản ứng không đặc hiệu do đã loại bỏ được hầu hết các thành phần tạp. Thứ hai phản ứng được thực hiện dễ dàng, KTmột có thể được gắn sẵn trên bề mặt rắn tạo thành các bộ KIT và có thể
thực hiện các chẩn đốn mà trong đó KN khơng thể gắn được lên mặt rắn. Bên cạnh đó kĩ thuật cũng có những nhược điểm riêng, trong đó quan trọng nhất là làm tăng phản ứng chéo do liên kết không đặc hiệu giữa các lớp yếu tố
phát hiện thứ cấp với kháng thể 1.
1.4.4.4. Kỹ thuật ELISA cạnh tranh.
ELISA cạnh tranh là phương pháp ELISA rất hiệu quả cho định lượng các yếu tố hiện diện trong mẫu xét nghiệm với lượng nhỏ. ELISA cạnh tranh sử dụng một lượng KN cùng loại với KN mà ta muốn định lượng trong mẫu (KN cạnh tranh) cho phản ứng miễn dịch với cùng một loại KT đặc hiệu cố định trên mặt rắn, sau đó đo lượng KN cạnh tranh này thông qua hoạt tính
enzyme được liên kết với nó. KN cạnh tranh càng hiện diện nhiều cho biết
E + E E + Sinh màu KT đã biết KN cần tìm KT gắn enzym Cơ chất
loại KN đó trong mẫu càng ít và ngược lại. Có ba biến thể chính của phương
pháp này:
Phương pháp ELISA cạnh tranh bão hòa cân bằng tương đối
Trong phương pháp này KN mẫu và KN cạnh tranh được cho phản ứng cùng lúc với một KT đã cố định. Hai loại KN sẽ phản ứng với KT theo một tỉ
lệ tương ứng với tỉ lệ nồng độ của hai loại KN, từ đó xác định được nồng độ
KT khi đo tỉ lệ KN cạnh tranh còn lại sau phản ứng so với lượng KN sử dụng
ban đầu.
Phương pháp ELISA cạnh tranh bão hòa thứ tự:
Phương pháp này thường được sử dụng hơn phương pháp bão hòa cân
bằng tương đối. Ở phương pháp bão hòa thứ tự KN mẫu được cho phản ứng
trước. Sau đó, một lượng dư KN cạnh tranh được thêm vào để bão hòa lượng KT cịn trống. Hoạt tính enzyme đo đượcsẽ cho biết lượng KN cạnh tranh phản ứng với bao nhiêu KT cịn trống, từ đó tính được lượng KN đã chiếm chỗ KT.
Phương pháp ELISA cạnh tranh ức chế kháng thể:
Thay vì cố định KT lên mặt rắn, người ta cũng có thể cốđịnh KN cạnh
tranh. Đầu tiên, người ta sẽ cho KN cần xác định phản ứng với một lượng KT biết trước. Sau đó, lượng KT cịn lại chưa phản ứng sẽ được phản ứng với KN cạnh tranh, và được cố định lại. Sau bước rửa ta có thể đo lượng KTđã cố định từ đó suy ra lượng KT đã phản ứng với kháng nguyên cần xác định. Bên cạnh việc định lượng KN, phương pháp này cịn có thể sử dụng để so sánh các KN với nhau (hình 1.17)[83].