Chƣơng 3 :KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Kết quả nghiên cứu trên thực nghiệm
3.1.2. Đặc điểm tấm biểu môniêm mạc miệng nuôi cấy
Sau khi nuôi cấy theo phương pháp mảnh biểu mơ, có sự hỗ trợ của lớp tế bào ni là nguyên bào sợi tự thân, từ mỗi thỏ thực nghiệm chúng tôi đã tạo được 2 tấm biểu mô niêm mạc miệng. Sau 2 tuần nuôi cấy, các tấm biểu mơ đều phẳng, phủ kín đáy lồng ni cấy trên nền chất mang là màng ối. Tấm biểu mơ có màu trắng mờ, có tính chất đàn hồi, tách được dễ dàng và nguyên vẹn khỏi đáy giếng nuôi cấy trong thì phẫu thuật.
3.1.2.2. Về vi thể
Quan sát bề mặt tấm biểu mô bằng phương pháp nhuộm Giemsa, các tế bào có hình đa diện phủkín đáy giếng ni cấy, khoảng gian bào hẹp và đều nhau. Quan sát mặt cắt dọc tấm biểu mô bằng phương pháp nhuộm HE thấy tấm biểu mơ phẳng, có 5-7 hàng tế bào, các lớp tế bào trên có xu hướng dẹt dần, khoảng gian bào hẹp, không thấy các tế bào thoi xen lẫn (hình 3.1).
B
Hình 3.1. A. Hình ảnh nhuộm Giemsa của tấm biểu mô nuôi cấy B. Hình ảnh nhuộm H.E. lát cắt đứng dọc của tấm biểu mô nuôi cấy
1. Màng ối; 2. Tấm biểu mơ
1
Dưới kính hiển vi điện tử quét, bề mặt hàng tế bào trên cùng của tấm biểu mơ có nhiều vi nhung mao ngắn chia nhánh (hình 3.2). Dưới hiển vi điện tử xuyên, các tế bào của tấm biểu mô liên kết với nhau bằng các cầu bào tương dài, khoảng gian bào rộng (hình 3.3).
Hình 3.2. Bề mặt tấm biểu mô nuôi cấy dưới hiển vi điện tử quét
Hình 3.3. Liên kết giữa các tế bàocủa tấm biểu mô nuôi cấy
dưới hiển vi điện tử xuyên
1. Tế bào biểu mô; 2. Khoảng gian bào
1
Các tế bào lớp đáy có nhân lớn, màng nhân có những lõm nơng, hạt nhân lớn, bào tương có lưới nội bào có hạt và ti thể phong phú, nhiều đám hạt glycogen. Các tế bào lớp đáy gắn chặt với màng ối bằng các thể bán liên kết (hình 3.4, 3.5).
Hình 3.4. Tế bào lớp đáy của tấm biểu mô dưới hiển vi điện tử xuyên
1. Nhân tế bào; 2. Màng ối; 3. Ti thể
Hình 3.5. Liên kết giữa tấm biểu mô và màng ốidưới hiển vi điện tử xuyên
2 1 3 2 1 3
Định danh tấm biểu mơ ni cấy bằng phương pháp hóa mơ miễn dịch:
Trên các tiêu bản nhuộm hóa mơ miễn dịch phát hiện p63, nhân các tế bào của tấm biểu mô bắt màu nâu sẫm, đặc biệt là nhân các tế bào ở lớp đáy (hình 3.6.A.). Nhuộm phát hiện K3 và K12: K3 và K12 thể hiện yếu ở các tế bào lớp trên đáy (hình 3.6.B.). Nhuộm PAS để phát hiện glycogen và chất nhầy cho thấy: trong bào tương các tế bào lớp dưới có ít glycogen, khơng thấy tế bào tiết nhầy trong tấm biểu mô ni cấy (hình 3.7.).
A
B
Hình 3.6. A. Hình ảnh nhuộm hóa mơ miễn dịch p63 của tấm biểu mơ. B. Hình ảnh nhuộm hóa mơ miễn dịch K3của tấm biểu mơ
1. Tấm biểu mơ; 2. Màng ối
1
2
1
Hình 3.7. Hình ảnh nhuộm P.A.S. tấmBM ni cấy
1. Biểu mô; 2. Màng ối; 3. Glycogen
3.1.3. Kết quả ghép tự thân tấm biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy cho thỏ thực nghiệm