CHƢƠNG 2 : CHẤT LIỆU, ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. CHẤT LIỆU NGHIÊN CỨU
Sinh Hoàng kỳ (Radix Astragali) Quy vĩ (Radix Angelica sinesis) Xích thƣợc (Radix Paenonea rubrea) Xuyên khung (Rhizoma Ligustici wallic)
Đào nhân (Semen Persicae)
Hồng hoa (Flos Carthami) Địa long (Pheretima Asiatica)
100 gam 8 gam 6 gam 4 gam 4 gam 4 gam 4 gam
Các nguyên liệu trong bài thuốc đƣợc dùng dƣới dạng nguyên liệu khô và đạt tiêu chuẩn trong Dƣợc điển Việt Nam IV.
- Dạng bào chế: Bài thuốc đƣợc chuẩn bị và bào chế tại Khoa Dƣợc Bệnh viện Tuệ Tĩnh dƣới dạng cao lỏng toàn phần trong nƣớc.
- Quy trình bào chế: Dƣợc liệu đƣợc cân theo tỷ lệ của bài thuốc, sắc ngập nƣớc trong vòng 1 giờ, lấy nƣớc sắc lần 1, tiếp tục đƣợc sắc lần 2 nhƣ trên. Hòa chung 2 lần sắc để cơ đặc đóng gói mỗi thang 02 túi 150 ml dành cho bệnh nhân nghiên cứu. Nƣớc sắc thuốc trên cũng đƣợc tiếp tục cô thành cao lỏng đạt hàm lƣợng 6g dƣợc liệu /ml dành cho động vật thí nghiệm.
2.1.2. Phƣơng tiện và trang thiết bịnghiên cứu
- Thức ăn nuôi chuột đƣợc cung cấp bởi Học viện Quân y, có năng lƣợng 4200 Kcal/kg, thức ăn giàu chất béo tự chế biến có tham khảo cơng thức của Elizabeth G [83] có năng lƣợng 5200 Kcal/kg, 40% năng lƣợng do chất béo.
Bảng 2.1.Thành phần của thức ăn giàu chất béo
Thành phần Thức ăn thƣờng Thức ăn giàu chất béo Sốlƣợng (g) Năng lƣợng (Kcal) Sốlƣợng (g) Năng lƣợng (Kcal) Protein 20% 20% 20% 10% Carbohydrate 76% 70% 56% 50% Lipid 4% 10% 24% 40%
Năng lƣợng 4200 Kcal/kg 5200 Kcal/kg
- Bơm kim tiêm, bộ canuyn bơm thuốc vào dạ dày chuột. - Dụng cụ cốđịnh chuột để lấy máu chuột
- Lồng chuột và khay sạch lấy nƣớc tiểu chuột
- Máy sinh hóa tự động hiệu A15 của hãng BioSystem (Tây ban Nha) và các loại kít dùng đểđịnh lƣợng chỉ sốsinh hóa
- Kit và máy thửglucose máu One Touch của Johnson & Johnson (Hoa Kỳ) - Streptozocin lọ500 mg và 1000 mg của hãng Sigma-Aldrich (Hoa Kỳ) - Dung dịch đệm Citrat 0,1 M với pH 4,2 để pha thuốc Streptozocin
2.1.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
Nghiên cứu thực nghiệm trên động vật đƣợc thực hiện tại Viện nghiên cứu YDHCT Tuệ Tĩnh từ tháng 6/2012 đến tháng 4/2013, nghiên cứu lâm sàng trên bệnh nhân thực hiện tại Bệnh viện Tuệ Tĩnh thuộc Học viện Y Dƣợc học cổ truyền Việt nam từ tháng 5/2013 đến 1/2014.